血管内皮细胞在DHF／DSS中对凝血和纤溶系统的异常调控

登革热病毒(Dengue virus,DV)感染可以引起登革热(Dengue fever,DF)、登革出血热(Denguehaemorrhagic fever,DHF)和登革休克综合症(Dengue shock syndrome,DSS)等多种疾病。出血和血管渗漏与DV感染密切相关,当出现血容量减少性休克时,如果不及时治疗可导致死亡。然而由DV感染所致的出血机制目前仍不清楚,不少学者提出了多种学说如抗体依赖的感染增强作用(anti-body dependent enhancement,ADE)等[1],但均不足以解释临床上DHF/DSS中最突出的特征—血管渗漏、出血[2]。由于内皮细胞在调控凝血和纤溶系统平衡方面起关键性作用,近年…     

Pdxl与NeuroD1联合诱导LO2细胞Nkx6.1和GLUT2的表达

目的:应用分子生物学技术,构建胰腺十二指肠同源框蛋白1(Pdx1)和神经分化因子1(NeuroD1)转录因子真核表达质粒,检测其能否在真核细胞中有效表达并诱导人肝细胞转分化的能力.方法:以人胚胎胰腺组织mRNA为模板经RT-PCR扩增获得Pdxl和NeuroD1基因,分别克隆到真核双表达载体plRES质粒的多克隆位点A(MCSA)和B(MCSB)中,构建pl/Pdxl/NeuroD1真核表达质粒,并转染LO2细胞.用RT-PCR、免疫组化、间接荧光法和Western blotting检测目的基因及NK转录因子相关的Nkx6.1(Nkx6.1)和葡萄糖运载体2(GLUT2)的表达情况.结果:目的基因克隆正确且在真核细胞中有效表达;并可诱导肝细胞表达胰腺B细胞功能相关的Nkx6.1和GLUT2因子.结论:pl/Pdxl/NeuroD1质粒成功构建和在人真核细胞表达,并诱导人肝细胞表达B细胞功能相关的Nkx6.1转录因子和GLUT2,提示Pdxl与NeuroDl可诱导肝细胞向胰腺内分泌细胞分化.     

广州地区部分健康大学生甲型流感病毒血清抗体检测结果

目的了解广州地区健康大学生H9，H7和H5 3种甲型流感病毒亚型的隐性感染情况，分析人类对上述3种禽类甲型流感病毒亚型是否具有免疫力并探索甲型流感病毒对人类的潜在危险性。方法采集广州地区健康大学生血清686份，通过血凝抑制实验进行抗体检测。结果H9亚型抗体阳性率达35．1％，有22份血清存在H7抗体，有18份血清存在H5抗体。结论H9亚型在健康青年中的隐性感染率非常高，但H7与H5亚型抗体的阳性率极低，人类尚不具备免疫力。当前流行的高致病性禽流感病毒(H7，H5等和亚型)对人群威胁巨大，应加强防护，必要时应采取主动免疫等防护措施。     

球形幽门螺杆菌vacA基因表达质粒构建及表达

目的构建球形幽门螺杆菌vacA基因的重组表达质粒,初步观察其在E.coli中的表达。方法采用亚克隆技术,用BamHⅠ和SacⅠ从重组质粒pMD-18T-vacA上切下vacA基因,插入表达载体pET32a（＋）质粒,转化大肠埃希菌BL21,在氨苄青霉素阳性的LB平板上筛选阳性重组子,并经双酶切及PCR扩增鉴定。重组质粒pET32a（＋）-vacA转化大肠埃希菌,（IPTG）诱导表达后进行（SDS-PAGE）电泳和凝胶扫描定量分析。结果重组质粒酶切和PCR鉴定与预期结果相符,成功构建携带vacA基因的重组原核表达质粒pET32a（＋）-vacA。核酸序列测定及同源性分析证实,表达质粒pET32a（＋）-cagA中所含vacA基因与GenBank中的vacA序列同源性达到99.2%。vacA基因在大肠埃希菌中诱导表达后获得约156 kD蛋白,蛋白含量占全菌体蛋白含量15.5%。结论成功构建球形H.pylori vacA基因重组表达质粒,并获得高效表达,为研究该基因蛋白的生物学特性及DNA疫苗研制奠定了基础。     

