阻断ERK信号通路降低大鼠脑创伤后MMP-9的表达及减轻脑水肿

目的 观察并探讨阻断ERK通路激活对SD大鼠脑创伤后基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达变化及脑水肿形成的影响及意义。方法 取健康成年雄性SD大鼠90只,随机分为：对照组：只在颅骨上做一直径约为4 mm的骨窗,不作脑创伤;脑创伤组：制作改进式Feeney’s创伤性脑损伤模型;ERK抑制组：脑创伤前15 min股静脉注射ERK抑制剂（SCH772984,500 μg/kg）,每组30只/组大鼠。制作改进式Feeney’s 脑创伤模型后,分别在脑创伤后2 h、2 d时断头取脑,Evans Blue法测定血脑屏障通透性变化,干湿比重法测定脑组织含水量,RT-PCR法和Western blotting法检测各组大鼠脑组织ERK磷酸化的水平及MMP-9 mRNA及蛋白的表达水平。结果（1）与对照组比较,脑创伤组大鼠脑组织中ERK的磷酸化水平在伤后2 h和2 d均出现明显上升（P<0.01）,MMP-9mRNA和蛋白的表达在脑创伤后2 d时表达也出现显著增高（均P<0.01）;与脑创伤组比较,ERK抑制组大鼠脑组织中ERK的磷酸化水平在各时间点均明显下降（P<0.01）,MMP-9 mRNA和蛋白在伤后2 d的过表达水平也较脑创伤组出现明显降低（均P<0.01）;（2）脑创伤组大鼠的血脑屏障通透性较对照组在伤后出现显著升高（P<0.05）,ERK抑制组大鼠的血脑屏障通透性则较脑创伤组出现明显降低（P<0.05）;脑创伤组大鼠的脑含水量在伤后在2 d时出现显著增加（P<0.01）,ERK抑制组大鼠的脑含水量则较脑创伤组有明显降低（P<0.01）。结论 阻断ERK通路过度的活化可显著降低大鼠脑创伤后MMP-9高表达,减轻大鼠血脑屏障破坏及创伤性脑水肿,提示ERK信号通路在脑创伤后的过度活化可通过调节MMP-9的表达在创伤性脑水肿中发挥重要作用。     

P38信号通路在星形胶质细胞氧糖剥夺/复氧后水通道蛋白4表达及细胞水肿形成中的作用

摘要：目的探讨P38信号通路在星形胶质细胞氧糖剥夺/复氧后水通道蛋白4表达及细胞水肿形成中发挥的作用。方法原代
培养的星形胶质细胞分为正常组,模型组和P38抑制剂组。模型组：细胞接受5 h氧糖剥夺/复氧处理;P38抑制剂组：细胞在5 h
氧糖剥夺后的复氧过程中加入P38 抑制剂（SB203580,10 μmol/L）处理。在5 h 氧糖剥夺/复氧后的不同时间点,用RT-PCR及
Western blotting法测定P38、磷酸化P38及水通道蛋白4（AQP4）的表达变化,光镜观察细胞形态变化,乳酸脱氢酶测定反应细胞
损伤程度。结果与正常组相比,星形胶质细胞在5 h氧糖剥夺/复氧后,其磷酸化P38的水平明显上升,并在复氧1h时达到峰值
（P<0.01）,AQP4 mRNA和蛋白的表达也明显升高（P<0.01）,同时细胞水肿在氧糖剥夺/复氧后2 h时达到高峰,LDH漏出率也
明显升高（P<0.01）。与模型组相比,加入P38抑制剂可明显降低5 h氧糖剥夺/复氧后P38磷酸化的水平（P<0.01）,以及复氧后
各时间点AQP4增高的水平（P<0.01）,并可明显缓解氧糖剥夺/复氧后细胞水肿及LDH上升的程度（P<0.01）。结论P38信号通
路的激活参与了星形胶质细胞5 h氧糖剥夺/复氧后AQP4上调及细胞水肿形成,抑制p38的激活可降低AQP4表达的上调,减轻
细胞水肿。
     

CD82/KAI1在神经胶质瘤细胞株中的表达及对细胞迁移能力的影响

目的 研究CD82/KAI1在胶质瘤CHG-5及U251细胞株的表达及意义.方法 RT-PCR、免疫细胞化学、免疫荧光检测CHG-5及U251细胞中CD82/KAI1的表达;分别设立1∶100、1∶200 CD82/KAI1抗体干预组和空白对照组,通过划痕实验对CD82/KAI1对细胞迁移能力的影响进行分析.结果 ①U251细胞中CD82/KAI1的mRNA表达高于CHG-5细胞(P<0.01);U251细胞中CD82/KAI1的蛋白水平表达高于CHG-5细胞(P＜0.01).②CD82/KAI1抗体干预组迁移细胞数量均显著高于对照组(P<0.05),且迁移细胞数量随抗体浓度升高而增加(P<0.05).结论 CD82/KAI1在恶性胶质瘤细胞株中表达,且在U251细胞中表达较CHG-5细胞高.CD82/KAI1可抑制胶质瘤U251细胞的迁移.     

