系统性红斑狼疮、系统性硬皮病和皮肌炎患者血清sIL-2R和IL-6含量

目的 :研究系统性红斑狼疮 (SLE) ,系统性硬皮病(PSS)和皮肌炎 (DM)患者血清sIL 2R和IL 6在治疗前后含量变化的意义 .方法 :用夹心ELISA法及 3H TdR掺入法检测了临床确诊的结缔组织病 6 0例 (SLE ,PSS ,DM各 2 0例 ) ,并选 30例正常人作对照 .从中选取 30例住院结缔组织病患者 (SLE ,PSS ,DM各 10例 )经临床治愈后 ,采用相同方法检测血清中sIL 2R与IL 6水平的变化 .结果 :sIL 2R ,IL 6与正常对照组相比较高水平的存在于SLE ,PSS ,DM患者血清中 [sIL 2R (kU·L-1) :4 6 6± 198,4 2 1± 192 ,4 12± 174vs118± 5 4 ,P <0 .0 1;2 2 .5± 6 .0 ,2 0 .6± 5 .9,18.8± 4 .0vs9.6± 1.8,P <0 .0 1].SLE伴有肾功能损害患者较不伴肾功能损害者明显升高 [sIL 2R (kU·L-1) :5 99± 12 3vs 4 30±79,P <0 .0 5 ;IL 6 (kU·L-1) :2 5 .1± 6 .5vs 18.2± 4 .6 ,P <0 .0 5 ].患者血清中sIL 2R与IL 6水平呈明显的正相关(r =0 .5 86 ,0 .6 4 3,0 .5 75 ,P <0 .0 5 ) .治疗后较治疗前sIL 2R及IL 6活性水平明显降低 (P <0 .0 5 ) ,但仍然高于正常对照组 (P <0 .0 1) .结论 :SLE ,PSS和DM患者血清sIL 2R和IL 6明显升高 ,两者呈正相关 ,而伴肾功明显损伤者升高更明显 ,治疗后则明显降低 .     

ELISA检测可溶性白细胞介素2受体夹心法的临床应用及其评价

应用双单克隆抗体夹心法ＥＬＩＳＡ对甲型肝炎、肾综合征出血热、小儿呼吸道合胞病毒感染以及肾移植术后患者等血清中可溶性白细胞介素２受体进行了定量检测，并对该方法的敏感性、重复性等参数进行了对比观察。结果表明，该广方法敏感性高、特异性强、重复性好，变异率低于国外同类产品，所检测的临床疾病ＳＩＬ－２Ｒ水平的变化与文献报道相符，并与病情、病程相关性良好，可用于基础和临床免疫学研究。     

人血小板/T细胞活化抗原1(PTA1)亲和层析柱的制备及PTA1/Ig的纯化

目的：制备可用于纯化血小板／Ｔ细胞活化抗原１（ｐｌａｔｅｌｅｔａｎｄＴｃｅｌａｃｔｉｖａｔｉｏｎａｎｔｉｇｅｎ１，ＰＴＡ１）融合蛋白的亲和层析柱，纯化真核表达的ＰＴＡ１／Ｉｇ融合蛋白，以进一步研究ＰＴＡ１的功能及其配体。方法：以硫酸铵及阴离子交换色谱法纯化抗ＰＴＡ１ｍＡｂ，并交联Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ制备ＰＴＡ１亲和层析柱。通过亲和层析法，从ｐＰＴＡ１／Ｉｇ表达载体转染的ＣＯＳ７细胞培养上清中纯化ＰＴＡ１／Ｉｇ融合蛋白，用夹心ＥＬＩＳＡ及ＳＤＳＰＡＧＥ鉴定纯化结果。结果：硫酸铵及阴离子交换色谱纯化后，获得纯度高和活性好的抗ＰＴＡ１ｍＡｂ，用其交联Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ制备ＰＴＡ１亲和层析柱，交联率为９６％。该亲和层析柱可从ｐＰＴＡ１／Ｉｇ转染的ＣＯＳ７细胞上清每１００ｍｌ中，纯化ＰＴＡ１／Ｉｇ融合蛋白约１２６μｇ。结论：制备成功可用于纯化ＰＴＡ１的亲和层析柱，并获得纯化的ＰＴＡ１／Ｉｇ融合蛋白，为进一步研究ＰＴＡ１的功能及鉴定其配体提供了有力手段     

TLSFJM对PMA诱导Jurkat细胞IL—2Ra链基因表达的抑制作用

本文应用原位杂交和双ＭｃＡｂ夹心ＥＬＩＳＡ方法，探讨了来自ＪＭＴ细胞白血病细胞系产生的抑制因子（ＴＬＳＦＪＭ）对ＰＭＡ诱导的Ｊｕｒｋａｔ细胞ＩＬ－２Ｒａ链基因表达的影响。结果表明：ＴＬＳＦＪＭ可明显抑制ＰＭＡ诱导的ｊｕｒｋａｔ细胞ＩＬ－２Ｒａ链ｍＲＮＡ转录，并降低膜表面ＩＬ－２Ｒａ链ｍＲＮＡ转录，并降低膜表面ＩＬ－２Ｒａ链的表达和细胞培养上清中可溶性ＩＬ－２Ｒ（ｓＩＬ－２Ｒ）水平。     

