靶向肿瘤干细胞标记CD133特异性结合肽的筛选和初步鉴定

摘要：目的筛选可与人肿瘤干细胞表面标记物CD133特异性结合的短肽并进行初步鉴定。方法首先合成人肿瘤干细胞
表面标记物CD133 细胞外片段的生物素化蛋白,以此为靶,利用噬菌体肽库技术,高通量液相淘选CD133 的特异性短
肽。应用夹心EL ISA选择出结合较强的克隆。提取DNA测序,通过竞争性阻断实验验证其特异性,根据噬菌体基因序
列推导出多肽序列。通过免疫荧光技术初步验证合成多肽和人大肠癌细胞的结合情况。结果4 轮液相筛选后,与
CD133特异性结合的噬菌体得到有效富集,第4轮与第1轮相比,富集了388倍。经ELISA 鉴定的20个噬菌体单克隆中,
有13个与CD133有较高亲和力,具有阳性意义。经比对得到11条完全一致的氨基酸序列TISWPPR,2条完全一致的氨
基酸序列STTKLAL,竞争性阻断ELISA实验表明第一条特异性较强。结论成功利用噬菌体肽库技术,淘选出1条可和
人CD133特异性结合的高亲和力短肽,为后续CD133的研究奠定了基础,表明从噬菌体肽库中液相淘选生物素化小分子
的高亲和力多肽的方法切实可行。     

CD133+人脐血造血祖细胞的干性维持培养及鉴定

摘要：目的从人脐带血中分选出CD133+造血祖细胞,并进行长时间干性维持培养。方法通过免疫磁珠法分选出人脐带血中
的CD133+造血祖细胞,经流式细胞仪检测免疫磁珠分选后的CD133+造血祖细胞。采用五种方法扩增培养该细胞,8周后,再通
过细胞形态学、流式细胞术、免疫细胞化学和免疫荧光对细胞进行干性鉴定,探索最佳干性维持培养方法。结果通过免疫磁珠
法可以从人脐带血中分选出80%以上的CD133+造血祖细胞。采用优化的无血清培养基培养8周之后,CD133+造血祖细胞可得
到有效扩增。而其他的培养基会使CD133+造血祖细胞由半悬浮细胞分化为梭形贴壁细胞,并且细胞状态欠佳。结论利用免
疫磁珠法分选出的CD133+造血祖细胞,采用优化的无血清培养基能够有效扩增该细胞,并可长期有效的维持其干性。
     

Has-mir-335 慢病毒表达载体的构建及其靶基因初步鉴定

构建过表达miR-335的稳定细胞株SW620并筛选和初步鉴定miR-335的靶基因。方法 扩增包含hsa-miR-335前体序列在内的基因片段,并将其亚克隆至PLVTHM慢病毒载体;扩增包含RASA1 3’UTR种子区域的基因片段并将其亚克隆至psiCHECK-2载体,并对此重组载体进行定点突变构建psiCHECK-2-RASA1-Mut;检测萤火虫荧光素值(F)和海肾荧光素值(R),以R/F表示相对荧光素酶活性。流式细胞仪筛选建立稳定表达miR-335的细胞株,利用荧光定量PCR检测miR-335及其靶基因RASA1 的表达,Western Blot检测RASA1蛋白水平的表达。结果 质粒双酶切以及测序鉴定 PLVTHM-miR335、psiCHECK-2-RASA1、psiCHECK-2-RASA1-Mut重组质粒构建成功。荧光定量PCR显示结直肠癌细胞中miR-335与 RASA1表达趋势成负相关。双荧光素酶报告基因分析证实hsa-miR-335能够作用于RASA1的3’UTR。稳定过表达miR-335的细胞中,miR-335的表达明显高于对照组和未处理组,蛋白质水平有所下降。结论 成功构建了PLVTHM-miR-335慢病毒重组质粒,构建过表达miR-335的细胞株SW620,初步证实RASA1是miR-335的靶基因。     

精神科院内感染临床特征与护理对策

医院内感染是指住院患者在医院内获得的感染,包括在住院期间发生的感染和在医院内获得而出院后发生的感染;但不包括人院前已开始或入院时已存在的感染。医院工作人员在医院内获得的感染也属医院内感染。目前,医院内感染已成为综合性医院主要感染性疾病之一,但在精神专科医院院内感染的发生情况报道较少。现对我院精神科院内感染的临床特点进行初步分析,并提出护理对策。     

Has-mir-335慢病毒表达载体的构建及其靶基因鉴定

接要：目的构建过表达miR-335的稳定细胞株SW620并筛选和初步鉴定miR-335的靶基因。方法扩增包含hsa-miR-335前体
序列在内的基因片段,并将其亚克隆至PLVTHM慢病毒载体;扩增包含RASA1 3’UTR种子区域的基因片段并将其亚克隆至
psiCHECK-2载体,并对此重组载体进行定点突变构建psiCHECK-2-RASA1-Mut;检测萤火虫荧光素值(F)和海肾荧光素值(R),
以R/F表示相对荧光素酶活性。流式细胞仪筛选建立稳定表达miR-335的细胞株,利用荧光定量PCR检测miR-335及其靶基因
RASA1的表达,Western Blot检测RASA1蛋白水平的表达。结果质粒双酶切以及测序鉴定PLVTHM-miR335、psiCHECK-2-
RASA1、psiCHECK-2-RASA1-Mut重组质粒构建成功。荧光定量PCR显示结直肠癌细胞中miR-335与RASA1表达趋势成负
相关。双荧光素酶报告基因分析证实hsa-miR-335能够作用于RASA1的3’UTR。稳定过表达miR-335的细胞中,miR-335的表
达明显高于对照组和未处理组,蛋白质水平有所下降。结论成功构建了PLVTHM-miR-335 慢病毒重组质粒,构建过表达
miR-335的细胞株SW620,初步证实RASA1是miR-335的靶基因。
     

贝伐珠单抗对肺腺癌化疗患者血清肿瘤标志物及VEGF水平的影响

目的 探讨贝伐珠单抗对肺腺癌化疗患者血清肿瘤标志物及血管内皮生长因子(VEGF)水平的影响.方法 选取2018年6月至2019年6月本院收治的肺腺癌患者82例,采用随机数字表法分为两组,每组41例.对照组给予常规化疗,观察组在对照组基础上加用贝伐珠单抗治疗.比较两组血清肿瘤标志物[肿瘤特异性生长因子(TSGF)和细胞角蛋白19片段(CK-19)水平]、VEGF水平、恶性胸腔积液治疗效果及不良反应发生情况.结果 治疗后,观察组TSGF(55.31±7.47)μg/L、CK-19(120.14±8.78)μg/mL、VEGF(72.38±19.49)pg/mL,均低于对照组的(75.14±6.35)μg/L、(144.21±7.42)μg/mL、(150.46±22.17)pg/mL,差异有统计学意义(P<0.05).观察组恶性胸腔积液治疗临床总有效率为87.80％,高于对照组的65.85％,差异有统计学意义(P<0.05).两组不良反应发生率比较差异无统计学意义.结论 贝伐珠单抗能降低肺腺癌化疗患者血清肿瘤标志物、VEGF水平,抑制肿瘤生长,提高恶性胸腔积液治疗效果,且安全性高.