HEV感染血小板模型的建立及其机制的初步研究

目的研究戊型肝炎病毒(hepatitis E virus, HEV)是否感染血小板并进一步在其内复制,以及血小板与HEV的相互作用情况。方法将纯化的血小板与病毒共培养1 h后在PBS中洗涤2次,22℃下继续震荡培养5 d,每天观察病毒的复制情况。使用荧光定量PCR方法检测HEV核酸浓度的变化;免疫荧光染色观察HEV是否感染血小板;流式细胞术分析HEV是否促进血小板活化。结果随着HEV感染量的增加,血小板感染病毒量逐渐增加并趋于平稳,并且感染率最高约为1.22%,免疫荧光结果可同时观察到HEV结合或进入血小板;培养上清中的病毒浓度与d0相比,d4、d5有明显的增长(P0.01),且沉淀中的病毒浓度在d2有明显的增加(P0.01);HEV导致CD62P,CD41双阳性血小板比例增加约8%(P0.01)。结论 HEV在体外实验中可以感染血小板并促进血小板活化,HEV在血小板内的复制特征需进一步研究验证。     

赖型钩端螺旋体溶血素HlyX对血管内皮细胞通透性的影响

目的: 克隆表达赖型钩端螺旋体溶血素基因hlyX,观察其表达产物对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)通透性的影响,并初步探讨其机制。方法: 将hlyX基因插入原核表达载体pET32a(+),构建重组质粒pET-hlyX,转化大肠杆菌BL21(DH3)以高效表达携带组氨酸标签的Trx-HlyX融合蛋白,并作亲和层析纯化。采用生物素标记白蛋白的酶联免疫吸附法测定目的蛋白对HUVECs单细胞层通透性的影响,并以流式细胞术及Hoechst 33258荧光染色方法检测其作用于HUVECs后的细胞凋亡率。结果: 成功构建了重组质粒pET-hlyX并高效表达出Trx-HlyX融合蛋白;与对照组相比较,蛋白Trx-HlyX作用于HUVECs后,明显增加其通透性(P< 0.05),细胞凋亡率显著增加(P<0.05)。结论: 重组质粒pET-hlyX高效表达出Trx-HlyX融合蛋白,纯化后的融合蛋白对HUVECs通透性有影响,且对HUVECs具有细胞毒性作用。     

纳米二氧化钛对噬菌体MS2灭活效果的初步观察

[目的]在实验条件下观察纳米二氧化钛对噬菌体MS2的灭活效果,以初步判断噬菌体MS2对纳米二氧化钛的抵抗力.[方法]消毒剂对噬菌体的灭活效果采用悬液定量灭活实验,中和剂鉴定实验,噬菌体的检测采用双层琼脂法.[结果]①紫外光激发组,800 mg/L纳米二氧化钛对噬菌体MS2作用5 min或者200 mg/L,纳米二氧化钛对噬菌体MS2作用10 min就能达到消毒水平.②自然光激发组,1 000mg/L纳米二氧化钛对噬菌体MS2作用5 min或者200 mg/L纳米二氧化钛对噬菌体MS2作用20 min就能达到消毒水平.[结论]在紫外光激发和自然光激发下,纳米二氧化钛均能在短时间内灭活噬菌体MS2达到消毒水平,提高的纳米二氧化钛作用浓度可以增强对噬菌体MS2的灭活效果.噬菌体MS2对纳米二氧化钛的抵抗力不强.     

四川地区血站分离血浆HIV/HBV/HCV残余风险研究

目的评估四川地区血站分离血浆中HIV、HBV、HCV的残余风险。方法收集2013年1-12月四川9家血站HBs Ag、抗-HCV、抗-HIV筛查阳性样本,对筛查HBs Ag阳性标本采用中和试验确证,对筛查抗-HCV及抗-HIV阳性标本采用免疫印迹法确证。采用改良的发病率-窗口期模型计算HBV,HCV,HIV残余风险。结果四川地区血站分离血浆中HBV,HCV和HIV的残余风险分别为1/1 355,1/35 587和1/92 593。结论血站分离血浆仍存在一定残余风险,增加核酸检测等新型检测技术可进一步降低其残余风险。