K562细胞消减cDNA文库的构建

目的：构建氯化血红素诱导性K562细胞抑制消减cDNA文库，以期鉴定出K562细胞中氯化血红素诱导性表达的珠蛋白合成调节因子cDNA基因。方法：采用不同浓度的氯化血红素诱导培养K562细胞，经联苯胺阳性细胞百分率及血红蛋白浓度分析，选择其最佳诱导浓度。分别提取氯化血红素诱导培养的K562细胞（tester，检测子）和未加诱导剂培养的K562细胞（driver，驱赶子）mRNA，逆转录合成双链cDNA。经两轮消减杂交，两轮PCR扩增后，正向消减的PCR产物与T载体连接，构建K562细胞抑制消减cDNA文库，文库经蓝-白筛选后，纯化阳性克隆质粒，EcoR I酶切及PCR扩增插入片段。结果：以50μmol/L氯化血红素诱导K562细胞，其联苯胺阳性细胞百分率及血红蛋白浓度均达到最大值，故选择50μmol/L氯化血红素诱导培养K562细胞并构建K562细胞抑制消减cDNA文库。文库鉴定证实其阳性克隆中分别含有不同长度的插入片段。结论：成功构建了氯化血红素诱导性K562细胞抑制消减cDNA文库，该消减cDNA文库结合生物信息学（Bioinformatics）分析可用于深入研究K562细胞内氯化血红素诱导性表达基因的结构和功能。     

小型地效翼救助船的外观与内装设计

目的:设计一种小型地效翼救助船,提高海上救援的时效性.方法:将小型地效翼救助船设计为双层底结构,船底设计为U形且有较长的平行中体,机翼设计为双凸翼型.采用救助艇的主船体作为母型,根据母型船资料确定主船体的主尺度,并运用SolidWorks进行外观设计.根据船舶的稳性与船员和伤员的舒适性,确定救助舱室的布置,并利用3DM...     

联合腰麻硬膜外麻醉或全凭静脉麻醉在经皮肾镜碎石术的运用

目的 比较联合腰麻硬膜外麻醉与全凭静脉麻醉在经皮肾镜碎石术中的优缺点.方法 选择肾结石患者共58例为对象.按照患者入院顺序号随机分为C组与T组,各29例.C组采用腰麻硬膜外麻醉,T组采用全凭静脉麻醉.比较两组记录两组入室(T0)、体位改变时(T1)、切皮时(T2)、出手术室(T3)的SBP、DBP、HR、MAP等指标,以及输液量、手术时间、使用麻黄碱例数、麻醉药物使用、体位变化期间及T3时刻后不适发生率.结果 在T1时刻,C组SBP、HR分别为(133.0±17.5)mmHg、(80.7±13.6)次/min,显著高于T组(t=5.078、4.936,P<0.05).在T2时刻,C组SBP和HR分别为(128.7±19.2)mmHg、(72.5±114.6)次/min,均显著高于T组(t=4.673、4.115,P<0.05).T3时刻C组SBP、DBP、MAP分别为(127.4±12.5)mmHg、(73.7±10.3)mmHg、(91.2±10.1)mmHg,均显著低于T组(t=4.287、4.155、4.092,P<0.05).两组手术时间、总输液量、术中使用麻黄碱例数差异无统计学意义(t/c2=0.245、0.461、1.462,P>0.05).C组体位改变后不适率为17.24%,高于T组,但T3时刻后不适率为3.45%,低于T组,差异有统计学意义(c2=5.472、4.062,P<0.05).C组术中需使用利多卡因与布比卡因,但是T组需要术后拔管.结论 腰麻硬膜外麻醉与全凭静脉麻醉在经皮肾镜碎石术中各有优缺点,应结合患者个体情况选择合适的麻醉方案.     

