磁珠双阳性分选法在阵发性睡眠性血红蛋白尿症患者骨髓CD34+CD59+细胞体外扩增的应用

应用磁珠双阳性分选法在体外扩增阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)患的CD34 CD59 细胞，为实现PNH患进行临床自体骨髓移植(ABMT)或自体外周血干细胞移植(APBSCT)奠定基础。流式细胞术分选虽然经常用于细胞纯化，但难于满足大规模临床细胞分选的需要。本研究利用免疫磁珠系统，应用隔夜孵育法去除第一次分选时CD34 细胞吸附的磁珠，经过两次磁珠双阳性分选，从PNH患骨髓中分离出足够数量的CD34 CD59 细胞，用于体外培养扩增。结果显示：磁珠双阳性法分选的CD34 CD59 细胞与磁珠—流式细胞术二步分选法比较，在细胞生存、增殖、扩增及形成造血集落形成单位(CFU)的能力上均无显性差异。结论：磁珠双阳性分选法可能推广应用于其它双阳性或多阳性细胞的分离纯化，尤其是造血干／祖细胞的分离纯化。     

用流式细胞仪检测CD_(59)表型对诊断阵发性睡眠性血红蛋白尿症的意义

目的：探讨根据免疫表型检出糖化肌醇磷脂（ＧＰＩ）缺陷细胞在阵发性睡眠性血红蛋白尿症（ＰＮＨ）诊断中的意义。方法：用ＦＩＴＣ标记的ＣＤ５９单抗，以流式细胞仪分析２９例ＰＮＨ患者外周血及骨髓中ＣＤ５９－细胞的百分率。结果：正常人外周血红细胞、中性粒细胞（ＰＭＮ）及骨髓单个核细胞（ＭＮＣ）中的ＣＤ５９－细胞均＜５％，而２８例ＰＮＨ红细胞的ＣＤ５９－细胞均＞１０％（１２．８％～９８．０％），２９例ＰＭＮ均＞１０％（１２．０％～９０．１％），１５例骨髓ＭＮＣ均＞１０％（１７．９％～７３．５％）。１０例表现不典型或Ｈａｍ试验阴性者经本法确诊为ＰＮＨ，７例疑为本病者经本法否定。结论：用流式细胞仪检测ＣＤ５９表型是目前诊断ＰＮＨ的较直接而又特异、敏感的方法。     

骨髓增生异常综合征患者N-ras基因突变的连续观察

为连续观察骨髓增生异常综合征(MDS)病程进展过程中N-ras基因的突变情况,取19例MDS患者在不同FAB亚型时的骨髓片,每例患者至少取2次不同FAB亚型的骨髓片,应用PCR和寡核苷酸探针斑点杂交技术进行检测。结果显示:MDS患者中N-ras基因突变率为26.0％,主要为G→A的突变;随着MDS病情进展N-ras突变率逐渐增高,突变组比无突变组更易转化为白血病(P<0.05),突变组生存率明显低于无突变组(X~2=4.0149),P<0.05。结论提示,N-ras基因突变可作为观察MDS病程进展和判断其预后的一个指标。     

PNH异常红细胞的计数及其意义

采用乙酰胆碱酯酶（ＡｃｈＥ）单抗结合荧光免疫标记红细胞，通过流式细胞仪直接对单个红细胞膜上ＡｃｈＥ进行定量检测，发现阵发性睡眠性血红蛋白尿症（ＰＮＨ）患者体内红细胞可分为两个类群，一群ＡｃｈＥ含量正常（ＡｃｈＥ（＋）］，一群ＡｃｈＥ缺失［ＡｃｈＥ（一）］；ＡｃｈＥ（－）红细胞百分率与蛇毒因子（ＣｏＦ）诱发的补体溶血率呈正相关；经ＣｏＦ诱发补体溶血后，仍可发现有对补体不敏感但无ＡｃｈＥ的异常红细胞，说明对补体不敏感的红细胞仍有其它异常。本法有可能成为一种比补体溶血试验更灵敏、更特异并易定量的ＰＮＨ诊断方法。     