载脂蛋白E基因多态性对星形胶质细胞损伤早期胞内Ca2+浓度的影响

目的 探讨载脂蛋白E(apolipoprotein E,蛋白:apoE,基因:APOE)基因多态性与星形胶质细胞损伤后早期胞内Ca2+浓度的相关性.方法 (1)通过RT-PCR及定点突变技术扩增人源性APOE三种等位基因的CDS区,并构建pEGFP-N1-APOE重组质粒;(2)APOE基因敲除鼠星形胶质细胞的原代培养、鉴定;脂质体法将重组质粒转染入星形胶质细胞,并筛选稳定表达APOE信息的细胞株;(3)利用划痕致伤构建细胞损伤模型,于伤后12,24,48及72 h时相点,利用激光共聚焦显微镜(LCSM)技术检测各基因型细胞内Ca2+的荧光强度.结果 各型细胞相对于自身对照(致伤前),Ca2+荧光强度变化差异有统计学意义(P＜0.05).伤后12 h,三组细胞内Ca2+荧光强度较弱,组间差异无统计学意义(P＞0.05);伤后24,48及72 h,三组细胞Ca2+荧光强度进行性增加,且ε4组明显高于ε2和ε3组(P＜0.05).结论 损伤后早期,携带APOEε4等位基因的星形胶质细胞内Ca2+高于ε2和ε3型,提示ε4携带体可能通过伤后Ca2+通道的激活导致急性期伤情加重及不良预后.     

肝脏增强CT与MRI在肝癌诊断中的应用价值分析

目的:对比肝脏增强CT、MRI技术用于临床诊断肝癌的应用价值。方法:选取2020年1月—2023年2月张家港市第五人民医院收治的经病理确诊的肝癌患者59例进行回顾性研究,根据检查方法进行分组,A组(30例)患者采用肝脏增强CT检查;B组(29例)患者采用肝脏MRI检查;对比两组检查的准确率及检出病灶位置、病灶直径的符合率。结果:A组经肝脏增强CT总计检出患者24例,检出率为80.00%,B组经肝脏MRI总计检出患者29例,检出率为100.00%,B组患者检查率明显高于A组(P<0.05)。B组患者经肝脏MRI检查肝外病灶位置、病灶直径不足3cm符合率均明显高于A组(P<0.05)。结论:临床诊断肝癌疾病可首选肝脏MRI技术,相比肝脏增强CT准确率更高,同时可更精准地判断病灶位置及直径,为后续治疗提供影像学支持,值得运用推广。     

STIM1在幼年和成年大鼠外伤性癫痫中的表达

目的探讨钙释放激活钙离子通道(calcium release-activated calcium,CRAC)关键蛋白STIM1在幼年和成年大鼠外伤性癫痫中的表达差异及意义。方法取SD雄性幼年、成年大鼠各94只,按照完全随机设计分为成年、幼年假手术组:皮层注射生理盐水,各42只;成年、幼年模型组:铁离子皮层注射外伤性癫痫模型,各52只。建模后观察大鼠癫痫行为学表现;分别于6、24、72 h,7、14、21、28 d 7个时相点完全随机选取6只大鼠,处死取伤灶周边皮层脑组织,用实时荧光定量PCR、Western blot和免疫组织化学法分别检测STIM1的mRNA与蛋白的表达。结果模型组成年、幼年大鼠均出现典型痫性发作,幼鼠模型组建模成功率为91.3%,成鼠模型组建模成功率为84%(定义Racine评分3分及以上为建模成功)。幼鼠模型组比成鼠模型组发作次数明显增多(P<0.05),每次发作持续时间显著延长(P<0.05),发作程度较重。建模后各组STIM1的mRNA和蛋白表达都有明显增高,72 h达高峰(P<0.05),但幼鼠与成鼠相比较,STIM1的mRNA和蛋白在各时间点表达增高的趋势更加显著(P<0.05)。结论幼鼠较成鼠更容易发生外伤性癫痫,STIM1在幼鼠中较成鼠的表达也更高,提示STIM1表达增加、CRAC激活可能是幼鼠更易发生外伤性癫痫的机制之一。     

