二十二碳六烯酸改善棕榈酸诱导的C2C12细胞胰岛素抵抗作用

目的 观察二十二碳六烯酸(DHA)对棕榈酸诱导的C2C12细胞胰岛素抵抗的影响.方法 将C2C12细胞诱导分化成熟,加棕榈酸及DHA处理,通过实时聚合酶链反应(real-Time qPCR)及免疫印迹检测C2C12细胞葡萄糖转运体4(GLUT4)、胰岛素受体-β(IR-β)、胰岛素受体底物-1(IRS-1)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、白细胞介素-6(IL-6)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达;谷胱甘肽检测试剂盒检测超氧化物岐化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,荧光分光光度计检测活性氧(ROS);[3H]-2-脱氧-D-葡萄糖检测C2C12细胞葡萄糖摄取量.结果 棕榈酸组与对照组比较,磷酸化胰岛素受体底物-1(P-IRS-1)的表达上调[(2.9±0.3)比(1.1±0.1),P＜0.05];磷酸化胰岛素受体-β(p-IRβ)表达下调[(0.87 ±0.09)比(1.58±0.21),P＜0.05];GLUT4表达下调[(1.1±0.3)比(3.3±0.4),P＜0.05];炎症分子MCP-1、IL-6、iNOS表达明显上升:[MCP-1:(27.2±0.6)比(1.0±0.1),P＜0.001;IL-6:(94.9 ±6.5)比(0.8±0.0),P＜0.001;iNOS:(288.0±15.6)比(1.8±0.6),P＜0.001].C2C12细胞氧化应激标志物ROS升高2.1倍(P＜0.05),SOD、GSH-Px活性分别下降63％及49％(P＜0.05);DHA组与棕榈酸组比较,p-IRS-1的表达下调[(1.3±0.2)比(2.9±0.3),P＜0.05],p-IRβ表达上调[(1.3±0.2)比(0.9±0.1),P＜0.05],GLUT4表达明显升高[(2.8±0.4)比(1.1±0.3),P ＜0.05];炎症分子MCP-1、IL-6、iNOS表达均明显下调[MCP-1:(18.5±0.3)比(27.2 ±0.6),P＜0.001;IL-6:(1.7±0.4)比(94.9±6.5),P＜0.001;iNOS:(5.0±0.9)比(288.0 ±15.6),P＜0.001],氧化应激标志物ROS下降55％(P＜0.05),SOD、GSH-Px活性升高72％及64％ (P ＜0.05).结论 DHA通过激活C2C12细胞的胰岛素信号通路,减少细胞的炎症反应及氧化应激而改善胰岛素抵抗.     

高脂喂养对糖尿病大鼠视网膜转化生长因子-β2及其Ⅱ型受体mRNA表达的影响

目的：探讨高脂喂养的糖尿病大鼠视网膜中转化生长因子β2（TGF-β2）及其Ⅱ型受体（TβRⅡ）mRNA的表达。方法：应用RT-PCR方法检测高脂喂养的糖尿病大鼠中TGF-β2及TβRⅡmRNA的表达水平。结果：糖尿病大鼠TGF-β2mRNA的表达高于非糖尿病大鼠（P〈0．01）；高脂喂养的糖尿病大鼠TGF-β2mRNA的表达高于普通喂养的糖尿病大鼠（P〈0．01）；TβRⅡmRNA的表达水平在非糖尿病大鼠与糖尿病大鼠间，高脂喂养大鼠与普通喂养大鼠间无明显差异。结论：高脂喂养的糖尿病大鼠视网膜中TGFβ2mRNA的表达水平升高。脂代谢紊乱在糖尿病视网膜病变的发生中起作用，其部分机制可能是通过增加TGF-β2的表达来实现的。     

胰岛素基因R46Q突变导致青少年的成人起病型糖尿病一个家系分析

本文报道1个经基因检测确诊为青少年起病的成人型糖尿病（MODY）10型家系。提取先证者外周血DNA,进行特殊类型糖尿病检测包的二代测序。将基因检测结果与遗传学数据库比对,从而发现可疑致病突变,并对先证者亲属相应位点进行Sanger测序验证,结果发现先证者及其两名家系成员于胰岛素基因第2外显子区域发生错义突变c.137G...     

