人CD48基因转染细胞株的构建

目的克隆人CD48基因,构建稳定表达CD48分子的基因转染细胞株。方法提取人外周血单个核细胞总RNA,通过RT-PCR克隆获得人CD48基因,将人CD48基因重组入逆转录病毒载体pEGZ-term,通过293T细胞的包装获得具有感染力的完整重组病毒载体,进而感染L929细胞,构建稳定表达人CD48分子的基因转染细胞株。结果成功克隆人CD48基因和构建PGEZ/CD48逆转录病毒表达载体,进而成功获得稳定表达人CD48的基因转染细胞株L/CD48。结论成功克隆了人CD48基因及其逆转录表达载体,并构建了稳定表达CD48分子的基因转染细胞株,为探讨CD48生物学功能的研究奠定了物质基础。     

人CD244基因转染细胞株的构建

目的构建稳定表达人CD244分子转基因细胞株。方法通过RT-PCR克隆人CD244基因,将人CD244基因重组入逆转录病毒表达载体pEGZ-Term。将重组逆转录病毒载体pEGZ-Term/CD244和辅助病毒载体用脂质体法共转染包装细胞293T,收集含有完整重组逆转录病毒颗粒的293T细胞培养上清感染L929细胞,筛选获得Zeocin抗性的基因转染细胞。结果成功克隆人CD244基因,并稳定表达人CD244的基因转染细胞株L929/CD244。结论本研究成功构建了稳定表达人CD244的基因转染细胞株,为研究CD244生物学功能奠定了基础。     

Bestatin下调卵巢癌患者外周血Treg细胞的免疫抑制作用

目的探讨氨肽酶N抑制剂Bestatin对肿瘤患者外周血CD4^＋CD25^＋Treg的生物学效应及机理。方法将Bestatin加入PHA刺激新鲜分离的卵巢癌患者外周血Treg细胞的体外培养体系,采用流式细胞术分析Foxp3和CTLA-4的表达。进而分析Bestatin对Treg细胞抑制CD4^＋CD25T细胞活化增殖的影响。结果Bestatin可抑制Treg胞表达Foxp3和CTLA-4,并促进Treg细胞和CD4^＋CD25^＋T细胞的体外共培养体系中T细胞的增殖。结论抑制氨肽酶N可下调Treg细胞的免疫抑制作用,对肿瘤治疗具有潜在应用价值。     

CD137信号下调乳腺癌患者外周血Treg细胞的免疫抑制功能

目的探讨CD137信号对CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（Treg）的生物学效应及机制。方法采用激发型抗人CD137单抗加入PHA刺激的乳腺癌患者外周血T细胞培养体系及Treg细胞培养体系中,利用细胞计数及^3H-TdR掺入法分析T细胞的增殖,流式细胞术分析细胞膜分子和Foxp3表达,ELISA分析细胞因子的分泌。结果CD137分子表达于乳腺癌患者外周血CD4^＋CD25^＋Treg细胞膜;抗人CD137单抗加入PHA活化的乳腺癌患者T细胞培养体系后,T细胞增殖明显增加,Foxp3^＋Treg细胞比例明显下降;激发CD137信号可下调CD4^＋CD25^＋Treg细胞的Foxp3表达,抑制Treg细胞产生TGF-β1和IL-10,以及下调Treg细胞对PHA刺激的CD4^＋CD25^-T细胞增殖的抑制效应。结论CD137信号可抑制Treg细胞的免疫抑制功能,CD137可能是对Treg细胞进行免疫干预的重要靶点。     

痛风石的微观结构及化学成分的测定

目的:探讨人体不同部位痛风石的微观结构及其主要化学成分,为进一步揭示痛风患者的炎症反应机制奠定基础。方法:应用显微镜、扫描电镜等方法对痛风石的微观结构进行观察,并应用扫描电镜能谱分析、X荧光分析、X射线衍射分析等手段对痛风石的主要晶态成分和化学元素进行检测分析。结果:通过H&E染色和扫描电镜对痛风石进行观察,发现其为不规则块状形态,内部呈针形、放射状;对痛风石进行能谱分析,发现其主要元素为C、N、O、Na等;应用X荧光分析对膝、肘、足部位痛风石进行检测,发现其主要元素分别为Cl、S、Ca、P等;通过X射线衍射法检测发现痛风石的主要晶态成份为尿酸钠水合物和尿酸二氢钠水合物。结论:痛风石主要由C、N、O、Na、Ca、Cl、S和P等元素构成,组成化合物主要为尿酸钠水合物和尿酸二氢钠水合物。