促红细胞生成素通过激活Akt通路促进胶质瘤的快速增殖

目的研究促红细胞生成素（EPO）是否通过Akt信号通路促进胶质瘤的快速增殖。方法通过免疫组化法检测EPO在人 各病理级别胶质瘤中的表达差异;采用胶质瘤U87细胞系建立裸鼠皮下移植瘤模型,分为对照组和EPO处理组,监测肿瘤生长 速度差异及瘤体中EPO与p-Akt表达变化;体外实验分为对照组、EPO处理组及EPO+Akt抑制剂组,分别使用Western blot测各 组间p-Akt及cyclinD1的表达变化、CCK-8法测生长曲线、克隆形成实验检测增殖速度差异、流式细胞术检测细胞增殖周期的变 化。结果人胶质瘤标本中,高病理级别组比低级别组EPO的表达量高（P=0.0002）;裸鼠移植瘤过程中,EPO处理组比对照组瘤 体中EPO及p-Akt表达显著增高（PEPO=0.0006,PP-Akt=0.0003）,瘤体生长明显增快（Pvolume<0.0001,Pweight=0.0003）;体外实验：与对 照组相比,EPO处理组细胞中p-Akt及cyclinD1的表达水平均明显升高（PP-Akt=0.0020,PCyclinD1=0.0022）,细胞生长速度明显增快 （P3天/5天=0.020/0.028,P克隆=0.0010）,增殖指数明显升高（P=0.0028）,EPO+Akt 抑制剂组细胞中p-Akt 及cyclinD1的表达水平较 EPO组明显降低（PP-Akt<0.0001,PCyclinD1<0.0001）,同时细胞生长速度及增殖指数均显著下降（P3天/5天=0.003/0.001,P克隆=0.0017,P增殖指数= 0.0036）。结论本研究发现EPO可通过激活Akt信号通路上调cyclinD1的表达,加快胶质瘤增殖速度。     

促红细胞生成素抑制大鼠创伤性脑水肿形成

目的探讨促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)对大鼠创伤性脑水肿的影响及其的潜在分子机制。方法取SD大鼠90只,随机分为假手术组,创伤组和EPO组。创伤组:制作改进式Feeney's脑创伤模型;EPO组:伤后给大鼠腹腔注射重组人促红细胞生成素(5000 IU/kg)。伤后24 h,72 h和120 h,使用平衡木法评定各组大鼠行为学评分。伤后72 h时,检测各组大鼠脑含水量,脑组织胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)的磷酸化水平、水通道蛋白4(aquaporin 4,AQP4)mRNA和蛋白表达水平。结果在伤后各时间点,EPO组大鼠神经功能障碍的行为学评分也较创伤组有明显降低(均P<0.05)。伤后脑组织含水量由假手术组的78.76%±0.65%上升至创伤组的81.26%±0.40%(P<0.01),EPO组脑含水量则降低至79.71%±0.59%(与创伤组比较P<0.01)。与假手术组比较,创伤组ERK磷酸化的水平在伤后72 h明显上升(P<0.01),EPO组伤后ERK磷酸化水平则明显低于创伤组(0.369±0.046 vs.0.815±0.127,P<0.01);AQP4 mRNA和蛋白在伤后的表达水平均较假手术组明显增高(均P<0.01),EPO组AQP4 mRNA和蛋白的表达水平较创伤组均显著下降(均P<0.01)。结论EPO可抑制大鼠脑创伤后ERK信号通路的过度激活及下游AQP4的过表达,减轻大鼠的创伤性脑水肿。     

促红细胞生成素预处理对氧糖剥夺后星形胶质细胞水肿及AQP4表达的影响

目的探讨重组人促红细胞生成素(recombinanthuman erythropoietin,rhEPO)预处理对氧糖剥夺并复氧培养后星形胶质细胞水肿及其水通道蛋白4(aquaporin4,AQP4)表达的影响。方法星形胶质细胞分成:正常组、模型组和rhEPO预处理组。星形胶质细胞在5 h时长的氧糖剥夺后复氧培养至0.5 h、2 h、8 h、24 h四个时间点时,用光镜观察细胞形态变化,用乳酸脱氢酶(LDH)漏出率测定反应细胞的损伤程度,用RT-PCR法及Western blot法测定AQP4的表达变化。结果光镜观察到rhEPO预处理能明显减轻氧糖剥夺后星形胶质细胞水肿的程度。氧糖剥夺后24 h时,LDH漏出率有明显增高(F=80.45,P0.01),rhEPO预处理能明显降低(P0.01)氧糖剥夺后LDH漏出率增高(P0.01)的程度。AQP4的mRNA和蛋白在氧糖剥夺后的表达,各组间有明显差异(8 h时:mRNA:F=49.26,P0.01,蛋白:F=43.13,P0.01);与正常组相比,模型组AQP4在氧糖剥夺后短暂下降后呈上升趋势,至8 h时达峰值(均P0.01),至24 h时未恢复正常水平;与模型组相比,rhEPO预处理组AQP4 mRNA和蛋白在氧糖剥夺后的表达变化趋势与模型组相似,但在各个时间点时的表达均明显降低(8 h时:mRNA:P0.01,蛋白:P0.01)。结论rhEPO预处理能明显减轻5 h氧糖剥夺后的星形胶质细胞水肿,机制可能是其通过降低氧糖剥夺后AQP4的表达水平而实现。