快速鉴定幽门螺杆菌与宿主基因型的方法学研究

目的探索采用焦磷酸测序技术进行幽门螺杆菌(Hp)鉴定与耐药以及宿主胃癌易感相关基因多态性分析的可行性,为临床提供一种快速的分析手段和诊疗依据。方法提取60例胃黏膜活检标本DNA(Hp阳性、阴性各30例),PCR扩增Hp 16S rDNA,23S rDNA以及人白细胞介素1B(IL-1B)基因特异性片段,对3个片段同时进行焦磷酸测序分析。结果 30例Hp阳性标本16S rDNA测序结果一致,均为5-′CGCGCAATCAGCGT-CAGTAATG-3′,该序列可作为标志性序列来鉴定Hp;对Hp阳性标本23S rDNA 2142及2143位点的多态性分析发现2142A→G突变,该突变通常会导致Hp对克拉霉素的耐药;对60例标本IL-1B基因-31和-511位点的多态性检测表明,-31位点有两种基因型,其中A/G基因型占80.0%,G/G 20.0%;-511位点有3种基因型,其中T/C基因型占60.0%,T/T基因型占26.7%,C/C基因型占13.3%。结论运用焦磷酸测序技术进行Hp鉴定、耐药性分析以及宿主胃癌易感性分析,具有准确、快速、操作方便、通量高等优势;除了胃黏膜活检标本,该方法亦可应用于其他标本如粪便、唾液、胃液等的Hp检测,同时可推广至其他菌种的鉴定和耐药分析,在弥补甚至替代传统的病原菌检测方面具有广阔的应用前景。     

2型糖尿病肾病患者血浆D-二聚体和纤维蛋白原检测的临床应用

目的探讨检测血浆D-二聚体（DD）、纤维蛋白原（FIB）水平对2型糖尿痛肾病的临床应用价值。方法对已确诊的184例2型糖尿病患者,其中2型糖尿病肾病患者108例,2型糖尿病患者76例,另选65例健康体检者作为对照组,分别测定各组血浆DDFIB的水平。结果DD、FIB的检测水平在糖尿病各组与对照组之间比较差异有统计学意义（P〈0．01、P〈0．05）。结论2型糖尿病肾病患者检测血浆DD和FIB水平有早期诊断意义。     

焦磷酸测序技术快速鉴定体液病原菌方法的建立与应用

目的 建立一套快速准确鉴定临床体液样本病原菌的方法学体系,评价其作为病原菌检测方法在临床检验中的应用价值.方法 采用柱式抽提试剂盒抽提205份体液样本中病原菌基因组dna,以细菌16s rrna基因为目标序列,通用引物扩增高变区片段,以焦磷酸测序技术进行扩增子序列分析并与数据库中的序列进行比对和病原菌种属鉴定.同时采用传统的细菌培养-生化方法进行病原菌检测鉴定,并以此为金标准,采用spss 11.0软件计算焦磷酸测序法检测敏感度、特异度、假阳性率、假阴性率、阳性预测值、阴性预测值、阳性似然比及阴性似然比,评价新方法的可行性与实用性.结果 细菌培养阳性率为39.5％( 81/205),其中71例为单一病原菌感染,10例为双重混合感染;与培养-生化鉴定结果相比,焦磷酸测序检测鉴定单一病原菌感染样本结果符合率为100％(71/71),鉴定双重混合感染样本10例中有7例符合.此外,对培养阴性的124例体液样本用焦磷酸测序检测鉴定,结果10例为阳性,且均为单一细菌感染.以培养方法作为金标准,焦磷酸测序法鉴定体液病原菌敏感度达100％,特异度为91.9％,假阳性率为8.1％,假阴性率为0％,阳性预测值为89.0％,阴性预测值为100％,阳性似然比为12.4,阴性似然比为0.结论 焦磷酸测序法直接检测鉴定临床体液样本中的病原菌具有快速、高敏感性、高准确率等优势,在临床病原微生物检测中具有很强的实用性和广阔的应用前景. abstract： objective to develop a method for rapid and accurate detection and identification of bacterial pathogens directly from body fluid specimens and to evaluate its application in clinical laboratory.methods bacteria dna was extracted from 205 body fluid specimens with column-based kit,and the high variable v1 and v3 regions of bacterial 16s rrna gene were amplified with broad-range primers.amplicons were analyzed by pyrosequencing and the generated sequences were searched in the bacterial identification database.traditional culture-biochemical method was also used for these specimens and the results were taken as the golden standard.spss 11.0 was used to calculate the sensitivity,specificity,false positive/negative rate,positive/negative predictive value and positive/negative likelihood rate of pyrosequencing method.results the positive rate of bacteria culture was 39.5％ (81/205),among which 71 were infected with single bacterium,and 10 were infected with two species of bacteria.compared with the culture identification results,pyrosequencing had a 100.0％ (71/71) concordance when applied to detect and identify bacterial pathogens from specimens with single specie bacterium infected.to specimens with two species bacteria infected,7 out of 10 specimens were in concordance with the culture identification results.besides,pyrosequencing detected 10 positive specimens and identified bacterial pathogens infected in the 124 culture-negative specimens.taken bacteria culture as the standard method,the sensitivity of pyrosequencing for identifying bacterial pathogen in body fluid was 100.0％,and with a specificity of 91.9％,the false positive rate was 8.1％,the false negative rate was 0.0％,the positive predictive value was 89.0％,the negative predictive value was 100.0％,and the positive and the negative likelihood rate were 12.4 and 0,respectively.conclusion pyrosequencing can be used to detect and identify bacterial pathogens directly from body fluid specimens with the advantages of rapidity,high sensitivity,high accuracy and high throughput.     

