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目的:建立一种方法简单、重复性好、培养周期短的小鼠肺细小动脉平滑肌细胞(PASMCs)原代培养及传代方法,并初步探索低氧下小鼠PASMCs的增殖与凋亡情况。方法:无菌条件显微镜下分离小鼠肺细小动脉,经胶原酶I消化结合血清铺底法培养PASMCs。传代过程中弃除对细胞损伤大的离心步骤。倒置相差显微镜观察细胞形态,免疫细胞化学法和免疫荧光染色法进行α-平滑肌肌动蛋白鉴定,CCK-8显法及TUNEL法测定低氧下PASMCs的增殖与凋亡情况。结果:形态学观察、免疫细胞化学法和免疫荧光染色法鉴定均表明培养的细胞为PASMCs。与大鼠传代后的PASMCs典型的“峰-谷”样生长相比,传代后的小鼠PASMCs形态各异,没有此典型“峰-谷”规律。原代培养后5~7 d即传代,依据细胞活性可传3~5代。CCK-8法显示,与常氧组24 h比较,低氧组A值升高(P<0.05)。TUNEL法结果显示低氧24 h后凋亡率较常氧组下降(P<0.05)。结论:胶原酶I消化结合血清铺底法培养小鼠PASMCs,方法简单,培养周期短,重复性好,是一种值得推广的小鼠PASMCs体外培养方法。低氧可以促进小鼠PASMCs的增殖,抑制小鼠PASMCs的凋亡。 相似文献
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目的评价呼气末屏气(EEO)试验联合肱动脉峰流速(Vpeak-BA)能否作为判断机械通气-休克患者容量反应性的指标。
方法选择2018年4月至2019年11月中国科学院大学附属肿瘤医院(浙江省肿瘤医院)重症医学科收治的行机械通气的40例休克患者,对所有入组患者序贯进行EEO试验和补液试验。记录所有患者的一般资料以及EEO试验前后和补液试验前后的左室流出道速度-时间积分(VTI)、Vpeak-BA,计算EEO试验前后的Vpeak-BA变化(△VBA-EEO)和VTI变化(△VTI-EEO)。将补液试验后VTI增加值≥ 15%的患者纳入有反应组(23例),否则纳入无反应组(17例)。采用受试者工作特征(ROC)曲线评价△VBA-EEO预测容量反应性的价值。
结果EEO试验前,有反应组和无反应组患者Vpeak-BA [(48 ± 4)cm/s vs. (55 ± 5)cm/s]及VTI [(19.1 ± 4.7)cm vs.(23.0 ± 4.8)cm]比较,差异均有统计学意义(t = 5.715、3.010,P均< 0.05);有反应组患者EEO试验后Vpeak-BA [(56 ± 6)cm/s vs.(48 ± 4)cm/s]和VTI [(22.8 ± 5.2)cm vs.(19.1 ± 4.7)cm]均较EEO试验前显著升高(t = 5.324、2.495,P均< 0.05)。补液试验前,有反应组和无反应组患者Vpeak-BA [(48 ± 4)cm/s vs.(54 ± 5)cm/s]及VTI [(19.0 ± 4.7)cm vs.(23.0 ± 4.4)cm]比较,差异均有统计学意义(t = 5.222、3.155,P均< 0.05);有反应组患者补液试验后Vpeak-BA [(58 ± 6)cm/s vs.(48 ± 4)cm/s]、VTI [(23.5 ± 5.0)cm vs.(19.0 ± 4.7)cm]均较补液试验前显著升高(t = 6.800、3.133,P均< 0.05)。△VBA-EEO预测容量反应性的ROC曲线下面积(AUC)为0.830,95%置信区间(CI)(0.718,0.941),P < 0.001;△VTI-EEO的AUC为0.887,95%CI(0.772,1.003),P < 0.001。以△VBA-EEO ≥ 12.5%为界值点,预测容量反应性的敏感度和特异度分别为82.6%和70.6%;以△VTI-EEO ≥ 9.9%为界值点,预测容量反应性的敏感度和特异度分别为87.0%和88.2%。
结论△VBA-EEO可以较准确地预测机械通气-休克患者的容量反应性,指导液体复苏治疗。 相似文献
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