小鼠肺细小动脉平滑肌细胞原代培养和鉴定以及低氧对其增殖与凋亡的影响

 目的：建立一种方法简单、重复性好、培养周期短的小鼠肺细小动脉平滑肌细胞（PASMCs）原代培养及传代方法,并初步探索低氧下小鼠PASMCs的增殖与凋亡情况。方法：无菌条件显微镜下分离小鼠肺细小动脉,经胶原酶I消化结合血清铺底法培养PASMCs。传代过程中弃除对细胞损伤大的离心步骤。倒置相差显微镜观察细胞形态,免疫细胞化学法和免疫荧光染色法进行α-平滑肌肌动蛋白鉴定,CCK-8显法及TUNEL法测定低氧下PASMCs的增殖与凋亡情况。结果：形态学观察、免疫细胞化学法和免疫荧光染色法鉴定均表明培养的细胞为PASMCs。与大鼠传代后的PASMCs典型的“峰-谷”样生长相比,传代后的小鼠PASMCs形态各异,没有此典型“峰-谷”规律。原代培养后5~7 d即传代,依据细胞活性可传3~5代。CCK-8法显示,与常氧组24 h比较,低氧组A值升高（P＜0.05）。TUNEL法结果显示低氧24 h后凋亡率较常氧组下降（P＜0.05）。结论：胶原酶I消化结合血清铺底法培养小鼠PASMCs,方法简单,培养周期短,重复性好,是一种值得推广的小鼠PASMCs体外培养方法。低氧可以促进小鼠PASMCs的增殖,抑制小鼠PASMCs的凋亡。     

呼气末屏气试验联合肱动脉峰流速预测机械通气-休克患者容量反应性的价值

目的评价呼气末屏气（EEO）试验联合肱动脉峰流速（Vpeak-BA）能否作为判断机械通气-休克患者容量反应性的指标。 方法选择2018年4月至2019年11月中国科学院大学附属肿瘤医院（浙江省肿瘤医院）重症医学科收治的行机械通气的40例休克患者,对所有入组患者序贯进行EEO试验和补液试验。记录所有患者的一般资料以及EEO试验前后和补液试验前后的左室流出道速度-时间积分（VTI）、Vpeak-BA,计算EEO试验前后的Vpeak-BA变化（△VBA-EEO）和VTI变化（△VTI-EEO）。将补液试验后VTI增加值≥ 15%的患者纳入有反应组（23例）,否则纳入无反应组（17例）。采用受试者工作特征（ROC）曲线评价△VBA-EEO预测容量反应性的价值。 结果EEO试验前,有反应组和无反应组患者Vpeak-BA [（48 ± 4）cm/s vs. （55 ± 5）cm/s]及VTI [（19.1 ± 4.7）cm vs.（23.0 ± 4.8）cm]比较,差异均有统计学意义（t = 5.715、3.010,P均< 0.05）;有反应组患者EEO试验后Vpeak-BA [（56 ± 6）cm/s vs.（48 ± 4）cm/s]和VTI [（22.8 ± 5.2）cm vs.（19.1 ± 4.7）cm]均较EEO试验前显著升高（t = 5.324、2.495,P均< 0.05）。补液试验前,有反应组和无反应组患者Vpeak-BA [（48 ± 4）cm/s vs.（54 ± 5）cm/s]及VTI [（19.0 ± 4.7）cm vs.（23.0 ± 4.4）cm]比较,差异均有统计学意义（t = 5.222、3.155,P均< 0.05）;有反应组患者补液试验后Vpeak-BA [（58 ± 6）cm/s vs.（48 ± 4）cm/s]、VTI [（23.5 ± 5.0）cm vs.（19.0 ± 4.7）cm]均较补液试验前显著升高（t = 6.800、3.133,P均< 0.05）。△VBA-EEO预测容量反应性的ROC曲线下面积（AUC）为0.830,95%置信区间（CI）（0.718,0.941）,P < 0.001;△VTI-EEO的AUC为0.887,95%CI（0.772,1.003）,P < 0.001。以△VBA-EEO ≥ 12.5%为界值点,预测容量反应性的敏感度和特异度分别为82.6%和70.6%;以△VTI-EEO ≥ 9.9%为界值点,预测容量反应性的敏感度和特异度分别为87.0%和88.2%。 结论△VBA-EEO可以较准确地预测机械通气-休克患者的容量反应性,指导液体复苏治疗。