局部注射转化生长因子β1质粒与坐骨神经移植后免疫排斥反应的量效关系

背景：研究表明，转化生长因子β1被应用于周围神经移植来抑制或减弱移植排斥反应，但在某些情况下，转化生长因子又表现出正向免疫调节作用。所以有必要进行量效关系研究获取可靠的数据佐证。 目的：从剂量学上观察局部注射转化生长因子β1质粒与免疫排斥反应的量效关系。 设计、时间及地点：随机对照动物实验，于2007—06／2008-04在哈尔滨医科大学动物实验中心完成。 材料：选用雄性Wistar大鼠20只为供体。清洁级雄性SD大鼠50只为受体，随机分为5组，每组10只：自体神经移植组、空质粒异体神经移植组、低、中、高剂量转化生长因子β1质粒异体神经移植组。pAdTrack—CMV—TGF-β1质粒，pAdEasy—1—Bj51833细胞由华中科技大学同济医学院附属协和医院传染病实验室曾令兰教授惠赠。 方法：于手术显微镜下，从犁状肌下孔0．5cm处整齐剪下长约1cm的坐骨神经，将供体神经桥接于神经缺损处，异体神经移植组转化生长因子β1质粒注射剂量为10，20，40μg／只，空质粒异体神经移植组注射空质粒。 主要观察指标：术后6周进行运动神经传导速度、病理学、混合淋巴细胞培养和轴突计数检查。 结果：高剂量转化生长因子β1质粒异体神经移植组运动神经传导速度、轴突计数与自体神经移植组接近（P〉0．05），并优于低剂量转化生长因子β1质粒异体神经移植组（P〈0．05）。病理学及透射电镜显示，高剂量转化生长因子β1质粒异体神经移植组移植神经段效果接近于新鲜自体神经移植组（P〉0．05），并优于低剂量转化生长因子β1质粒异体神经移植组。高剂量转化生长因子β1质粒异体神经移植组混合淋巴细胞培养、迟发性超敏反应优于低剂量转化生长因子β1质粒异体神经移植组（P〈0．05）。 结论：局部注射转化生长因子β1质粒减轻大鼠同种异体坐骨神经移植后免疫排斥反应的作用，在10～40μg范围内，随剂量的增加而增强。     

冷冻保存后不同直径异体神经移植的实验研究

目的 探讨经液态氮冷冻贮存后,不同直径同种异体神经移植的神经再生情况.方法 取40只Wistar大鼠,雌雄不限,取10只鼠分别切取正中神经、桡神经及坐骨神经,放于-196℃液态氮贮存3周备用;其余30只鼠随机分为A、B、C 3组,均造成右侧胫神经8mm的神经缺损模型,分别植入不同直径异体神经.A组:粗直径同种异体神经移植组;B组:等直径同种异体神经移植组;C组:细直径同种异体神经移植组.术后2、4周分别进行大体手术显微镜下观察、病理组织学及电生理学检查.结果 电生理学检查:2周时,传导速度(CV)及波幅(Amp)经统计学分析,A、B、C 3组之间无显著性差异(P>0.05);4周时,CV及Amp经统计学分析,3组之间存在显著性差异(P<0.05),并且C组明显优于A组.病理组织学检查:2周时,3组均见明显髓鞘、轴突崩解和空泡变性,基底膜管完整清晰,外周见较多新生血管及巨噬细胞、淋巴细胞浸润;4周时,各组吞噬现象消失,并见较多新生神经轴突.其中C组的再生轴突数量和直径均优于其余2组;结论不同直径同种异体神经移植,对神经再生效果有明显影响,其中细直径移植组神经再生效果最佳.     

胸腺内注射异基因抗原对同种异体鼠坐骨神经移植免疫反应的影响

目的:降低移植神经的抗原性、抑制异体神经移植中的排斥反应是目前的研究焦点。观察小鼠胸腺内注射异基因抗原对异体鼠坐骨神经移植存活的干预作用。方法:实验于2006-06/2007-05在哈尔滨医科大学附属第四医院实验室完成,实验方法符合动物伦理学要求。①选用雄性C57BL/6(H-2b)供体鼠32只,雌性Balb/c(H-2d)受体鼠44只,将坐骨神经移植受体鼠按随机数字表法分为4组(n=11):主要组织相容性复合物(H-2b)抗原注射组自供体小鼠的脾细胞中提取抗原注入受体鼠胸腺内,于2周后移植供体鼠坐骨神经;免疫抑制剂组移植前3d开始腹腔注射环孢霉素A;异体神经移植组、自体神经移植组单纯进行异体及自体神经移植。②于神经移植3周后进行电生理学、组织学及免疫学检测。结果:44只受体鼠全部进入结果分析。①坐骨神经移植段的神经传导速度:异体神经移植组显著小于主要组织相容性复合物(H-2b)抗原注射组(P<0.05),自体神经移植组显著大于主要组织相容性复合物(H-2b)抗原注射组(P<0.05),主要组织相容性复合物(H-2b)抗原注射组与免疫抑制剂组差异无显著性意义(P>0.05)。②组织学检查证明自体神经移植组及主要组织相容性复合物(H-2b)抗原注射组均有大量神经纤维再生,并已通过移植体。③混合淋巴细胞反应及迟发型超敏反应结果:主要组织相容性复合物(H-2b)抗原注射组对供体小鼠淋巴细胞反应呈特异性减弱,与异体神经移植组及免疫抑制剂组比较其差异具有显著性意义(P<0.05)。结论:胸腺内注射异基因主要组织相容性复合物抗原可诱导对异体坐骨神经移植的特异性免疫耐受,神经恢复效果优于单纯异体神经移植,等同于免疫抑制剂使用组。     

胸腺内注射不同剂量的异基因抗原诱导大鼠同种异体神经移植的免疫耐受反应

目的 探讨大鼠胸腺内注射不同剂量异基因抗原(MHC),诱导大鼠同种异体坐骨神经产生的特异性免疫耐受反应.方法 雄性Wistar大鼠20只为供体,选用清洁级雄性SD大鼠50只为受体,受体随机分为5组,每组10只:A:新鲜自体神经移植组;B:新鲜异体神经移植组;C、D、E组分别为低、中、高剂量异基因抗原注射异体神经移植组,剂量分别为1 5 mg、3 0 mg、6 0 mg.术后2周进行运动神经传导速度、病理学、混合淋巴细胞培养(MLC)和血清sIL-2R检查.结果 胸腺内抗原注射组动物肢体的生理功能、免疫学、组织学及透射电镜指标恢复,其中,E组动物各项指标恢复最明显,与A组指标类似.结论 胸腺内注射异基因抗原可以诱导大鼠对异体坐骨神经移植的免疫耐受,在一定范围内,免疫耐受的程度与抗原量有关.