实时荧光定量PCR非特异性分析

聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)因灵敏度高、操作简便在各个领域得到了广泛的应用。然而,伴随其高灵敏度存在的非特异性问题在一定程度上限制了其应用。不同于普通检测方法,该技术的非特异性问题主要由可以指数扩增的引物二聚体(primer dimer,PD)引起。对此,引物设计时使用的中部同序引物对可以从根本上避免PD的产生,从而解决由其引起的非特异性问题。该文从PCR的发展和本质、PCR非特异性产生的原因和应对策略等方面作一总结及分析。     

影响内标双重PCR靶模板检测灵敏度的因素分析

目的在内标双重PCR系统中寻找影响靶模板检测灵敏度的主要因素,并比较不同检测体系的灵敏度。方法针对HBV基因设计普通引物对和中部同序引物对,比较引物二聚体(PD)含量;控制内标基因的Ct值约为30,调整内标引物浓度为10、8、5、2、1μmol/L,比较不同体系的检测灵敏度;控制内标引物的用量不变,分别测定内标基因Ct值在15、20、25、30时的靶模板检测灵敏度。结果中部同序引物PD的Ct值在35以上,普通引物对PD的Ct值在30~33之间;10、8、5、2、1μmol/L浓度的内标引物需要内标模板的浓度分别为5×10~4、5×10~4、5×10~4、5×10~5、5×10~7IU/m L;不同内标引物用量检测灵敏度均为5×10~3IU/m L,仅使用中部同序引物的单重PCR检测灵敏度为5×102IU/m L;内标Ct值在15、20、25、30时靶模板检测的灵敏度分别为5×10~5、5×10~4、5×10~3、5×10~3IU/m L。结论在双重PCR检测体系中,对靶模板检测灵敏度影响最大的因素为内标的模板量,仅使用中部同序引物对的单重PCR具有最高的灵敏度。     

192例视神经脊髓炎谱系疾病患者临床特点及寡克隆区带电泳结果分析

目的 了解视神经脊髓炎谱系疾病（neuromyelitis optica spectrum disease,NMOSD）的临床特点,并分析该疾病寡克隆区带（oligoclonal bands,OCB）结果的特点。方法 对首都医科大学附属北京天坛医院2015—2022年确诊为NMOSD的患者开展临床特点分析,并从年龄、性别、不同伴发疾病组分析OB结果的差异。结果 192例临床确诊为NMOSD的患者女性和男性的比例3.2:1,患者平均发病年龄为（40.56±15.64）岁,男性和女性发病年龄差异无显著性（P=0.1821）;脑脊液蛋白电泳OB(CSF)、血清蛋白电泳OB(S)、鞘内合成SOB(CSF)阳性率分别为53.64%、21.35%、42.19%;血和CSF联合寡克隆区带电泳全阴性患者占比46.35%,有明确鞘内合成者不足一半（42.19%）。不同性别、年龄分组OB(CSF)、OB(S)、SOB(CSF)阳性率无显著性差异（P>0.05）,不同结果分型也无显著性差异（P>0.05）;不同伴发疾病分组中,高血压3级极高危组OB(CSF)、SOB(CSF)阳性率显著提高（P=...     

全身免疫炎症指数和凋亡相关斑点样蛋白对脑卒中诊断的价值研究

目的 探讨全身免疫炎症指数(SII)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)对脑卒中的诊断价值。方法 选取2022年1—9月该院收治的357例脑卒中患者为病例组,同期204例表观健康的体检者为对照组。根据临床诊断将357例脑卒中患者分为脑梗死组(259例)和脑出血组(98例),根据神经功能缺损程度将其分为轻型脑卒中组(156例)和中重型脑卒中组(201例)。根据血常规结果计算SII,采用磁微粒化学免疫发光方法检测血清ASC水平。分析并比较各组ASC水平和SII,以及两指标对不同类型脑卒中的诊断价值。结果 病例组ASC水平、SII明显高于对照组(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果表明,SII(OR=1.002)、ASC(OR=1.780)是脑卒中发病的独立危险因素。中重型脑卒中组ASC水平、SII明显高于轻型脑卒中组,脑出血组ASC水平、SII明显高于脑梗死组(P<0.05)。受试者工作特征曲线分析结果显示,SII和ASC均具有良好的诊断及鉴别诊断效能(P<0.05),当两指标联合应用时,可提高对脑卒中的诊断效能(P<0.05)。结论 SII和ASC可作为脑...     

基于串联质谱标签技术筛选免疫介导性脱髓鞘疾病诊断与鉴别诊断的生物标志物

目的:采用串联质谱标签（TMT）联合液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）筛选免疫介导性脱髓鞘疾病诊断与鉴别诊断的潜在生物标志物。方法:选择首都医科大学附属北京天坛医院2020年1月至2021年1月收治的20例脱髓鞘疾病患者（脱髓鞘组）,包括10例吉兰-巴雷综合征（GBS）患者（GBS亚组）与10例多发性硬化（MS）患者...     

基于稳定元素标记和电感耦合等离子体质谱仪器定量免疫分析方法的建立与应用

目的建立一种基于稳定元素标记和电感耦合等离子体质谱仪器的定量免疫分析方法, 将其应用于血清淀粉样蛋白A(SAA)检测, 并进行性能评价。方法以磁珠作为固相载体, 以元素钬(Ho)作为标记元素, 构建基于双抗体夹心法的免疫检测体系。对磁珠抗体结合比例、元素抗体用量、反应时间等因素进行优化, 确定检测体系最佳反应条件。根据美国临床实验室标准化协会(CLSI)系列文件对检测体系进行方法学确认和性能验证, 具体包括空白检出限(LOB)、线性范围、准确度、特异性、不精密度、干扰实验等。最后收集免疫比浊法检测后SAA血浆样本82份, 采用新建检测体系进行检测, 并对二者的检测结果进行Pearson相关性分析。结果亲水性链霉亲和素和生物素化抗体最佳结合比例为1∶0.15, 元素标记抗体用量为3 μl, 两反应步骤孵育时间分别为40、30 min。新建检测体系LOB为0.6 μg/L, 在0～1 200 μg/L范围内线性相关性良好(R2=0.998 9, P<0.001), 高值样本与低值样本批内精密度分别为9.42%、7.95%, 批间精密度分别为14.56%、13.56%, 回收率为96....