血清胱抑素C水平与不同糖耐量患者颈动脉粥样硬化的相关性研究

目的：探讨血清胱抑素C（Cys C）水平与不同糖耐量患者颈动脉粥样硬化的相关性。方法选取糖耐量正常者（NGT组）30例、糖耐量异常患者（IGT组）60例、新诊断2型糖尿病患者（T2DM组）60例,检测3组受试者血生化指标及血清Cys C水平,用超声检测颈动脉内膜中层厚度（IMT）。结果3组受试者血清Cys C水平及颈动脉IMT逐渐增高,组间两两比较差异有统计学意义（P＆lt;0.05）。多元Logistic回归分析显示,血清Cys C、高敏C反应蛋白（hs-CRP）、胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）和低密度脂蛋白（LDL-C）是颈动脉粥样硬化的独立危险因素。结论糖代谢异常早期即存在高血清Cys C水平,并参与了糖尿病动脉硬化的进程。     

老年晚期肿瘤患者下呼吸道感染病原菌分布及耐药性分析

目的了解老年晚期肿瘤患者下呼吸道感染的病原菌分布及其耐药性分析。方法416例老年晚期肿瘤合并下呼吸道感染患者的痰及下呼吸道分泌物进行常规细菌培养鉴定,用NCCLS推荐的K-B法测定病原菌的耐药性。结果416例病原菌中革兰阴性杆菌240株占57.69%,以铜绿假单胞杆菌为主,构成比为25.72%(107株),依次为大肠埃希氏菌和肺炎克雷伯杆菌。革兰阴性杆菌最敏感的药物是碳青霉烯类药物亚胺培南,耐药率均在13%以下。革兰阳性球菌102株,构成比为24.52%,其中以金黄色葡萄球菌为主,构成比为18.03%(75株),MRSA占61.3%;在药物敏感试验方面除对万古霉素100%敏感外,对其他药物都表现出不同的耐药率(8.5%-100%)。真菌的检出率为17.79%(74株),以白色念珠菌为主,构成比为12.26%(51株)。结论老年晚期肿瘤病人下呼吸道感染致病危险因素多样,应及时送检病原标本做细菌培养,按药敏结果合理选用抗生素。     

1871份血培养病原菌的分布及耐药性分析

目的了解我院血培养分离病原菌的分布及耐药性。方法患者血培养标本经BacT/Alerti120血培养仪培养,分离所得菌株用法国生物梅里埃API系统进行鉴定和K-B法做药敏。结果1871份血培养标本中分离病原菌株216株,阳性率为11.9%。其中革兰阳性细菌占53.7%(116/216),对万古霉素100.0%敏感;革兰阴性杆菌占41.7%(82/216),对碳青酶烯类药物IPM敏感率较高,耐药率在10.0%以下;念珠菌占4.6%(10/216)。结论血培养分离的病原菌以革兰阳性球菌为主,病原菌的种类较多,耐药率高,临床医师应加强疑似血流感染患者血流中病原菌的检测,合理应用抗生素,提高治愈率。     

一种简易网织红细胞计数窥盘的制作及使用体会

网织红细胞(Ret)计数是反映骨髓红系造血状态的敏感指标,可用于贫血的鉴别诊断和疗效判定.而Miller窥盘计数网织红细胞是ICSH推荐的网织红活体染色目测计数法.该法检验快速,与缩视野法相比较,准确度、精确度都明显优于后者.但该法用1/9的面积推断整个大方格的红细胞数,涂片中红细胞分布必须很均匀,否则会得出错误结果[1],为此我们自制简易网织红细胞计数窥盘,经临床应用效果良好,即使在制片不很均匀的情况下,也取得较好的检测结果.     

PCR-焦磷酸测序法快速鉴定菌血症病原菌

世界范围内成人和儿童菌血症都是高发病率和高死亡率的疾病,每年世界范围内菌血症患者有2 000万例.因病原菌不能鉴定而应用广谱抗生素或不适当抗生素治疗所导致的死亡率非常高,但欧洲每年仍有135 000例患者死于菌血症,在美国更是高达215 000例[1].