大肠杆菌发酵中包含体形成减少的实验研究

目的:减少大肠杆菌发酵过程中包含体的形成。方法:在发酵过程中,加入IPTG后,降低培养温度进行低温诱导。结果:表达产物在细胞内大部分没有形成包含体。结论:低温诱导可减少大肠杆菌发酵中包含体的形成。     

淋病奈瑟氏菌的β-内酰胺酶测定和药敏实验分析

对从临床分离出的４００份淋球菌菌株进行β－内酰胺酶（β－ｌａｅｓ）测定和药敏实验，发现β－ｌａｓｅ阳性率高达６４．５％；β－ｌａｓｅ阳性比β－ｌａｓｅ阴性菌株对不同种类的抗生素的耐药率明显偏高；且β－ｌａｓｅ阳性菌株所占比率有逐年升高趋势，同时发现一些新的耐药株。提示对淋病患者进行细菌培养、药敏实验和β－ｌａｓｅ的检测应作为临床一项常规工作。     

胰腺β细胞分化的信号通路调控

细胞替代治疗给糖尿病的根治带来了新希望。文章综述了近年来干细胞向胰岛细胞定向分化的分子研究进展,综合分析细胞信号通路在β细胞分化发育过程中所发挥的作用。其中Wnts信号是通过阻止β-Catenin分解从而激活Tcf/Lef介导的转录,促进干细胞向内胚层分化;Notch及其配体Delta或Jagged也对干细胞分化有重要影响,当Notch活性被抑制时,干细胞进入分化程序,发育为功能细胞;Hedgehog信号转导对许多发育过程是必须的,其主要以浓度依赖方式控制细胞的增殖、分化和组织的形成,这些信号通路按一定的顺序上调或下调,以启动PDX1等β细胞分化相关的转录因子的表达,从而调控着β细胞的分化发育。因此深入分析并通过调控这些信号通路为以后进行相关细胞定向分化,获取发育成熟、功能完整的β细胞,进行细胞治疗糖尿病奠定基础。     

大肠杆菌发酵中包含体形成减少的实验研究

目的：减少大肠杆菌发酵过程中包含体的形成。方法：在发酵过程中，加入IPTG后，降低培养温度进行低温诱导。结果：表达产物在细胞内大部分没有形成包含体。结论：低温诱导可减少大肠杆菌发酵中包含体的形成。     

卵巢恶性肿瘤腹腔灌注化学药物治疗的护理探讨

目的 探讨卵巢恶性肿瘤腹腔灌注化学药物治疗的护理问题。方法 以90例妇科卵巢恶性肿瘤住院化疗的病人为对象，经腹腔穿刺灌注生理盐水、5％葡萄糖、低分子右旋糖酐、卡铂、平阳霉素。结果 由于加强病人的心理护理。做好了化疗前的准备。在化疗中与医生密切配合，重视化疗的护理及毒性反应的观察及护理，使病人顺利完成腹腔化疗。结论 腹腔灌注给药，具有操作简单。穿刺点灵活，对血管无损伤，不良反应少疗效好等特点，再配合高质量的护理，对提高卵巢疾病人的疗效及生活质量具有重要意义。     

DHF／DSS患者凝血和纤溶系统变化的临床意义

目的检测 DHF/DSS 患者急性期凝血和纤溶系统的变化,探索患者血浆渗漏和出血的发病机制。方法收集正常健康者、DF 和 DHF/DSS 急性期患者的血浆各30份,应用 ELISA 法检测 t-PA、PAI-1、PC、TM、TF、TFPI 和 D-二聚体,发色底物法测 AT 等分子。结果血管内皮细胞的特异性表达产物 vWF 和TM 升高;TF升高,TFPI 没有变化;t-PA 显著增加,PAI-1下降,t-PA/PAI-1比值显著升高,PC、AT 和D-二聚体变化无统计学意义。结论 DHF/DSS 患者急性期血管内皮细胞活化或损伤的同时,凝血和纤溶系统均已活化;内皮细胞通过表达 TM、t-PA 和 PAI-1等相关分子在引起凝血和纤溶系统失调,造成血浆渗漏和出血等方面起重要作用。TM、t-PA 和 PAI-1等变化在 DHF/DSS 的发病机制中起重要作用,对 DHF/DSS 急性期有诊断价值,可作为辅助诊断指标。