HBD3基因真核表达质粒载体的构建及其体外表达和活性鉴定

目的构建人β防御素3(HBD3)基因真核表达质粒载体,观察其在大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)中的表达,并检测其活性。方法利用RT-PCR方法从牙龈组织中扩增出HBD3基因片段,通过DNA重组技术将基因片段重组于pVIVO1-mcs真核表达质粒载体上,构建成pVIVO1-HBD3重组质粒载体,分别用酶切电泳分析及DNA测序的方法对重组质粒载体进行鉴定。运用jetPEI转染试剂将重组质粒转染BMSCs后,RT-PCR、免疫荧光和蛋白质印迹法检测目的基因的表达。取转染重组质粒的BMSCs无血清上清的浓缩液,采用K-B纸片扩散法进行抗菌活性实验。结果 (1)酶切电泳分析得到相应的目的片段,大小与理论计算值一致,DNA测序证实目的基因序列正确无突变,成功构建真核表达质粒载体pVIVO1-HBD3。(2)RT-PCR和免疫荧光、蛋白质印迹法分别从mRNA和蛋白质2个水平证实转染的BMSCs高表达HBD3。(3)转染重组质粒的BMSCs无血清上清的浓缩液对白色念珠菌、大肠埃希菌、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌产生明显的抑菌环,证实了表达分泌出的HBD3的抗菌活性。结论构建了pVIVO1-HBD3基因真核表达质粒载体,证实其转染BMSCs后基因的表达和活性。     

VEGF165/HBD3双基因共表达真核质粒载体的构建及其体外表达

目的 构建人血管内皮生长因子165(vascular endothelial growth factor,VEGF165) 和人β防御素3 (human beta defensins,HBD3 )双基因共表达真核质粒载体、观察其在293FT细胞中的表达,并检测其活性.方法 利用RT-PCR方法分别从白血病细胞(HL60...     

基因和干细胞疗法修复慢性难愈创伤的研究与应用**◆

背景：许多疾病和因素都会使伤口久治不愈或延迟愈合,基因疗法和干细胞疗法为慢性难愈创伤的治疗提供了新的技术途径。 目的：针对基因疗法和干细胞疗法用于治疗慢性难愈创伤的研究作一综述。 方法：以“gene therapy,stem cell therapy和chronic wound”为检索词,检索Medline数据库(1980/2010-12),文献检索语种限制为英语。将近年发表的针对性强的文章纳入研究范围,同一领域的文献则选择近期发表或权威杂志的文章。排除与基因疗法和干细胞疗法相关性不强、陈旧的文献。结合自身的研究经验和纳入排除标准,对查阅到的最新研究成果详细分析并加以总结概括。 结果与结论：初次检索到267篇文献,严格按照纳入标准,最终将33篇文献纳入研究。基因疗法和干细胞疗法都是新的治疗方法,其相关理论和技术已经成熟,为慢性难愈创伤的治疗提供了新的技术途径,它们的有效运用有望给慢性难愈创伤带来突破性的治疗效果。     

基因和干细胞疗法修复慢性难愈创伤的研究与应用

背景：许多疾病和因素都会使伤口久治不愈或延迟愈合,基因疗法和干细胞疗法为慢性难愈创伤的治疗提供了新的技术途径。目的：针对基因疗法和干细胞疗法用于治疗慢性难愈创伤的研究作一综述。方法：以＂gene therapy,stem cell therapy和chronic wound＂为检索词,检索Medline数据库（1980/2010-12）,文献检索语种限制为英语。将近年发表的针对性强的文章纳入研究范围,同一领域的文献则选择近期发表或权威杂志的文章。排除与基因疗法和干细胞疗法相关性不强、陈旧的文献。结合自身的研究经验和纳入排除标准,对查阅到的最新研究成果详细分析并加以总结概括。结果与结论：初次检索到267篇文献,严格按照纳入标准,最终将33篇文献纳入研究。基因疗法和干细胞疗法都是新的治疗方法,其相关理论和技术已经成熟,为慢性难愈创伤的治疗提供了新的技术途径,它们的有效运用有望给慢性难愈创伤带来突破性的治疗效果。