溶血卵磷脂对牛视网膜微血管内皮细胞转化生长因子-β_2及其Ⅱ型受体表达的影响

目的:探讨不同浓度的溶血卵磷脂(LPC)对牛视网膜微血管内皮细胞转化生长因子-β2(TGF-β2)及其Ⅱ型受体表达的影响.方法:原代分离培养牛的视网膜微血管内皮细胞,加入不同浓度的LPC,分别培养6、12、24h,RT-PCR检测TGF-β2 mRNA表达水平,半巢式RT-PCR检测TGF-βⅡ型受体mRNA的表达水平.结果:LPC的浓度为40 μmol/L作用12 h后,TGF.B2 mRNA水平明显高于浓度为20 μmol/L和60 μmol/L.LPC浓度改变对TGF-βⅡ型受体mRNA的表达无明显影响.结论:LPC能调节牛视网膜内皮细胞TGF-β2的表达;LPC对TGF-βⅡ型受体的表达无明显影响.     

吡格列酮预防非肥胖糖尿病鼠胰岛β细胞凋亡的机制研究

目的 探讨吡格列酮预防非肥胖糖尿病小鼠胰岛β细胞凋亡的机制.方法 (1)将4周龄NOD雌鼠分为吡格列酮(21只)及对照(21只)组,分别摄食含0.02％吡格列酮的混合饲料和普通营养饲料.观察52周龄的累积糖尿病发病率.(2)各组取12周龄未发病NOD鼠(n=15)胰腺,HE染色观察胰岛炎;TUNEL+SABC法检测胰岛β细胞凋亡.(3)ELISA法测定血清、脾细胞培养上清IFN-γ和IL-4水平及培养脾细胞核因子PPARγ、NF-κB活性.结果 (1)30、52周龄时,吡格列酮及对照组发病率分别为57.1％和76.2％ 、76.2％和90.5％(均P＞0.05);15周龄时,吡格列酮及对照组发病率分别为4.8％和33.3％(P=0.045).(2) 12周龄时,吡格列酮组正常胰岛和胰岛周围炎比例(14.73％,26.02％)高于对照组(5.69％,15.72％;均P＜0.01),胰岛内炎比例(59.25％)则低于对照组(78.59％,P＜0.01);吡格列酮组胰岛β细胞凋亡率(6.17％±3.62％)低于对照组( 10.62％±4.43％,P=0.008).(3)12周龄NOD鼠吡格列酮组血清IFN-γ水平[(561.05 ±78.61) pg/ml]显著低于对照组[(666.43±28.42) pg/ml,P=0.045];在培养的脾细胞上清中,吡格列酮组IFN-γ水平[(605.84±65.60) pg/ml]显著低于对照组[(692.20±44.98)pg/ml,P=0.041].(4)在培养的脾细胞中,吡格列酮组PPARγ活性(0.06±0.01)高于对照组(0.03±0.01,P=0.013),NF-κB活性(0.03±0.01)较对照显著降低(0.08±0.01,P=0.001).结论 吡格列酮活化PPARγ,抑制NF-κB活性,血清和脾细胞上清IFN-γ下降,Th细胞向Th1方向分化减少,NOD鼠胰岛炎减轻、胰岛β细胞凋亡减少.     

溶血卵磷脂对牛视网膜微血管内皮细胞凋亡及细胞内钙离子浓度的影响

目的: 探讨溶血卵磷脂(LPC)对牛视网膜微血管内皮细胞(BRECs)凋亡及细胞内钙离子浓度的影响.方法: 原代分离培养牛视网膜微血管内皮细胞,加入不同浓度的LPC,分别培养6 h、12 h、24 h,通过吖啶橙染色在荧光显微镜下观察细胞凋亡,流式细胞检测细胞凋亡率,F2000荧光光度计测细胞内钙离子浓度,并计算游离钙浓度.结果:(1)60 μmol/L LPC作用牛视网膜微血管内皮细胞24 h后, 细胞凋亡率明显高于LPC浓度为20 μmol/L及40 μmol/L时;(2) LPC浓度从20 μmol/L增加到60 μmol/L过程中,细胞内游离钙离子浓度明显增加,而且细胞内游离钙离子浓度的增加与LPC的作用时间有关,作用时间越长,钙离子浓度越高.结论: LPC能增加细胞内游离钙离子浓度,促使BRECs的凋亡,而且LPC的这种作用具有时间和剂量依赖性.因此,脂代谢紊乱可能是通过诱导BRECs的凋亡而发挥作用的.