应用流式细胞仪检测自身免疫性溶血性贫血的临床观察

目的：提高自身免疫性溶血性贫血(AIHA)的诊断率。方法：对正常人及AIHA患者的红细胞经单克隆抗体标记后，采用Coulter Elite流式细胞仪技术测定并观察红细胞膜表面标记不同免疫物成分的百分数。结果：正常人少数红细胞膜表面附有免疫物；直接抗人球蛋白试验(Coombs试验)阳性的AIHA患者，其阳性凝集反应程度与红细胞膜表面标记免疫物的百分数呈正比例关系；Coombs试验阴性的AIHA患者，其红细胞膜表面标记免疫物百分数明显低于Coombs试验阳性者，但高于正常人；Coombs试验阴性而怀疑为AIHA患者，其红细胞膜表面标记免疫物的百分数有很大的差异。结论：采用流式细胞仪技术测定红细胞膜表面标记不同免疫成分百分数，灵敏度高，特异性强，可明显提高AIHA的诊断率和鉴别率。     

几种中药有效成分对中性粒细胞呼吸爆发的影响

用化学发光法观察了阿魏酸钠、葛根素、７６４３、麦芽醇、瑞香素、莨菪亭、甘露醇、灯盏花素、６５４－２几种中药有效成分对分叶核粒细胞在酵母聚精刺激下呼吸爆发产生活性氧的抑制作用。结果证明：在药物终浓度为０．００１ｍｍｏｌ·Ｌ－１时，其抑制作用的强度依次为：阿魏酸钠、葛根素＞７６４３、瑞香素、灯盏花素＞６５４－２、莨菪亭。     

体外转运红细胞囊泡的GPI锚定蛋白cD59保护阵发性睡眠性血红蛋白尿症红细胞

阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)是一种后天获得性克隆溶血疾病,由于血细胞膜上缺乏具有调节蛋白补体的GPI-锚定蛋白如CD59和CD55等,所以对补体敏感,易产生溶血。红细胞存储或ATP耗空时有囊泡释放,经免疫印迹试验证明囊泡中富含CD59。应用免疫亲和层析柱分离PNH CD59~-红细胞,然后与红细胞囊泡保温,保温后分别测定PNH CD59~-细胞表面CD59含量和溶血度。用流式细胞仪测定CD59,结果发现保温后CD59含量增加;用蛇毒因子溶血试验测得溶血度有显著下降。体外实验证明囊泡上的CD59可以转运到PNH CD59~-红细胞上,并具有抑制补体溶血的功能,使PNH CD59~-红细胞在受补体攻击时不易溶血。     

遗传性球形红细胞增多症研究进展

遗传性球形红细胞增多症研究进展吕照江，张之南遗传性球形红细胞增多症（ＨｅｒｅｄｉｔａｒｙＳｐｈｅｒｏｃｙｔｏ－ｓｉｓ简称球贫或ＨＳ）是一种常见的溶血性贫血，儿童更多见，在北欧的发病率高达１／５０００，国内也有不少病例报告。近年，对ＨＳ的发病机制的分子...     

从再生障碍性贫血患者检出阵发性睡眠性血红蛋白尿症异常细胞的观察

目的：探讨在再生障碍性贫血（再障）患者中检出阵发性睡眠性血红蛋白尿症（ＰＮＨ）异常细胞的发生率。方法：用荧光标记的抗ＣＤ５９抗体，以流式细胞仪检测缺失ＣＤ５９的异常细胞。结果：１０名正常人骨髓单个核细胞及外周血红细胞和中性粒细胞的ＣＤ５９标记率均＞９５％。２３例再障患者中约２／３标记率正常，另外１／３患者的标记率有不同程度的减低。结论：该法是从再障患者检出少量ＰＮＨ异常细胞的良好手段，可用以早期发现再障－阵发性睡眠性血红蛋白尿症综合征。