腺病毒介导的hepaCAM基因对膀胱癌细胞周期的影响

目的：以腺病毒为载体,研究hepaCAM基因对膀胱癌细胞T24和BIU-87的细胞周期影响。方法：以带有hepaCAM基因的腺病毒载体pAdH5-hepaCAM感染两株细胞,采用RT-QPCR和Western-blot、细胞免疫荧光方法检测感染pAdH5-hepaCAM组,pAdH5空载组和未感染组的hepaCAM mRNA 、蛋白的表达及其细胞定位。并采用流式细胞术检测hepaCAM对两株细胞周期影响,Western-blot方法检测细胞周期蛋白cyclinD1。结果：感染hepaCAM的T24和BIU-87细胞,hepaCAM mRNA和蛋白水平明显升高。流式结果显示hepaCAM阻滞T24与BIU-87细胞于G0/G1期。Western-blot检测实验组cyclinD1明显低于空载和空白组。细胞免疫荧光显示hepaCAM在单个细胞中主要表达于细胞浆中,在细胞之间表达于细胞连接处。结论：hepaCAM能阻滞膀胱癌细胞T24和BIU-87于G0/G1期,并使G1期关键周期蛋白cyclinD1下调。     

金黄地鼠颊黏膜鳞癌动物模型的建立及其生物学特性的研究

目的建立金黄地鼠颊黏膜鳞癌动物模型,观察其生物学特性。方法 40只采用0.05%4-硝基喹啉-1-氧化物(4NQO)涂抹颊黏膜,10只采用自来水涂抹颊黏膜。苏木精-伊红(HE)、转录因子蛋白(Foxm1)免疫组织化学观察第8、12周组织标本。有限稀释法体外传代培养颊黏膜组织标本,观察平板克隆形成率,检测单克隆细胞内细胞角蛋白(CK)和波形蛋白(Vim)表达,染色体分析确定细胞核型。结果第12周时26(84.6%)只颊黏膜病理为原位癌,HE染色、Foxm1免疫组织化学结果表明,符合鳞癌细胞基本特征,CK和Vim免疫组织化学阳性率约为96.0%,染色体为四倍体核型。结论 4NQO涂抹诱发金黄地鼠颊黏膜癌变,建立金黄地鼠颊黏膜鳞癌动物模型。     

吡柔比星诱导膀胱癌细胞的凋亡及抑制PLCε基因的表达

目的 探讨吡柔比星对膀胱癌细胞增殖的影响及其作用机制。 方法 膀胱癌细胞T24和BIU-87分别用0.4、0.8、1.6、3.2 mg/L的吡柔比星处理24、48、72 h ,用四甲基偶氮唑盐（MTT）检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡率,qRT-PCR、RT-PCR检测磷脂酶Cε（PLCε）mRNA及凋亡调控基因Bcl-2 mRNA的表达,蛋白质印迹法检测PLCε蛋白的表达。将膀胱癌细胞分为空白组、吡柔比星处理组、Ad-shPLCε处理组、吡柔比星联合PLCε干扰腺病毒载体（Ad-shPLCε）处理组,检测并比较各组细胞增殖和Bcl-2蛋白的表达量。 结果 在膀胱癌细胞T24、BIU-87中,吡柔比星对细胞的抑制率呈浓度、时间依赖性,即随着药物浓度增加、处理时间延长,细胞抑制率升高;吡柔比星促进T24和BIU-87细胞凋亡,并且抑制PLCε和Bcl-2表达。吡柔比星处理组、Ad-shPLCε处理组、Ad-shPLCε联合吡柔比星处理组均能抑制细胞增殖和Bcl-2表达,且Ad-shPLCε联合吡柔比星处理组的抑制作用高于吡柔比星处理组,差异有统计学意义 （P<0.05）。 结论 吡柔比星能有效抑制膀胱癌细胞的增殖,可能与其抑制PLCε癌基因及下游Bcl-2基因的表达有关。     

肝细胞黏附分子对膀胱移行癌细胞基因表达谱的影响

目的利用Affymetrix基因表达谱芯片探讨肝细胞黏附分子(hepaCAM)对膀胱移行癌细胞基因表达谱的影响及作用的分子机制。方法运用Affymetrix Human plus 2.0全基因组芯片检测膀胱移行癌细胞株EJ细胞腺病毒-绿色荧光蛋白-hepaCAM感染组与腺病毒-绿色荧光蛋白感染组的基因表达谱,用SAM法进行差异基因分析、DAVID软件进行基因本体论分析及wikiPathway分析,并用RT-PCR和Western blot验证芯片结果。结果 hepaCAM能引起EJ细胞系基因表达谱的广泛变化,表达差异超过2倍以上的基因共2469个,其中上调基因1602个、下调基因867个。这些差异表达的基因功能主要涉及细胞周期、细胞增殖调节等方面。用RT-PCR对差异基因DNA修复蛋白,肝脏激酶B1和细胞周期蛋白D1进行验证,结果与基因芯片相符;进一步在3细胞株中用Western blot佐证DNA修复蛋白、肝脏激酶B1变化与芯片结果一致。结论 hepaCAM能够诱导EJ细胞基因表达谱的广泛变化,在基因水平通过多条通路作用于膀胱癌细胞。     

