人COX1蛋白真核表达载体的构建及其生物信息学分析

目的：构建表达重组环氧合酶1（COX1）真核表达载体，验证其体外能够催化底物合成前列腺素E1（PGE1），以寻找高效获得PGE1的方法。方法：提取人微血管内皮细胞（HMECs）总RNA，逆转录成cDNA，以cDNA为模板，PCR扩增人COX1基因，经双酶切后与真核表达载体pCMV6连接，构建重组pCMV6-COX1真核表达质粒。通过生物信息学在线工具分析COX1蛋白的疏水性、跨膜区域、信号肽、二级结构和三级结构。采用脂质体将重组质粒转染至HEK-293F细胞中，将细胞随机分为对照组（未转染重组质粒的HEK-293F细胞）、转染重组质粒2 d组和转染重组质粒5 d组，分别收集细胞和细胞培养上清，Western blotting法检测COX1蛋白表达水平。比较真核表达的COX1蛋白与羊精囊提取法制备的粗酶混合物催化底物二高-γ-亚麻酸合成PGE1的酶活性。结果：经PCR、双酶切和测序鉴定，成功构建pCMV6-COX1重组载体，目的基因长度约为1800 bp。生物信息学分析，COX1蛋白为水溶性蛋白，1~53位氨基酸为信号肽，34~53位氨基酸处于跨膜区域，有36个丝氨酸磷酸化位点、14个苏氨酸磷酸化位点和9个酪氨酸磷酸化位点。二级结构预测，不规则卷曲所占比例为46.20%，其次为α螺旋占41.03%。延伸链和β-转角分别占10.18%和2.58%。Western blotting法检测，重组质粒成功转染至HEK-293F细胞中，与转染重组质粒2 d组比较，转染重组质粒5 d组细胞培养上清中COX1蛋白表达水平明显升高（P<0.05），蛋白相对分子质量为70000。当底物浓度为1%时，COX1蛋白催化底物合成PGE1的含量为（50.01±1.37） ng·L^-1，其活性相当于5个羊精囊制备的粗酶活性的（90.30±0.06）%。结论：通过基因工程技术构建和表达的COX1蛋白能够催化底物合成PGE1并满足临床要求。     

心理护理对提高冠状动脉CTA检查成功率的作用

目的探讨心理护理对冠状动脉CTA检查成功率的影响。方法选取150例接受冠状动脉CTA检查的患者,随机分为对照组和研究组,每组75例,对照组实施常规操作,研究组在对照组基础上实施心理护理,比较2组血压、心率、呼吸情况、焦虑状况以及CTA成像质量。结果研究组收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、心率、呼吸和焦虑评分均显著低于对照组(P0.01),研究组图像质量显著高于对照组(P0.05)。结论心理护理能提高冠状动脉CTA检查成功率,值得临床推广。