采用摩尔消光系数法测定纤维蛋白的方法学评价

血浆纤维蛋白原是血液流变学中一个重要指标,在心脑血管疾病诊断中日益引起重视。目前在测定方法中,当属免疫消浊比浊法,但由于其价格昂贵,操作繁琐,故难以推广应用。笔者等引用路西春等所改进的Macart的方法,在生化仪器上采用摩尔消光系数法并与免疫法对照,认为满意,现介绍如     

尿微量白蛋白ELISA测定法最佳条件的探讨

尿微量白蛋白排出量可反映肾小球损伤的程度,是诊断肾小球肾病的灵敏指标之一,对肾脏损害早期诊断和预后具有重要的意义。我们建立了尿微量白蛋白的竞争酶联免疫(ELISL)测定法,将特异性抗HSA抗体包被在微滴板上,利用酶际抗原与标本中抗原竞争固相抗体的方法来测定抗原。 1 材料与方法     

转化生长因子β调节体外培养人成骨细胞结缔组织生长因子mRNA的表达

目的：观察转化生长因子β对体外培养人成骨细胞结缔组织生长因子mRNA表达的影响。方法：实验在青岛海慈医疗集团检验科完成。选择2005—02／03在青岛海慈医疗集团骨科住院的无其他疾患的骨折患者3例，年龄30～50岁，经患者知情同意后，取其髂骨松质骨，剪碎，Ⅳ型胶原酶消化后，将骨片贴于25cm^2培养瓶，加入MEM培养液约15d后，可见细胞游出，约25d达汇片，胰酶消化，按1&;#215;10^6个细胞接种培养后第2天，换含1g/L BSA MEM培养液继续培养24h后，加入10ng／L转化生长因子β干预培养0，3，6，12，24h，或在转化生长因子β作用峰值时，分别给予不同浓度（0，5，10，25ng／L）干预，抽提总RNA，采用半定量反转录-聚合酶链反应和Northern blot法检测干预后成骨细胞结缔组织生长因子mRNA表达水平。结果：①半定量反转录-聚合酶链反应检测转化生长因子β对体外培养成骨细胞结缔组织生长因子mRNA表达的影响：与0ng／L对照组相比，5,10和25ng／L转化生长因子β干预后结缔组织生长因子mRNA表达水平显著升高（P〈0．01），呈明显剂量依赖关系；10ng／L转化生长因子β干预6h时转化生长因子β上调作用达高峰（P〈0．01），然后下降，至24h时转化生长因子β对结缔组织生长因子的上调作用基本消失（P〉0．05）。②Northern blot法检测转化生长因子β对体外培养成骨细胞结缔组织生长因子mRNA表达的影响：与0ng／L对照组相比，10和25ng／L转化生长因子β干预后结缔组织生长因子mRNA表达水平显著升高（P〈0．01），但无明显剂量依赖关系（P〉0．05）；10ng／L转化生长因子β干预6h时转化生长因子β上调作用达高峰（P〈0．01），然后下降，至24h时转化生长因子β对结缔组织生长因子的上调作用基本消失（P〉0．05）。结论：转化生长因子β可呈剂量依赖性上调人成骨细胞结缔组织生长因子mRNA的表达。     

PCR法快速筛选重组克隆方法的改进

①目的　以PCR法在菌液中快速筛选重组克隆。②方法　提取小鼠巨噬细胞总RNA ,反转录PCR(RT PCR)获得肿瘤坏死因子 α(TNF α)基因片段 ,TA克隆连接质粒载体、转化大肠杆菌JM10 9。在大肠杆菌培养中的不同时间取样测定大肠杆菌A60 0 值及计数。以不同数量的大肠杆菌为模板进行系列PCR扩增 ,获得适宜PCR扩增条件的大肠杆菌数。③结果　以菌液为模板进行PCR能够快速筛选重组体 ,大肠杆菌模板数在 12 5～ 2 5 0个范围内 ,PCR对阳性克隆的扩增可获得良好结果 ;获得常规培养条件下转化大肠杆菌的生长曲线 ,A60 0 值与大肠杆菌计数间存在显著正相关 (r=0 .93,P <0 .0 0 1)。④结论　通过测定大肠杆菌培养液A60 0 值推算大肠杆菌数量 ,以适宜的大肠杆菌模板行PCR法筛选重组克隆 ,快速准确并方便下游操作     

C-反应蛋白检测在急性心肌梗死早期诊断中的价值

C-反应蛋白(CRP)是一种非特异性全身炎性标志蛋白。近年来，其与心血管疾病的关系愈来愈受到关注，多项病理研究证实，炎症在急性冠脉综合征(ACS)的发生、发展过程中有促进作用。有关CRP在ACS诊断治疗中的临床应用价值报道甚少。我们对42例急性心肌梗死(AMI)患者血清中CRP水平进行了检测，旨在探讨其在早期诊断AMI中的临床价值。     

转化生长因子β调节体外培养人成骨细胞结缔组织生长因子mRNA的表达

目的:观察转化生长因子β对体外培养人成骨细胞结缔组织生长因子mRNA表达的影响。方法:实验在青岛海慈医疗集团检验科完成。选择2005-02/03在青岛海慈医疗集团骨科住院的无其他疾患的骨折患者3例,年龄30～50岁,经患者知情同意后,取其髂骨松质骨,剪碎,Ⅳ型胶原酶消化后,将骨片贴于25cm2培养瓶,加入MEM培养液约15d后,可见细胞游出,约25d达汇片,胰酶消化,按1×106个细胞接种培养后第2天,换含1g/LBSAMEM培养液继续培养24h后,加入10ng/L转化生长因子β干预培养0,3,6,12,24h,或在转化生长因子β作用峰值时,分别给予不同浓度(0,5,10,25ng/L)干预,抽提总RNA,采用半定量反转录-聚合酶链反应和Northernblot法检测干预后成骨细胞结缔组织生长因子mRNA表达水平。结果:①半定量反转录-聚合酶链反应检测转化生长因子β对体外培养成骨细胞结缔组织生长因子mRNA表达的影响:与0ng/L对照组相比,5,10和25ng/L转化生长因子β干预后结缔组织生长因子mRNA表达水平显著升高(P<0.01),呈明显剂量依赖关系;10ng/L转化生长因子β干预6h时转化生长因子β上调作用达高峰(P<0.01),然后下降,至24h时转化生长因子β对结缔组织生长因子的上调作用基本消失(P>0.05)。②Northernblot法检测转化生长因子β对体外培养成骨细胞结缔组织生长因子mRNA表达的影响:与0ng/L对照组相比,10和25ng/L转化生长因子β干预后结缔组织生长因子mRNA表达水平显著升高(P<0.01),但无明显剂量依赖关系(P>0.05);10ng/L转化生长因子β干预6h时转化生长因子β上调作用达高峰(P<0.01),然后下降,至24h时转化生长因子β对结缔组织生长因子的上调作用基本消失(P>0.05)。结论:转化生长因子β可呈剂量依赖性上调人成骨细胞结缔组织生长因子mRNA的表达。