微RNA-103a-3p靶向调节Kazal基序富含半胱氨酸的逆转诱导蛋白表达对胃癌细胞迁移和侵袭能力的影响

目的 探讨胃癌细胞中微RNA(miR)-103a-3p与Kazal基序富含半胱氨酸的逆转诱导蛋白(RECK)表达的关系及其对胃癌细胞迁移、侵袭能力的影响。方法 将对数生长期人胃癌细胞系MKN-45细胞随机分为阴性对照(NC)组、miR-103a-3p组、RECK组、miR-103a-3p+RECK组。NC组细胞共转染miR-103a-3p-NC(miR-NC)和pCDH空表达载体,miR-103a-3p组细胞共转染miR-103a-3p模拟物(miR-103a-3p mimics)和pCDH空表达载体,RECK组细胞共转染miR-NC和含RECK的pCDH表达载体(pCDH-RECK),miR-103a-3p+RECK组细胞共转染miR-103a-3p mimic和pCDH-RECK。采用划痕试验检测各组细胞的迁移能力,采用Transwell实验检测各组细胞的侵袭能力,采用Western blot法检测各组细胞中RECK蛋白相对表达量。应用Starbase数据库通过生物信息分析预测miR-103a-3p与RECK的3′非翻译区(3′-UTR)是否存在结合位点,构建含有预测结合位点的野生...     

《临床检验基础》教学改革初探

如何培养高素质与临床结合紧密的医学检验技术人才,提高医学检验专业的教学质量是关键,笔者从多年的教学实践着手,对《临床检验基础》的教学模式、教学方法、教学手段进行了改革和创新,取得了较好的教学效果。     

浅谈循证检验医学发展

随着科学技术和基础医学研究的不断发展,人们不断对循证医学有了更深刻的了解,从而促进检验医学的发展,提出循证检验医学。     

循证检验医学的发展概况

循证医学（evidence-based medicine,EBM）是以证据为基础的医学,EBM在检验医学的应用即为循证检验医学（evi-dence-based laboratory medicine,EBLM）,是遵循EBM的核心思想,在应用大量可靠的临床资料和经验的基础上,研究检验项目临床应用的价值,为临床诊断、疗效观察、病情转归提供最有效、最实用、最经济的检验项目及检验组合,并最终获得可靠的检验信息资料,为医疗决策提供循证。1检验医学的发展进入21世纪,随着人类社会的进步,科学技术得到了迅猛发展,我国经济的快速增长使得人们生活水平得到普遍提高,人们的医疗需求、保健意识和法律意识也普遍增强,从而促进了医学的发展。医学检验从形式上而言,由原始的手工操作发展成更多的计算机控制的自动化操作;从内容上而言,以分子生物学技术、免疫标记技术等新技术、新方法的出现为代表,为医学检验赋予了新的内容和新的发展空间。     

梅毒螺旋体感染筛选方法的临床研究

<正>梅毒是性传播疾病中危害最严重的一种,近年来其发病率有上升趋势,为了选择一种梅毒螺旋体(treponema.pallidum,TP)检测的简便、准确方法,协助临床诊断和治疗,     

HepaCAM联合吡柔比星抑制膀胱癌BIU-87细胞的增殖

目的：研究肝细胞黏附分子（hepatocyte cell adhesion molecule,hepaCAM）联合吡柔比星（pirarubicin,THP）对膀胱癌细胞BIU-87的增殖影响。方法：将BIU-87细胞分为空白处理组、hepaCAM过表达腺病毒（adenovirus-GFP-hepaCAM,Ad-GFP-hepaCAM）处理组、THP处理组、Ad-GFP-hepaCAM联合THP处理组。噻唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）检测细胞增殖,流式细胞仪（flow cytometry,FCM）检测细胞周期,real-time PCR检测细胞周期相关基因cyclinD1,CDK2的mRNA表达。将空白、空载腺病毒（adenovirus-GFP,Ad-GFP）、hepaCMA过表达腺病毒（Ad-GFP-hepaCAM）处理的BIU-87细胞分别注射于裸鼠皮下,观察裸鼠成瘤情况并记录瘤体体积,4周后处死裸鼠。切取各组瘤体组织,组织切片行HE染色和免疫组化检测hepaCAM蛋白的表达。结果：Ad-GFP-hepaCAM联合THP处理组,与THP处理组比较,BIU-87细胞增殖受到明显抑制（F=2.702,P=0.00）;细胞周期明显阻滞于G0/G1期（F=10.989,P=0.000）;cyclinD1、CDK2的mRNA 表达明显下调（F=5.4299,P=0.000）。Ad-GFP-hepaCAM处理组的BIU-87细胞成瘤体积明显低于空白处理组（F=12.587,P=0.000）。结论：hepaCAM基因能够增强吡柔比星对膀胱癌BIU-87细胞的增殖抑制作用。