持续性血液净化在肾内科治疗中的临床应用价值

目的研究在肾内科临床治疗中应用持续性血液净化疗法的效果。方法作为此次对比研究观察对象的患者为肾内科急性肾功能衰竭患者(入院治疗时间:2015年2月至2017年2月),总例数为92例,设两个组别,其中一组为有46例患者的对照组(间歇性血液净化),另外一组为同样有46例患者的实验组(持续性血液净化),比较对照组和实验组患者治疗前后的血肌酐和尿素氮。结果治疗前,对照组和实验组患者在血肌酐和尿素氮上无统计学差异(P0.05);治疗后,对照组和实验组患者在血肌酐和尿素氮上存在统计学差异(P0.05),且实验组患者在血肌酐和尿素氮上优于对照组。结论持续性血液净化疗法应用在肾内科,尤其是应用在急性肾功能衰竭的临床治疗中有助于降低血肌酐和尿素氮,有助于维持血液动力学的稳定性,所发挥的治疗作用优于间歇性血液净化疗法,更适宜应用和推广。     

高效液相色谱法测定血清色氨酸

用高效液相色谱法测定血清色氨酸。采用Ｎｏｖａ－ＰＡＫＣ１８柱，０．１ｍｏｌ·Ｌ－１磷酸二氢钾水溶液为流动相，２９５ｎｍ的检测波长，测出线性范围为１．２２３～２４４７．３８１μｍｏｌ·－１，最低检出浓度为０．６１２μｍｏｌ·Ｌ－１，正常人血清色氨酸浓度为４６．６０３±５．１０８μｍｏｌ·Ｌ－１。测定血清色氨酸的时间＜５ｍｉｎ。本法简便、快速、准确、可靠，适用于临床和科研     

K562细胞中氯化血红素诱导性表达基因的研究

目的 鉴定K562细胞中氯化血红素(hemin)诱导性表达基因。方法 分别提取经hemin诱导培养的K562细胞(tester)和未加诱导剂培养的K562细胞(driver)mRNA,逆转录合成双链cDNA。采用抑制性消减杂交（SSH)技术构建正向消减cDNA库。筛选出阳性克隆。PCR扩增阳性克隆插入片段。反向Northern点杂交确定hemin诱导后表达上调的cDNA片段并测序后与GenBank序列进行Blast,同源性比较分析。结果 发现15个cDNA片段在he加n诱导后表达上调,其中大部分与GenBank中已知功能蛋白质的mRNA序列同源,包括珠蛋白epsion l(globinε1),类谷胱甘肽巯基转移酶Omega(GSTTLp28),含硒蛋白X1(SEPX1),磷酸丙糖异构酶(TP11),核糖体蛋白L7(RPL7),核糖体蛋白S13(RPSl3),铁蛋白轻链(ferritin L polypeptide),珠蛋白gamma A(globin Aγ),RAD51同系物C(TSF51C),铁蛋白重链(ferritin L polypeptide),X盒结合蛋白(XBPl)。受hemin诱导性表达的基因克隆中的部分cDNA片段则同源于GenBank中已登录的mRNA序列,但相应蛋白质的功能尚不清楚,包括cDNA DKFZp4341116,假定蛋白HSPCO14及NOLIR2蛋白质。结论 hemin主要诱导K562细胞红系分化、蛋白质合成及代谢相关基因表达,这些发现为hemin诱导造血祖细胞红系分化的差异基因表达及其进一步功能研究提供了综合性信息。     

脑外科昏迷患者留置导尿管整体护理干预体会

目的研究对留置导尿管且处于昏迷状态的脑外科患者采取的整体护理干预方法及效果,总结体会。方法抽选作为研究对象的留置导尿管且处于昏迷状态的106例脑外科患者,分成对照组和实验组,其中对照组为常规护理方案,实验组为整体护理干预方案,从护理满意度和并发症发生率对实验组和对照组的护理效果进行对比观察。结果实验组患者及其家属护理满意度高于对照组患者及其家属护理满意度,实验组患者并发症发生率低于对照组患者并发症发生率,组间存在差异且差异具有统计学意义(P0.05)。结论整体护理干预的实施对于留置导尿管且处于昏迷状态的脑外科患者极其有利,真正做到了将"以患者为本"的理念落实到实际护理中,可以降低相关并发症发生概率,较少会引起患者及其家属的不满,值得推广和应用。     

高效液相色谱法测定血清色氨酸

用高效液相色谱法测定血清色氨酸。采用Ｎｏｖａ－ＰＡＫＣ１８柱，０．１ｍｏｌ．Ｌ＾－１磷桎二氢钾水溶液为流动相，２９５ｎｍ的检测波长，测出线性范围为１．２２３－２４４７．３８１μｍｏｌ．＾－１，最低检出浓度为０．６１２μｍｏｌ．Ｌ＾－１，正常人血清色氨酸浓度为４６．６０４±５．１０８μｍｏｌ．Ｌ＾－１。测定血清色氨酸的时间〈５ｍｉｎ。本法简便、快速、准确、可靠，适用于临床和科研。