抗重组人肿瘤坏死因子－α单克隆抗体的研制及其初步应用

应用淋巴细胞杂交瘤技术获得１０株抗重组人肿瘤坏死因子－α（ｒＨｕＴＮＦ－α）ＭｃＡｂ。７株ＭｃＡｂ为ＩｇＧ１，２株为ＩｇＧ２ａ，１株为ＩｇＧ２ａ。１０株ＭｃＡｂ与淋巴毒素（ＬＴ或ｒＨｕＴＮＦ－β）、ｒＨｕＩＬ－６和载体菌菌体蛋白均无交叉反应。其中７株ＭｃＡｂ具有中和活性，７株ＭｃＡｂ能识到天然的ＴＮＦ－α。Ｇ１１和Ｅ６ＭｃＡｂ应用ＡＢＣ法免疫组化染色肝病患者组织细胞片得到明确的阳性结果。用２株识别不同表位的ＭｃＡｂ建立了一步夹心ＥＬＩＳＡ法，检测ＴＮＦ－α的敏感性可达到１００ｐｇ／ｍｌ左右。     

可溶性细胞因子受体研究进展

可溶性细胞因子受体（Ｓｏｌｕｂｌｅｃｙｔｏｋｉｎｅｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＳＣＫ－Ｒ）作为细胞因子受体的一种特殊形式参与机体免疫应答与免疫调节。许多ＳＣＫ－Ｒ在血清及其他体液中水平变化与某些疾病的发生、发展密切相关。近年来关于ＳＣＫ－Ｒ的形成机理与多肽链结构、基因表达调控、生物学活性以及应用等方面的研究取得可喜的进展，本文对此进行综述。     

人血小板/T细胞活化抗原PTA1/Ig融合蛋白表达载体的构建、表达及鉴定

目的：获得人血小板／Ｔ细胞活化抗原１（ｐｌａｔｅｌｅｔａｎｄＴｃｅｌａｃｔｉｖａｔｉｏｎａｎｔｉｇｅｎ１，ＰＴＡ１）胞膜外区与人ＩｇＧ１Ｆｃ段融合蛋白，为ＰＴＡ１配体的鉴定及其功能的研究提供有力的工具。方法：针对人ＰＴＡ１ｃＤＮＡ序列设计３段引物，通过反转录、半套式ＰＣＲ方法从活化Ｊｕｒｋａｔ细胞中扩增出ＰＴＡ１胞膜外区基因片段，并将其克隆入融合蛋白表达载体ｐＩＧ中，通过酶切、ＰＣＲ及序列测定鉴定重组表达载体。重组载体通过ＤＥＡＥｄｅｘｔｒａｎ法转染ＣＯＳ７细胞，经夹心ＥＬＩＳＡ及亲和层析、ＳＤＳＰＡＧＥ鉴定融合蛋白的表达及免疫学活性。结果：经序列测定后证实重组表达载体含有正确的ＰＴＡ１胞膜外区序列及剪接供体序列，转染ＣＯＳ７细胞后，通过亲和层析纯化证实融合蛋白的Ｍｒ为８３０００，并能被抗ＰＴＡ１胞膜外区单抗及抗人ＩｇＧＦｃ的单抗同时识别。结论：ｐＰＴＡ１／Ｉｇ融合表达载体的构建及表达成功，为ＰＴＡ１的功能及配体（ＰＴＡ１Ｌ）的研究打下了良好的基础。     

PTA1在人巨核母细胞系HEL细胞和血小板的表达及分布

应用抗人血小板和Ｔ细胞活化抗原１单克隆抗体间接免疫荧光染色和流式细胞仪分析，以及胶体金免疫电镜技术，检测了人巨核母细胞系ＨＥＬ细胞和血小板膜表面ＰＴＡ１分子的表达水平，并对静止与活化血小板膜表面ＰＴＡ１分子的表达和分布进行了比较。     

EB病毒转化的人B淋巴母细胞低密度培养条件的研究

肾综合征出血热(HFRS)患者外周血单个核细胞(PBMC)经 EB 病毒转化为人 B 淋巴母细胞,其培养上清中含 IgM 和 IgG,部分为人抗 HFRS 病毒 IgM 和 IgG。采用含有高浓度白细胞介素6(IL-6)的人纤维母细胞系 CRL1506条件培养液(CM)及~(60)Co 照射 CRL1506饲养细胞对低密度培养的人 B 淋巴母细胞生长、抗体分泌有明显促进作用,并获得单个 B 淋巴母细胞克隆化成功,克隆化后人 B 淋巴母细胞系仍持续分泌抗体。本研究对于克服人单克隆抗体技术中人 B 淋巴母细胞克隆化难、抗体产量低、难于获得特异性单克隆抗体等困难有一定应用价值。