一种用于定量分析ABO基因启动子区域甲基化水平方法的建立

目的:建立重亚硫酸盐测序法(BSP法)定量分析ABO基因启动子区CpG岛的甲基化水平.方法:提取胃癌细胞株MKN45和KatoⅢ以及人全血基因组DNA,以重亚硫酸盐转化法修饰其DNA,应用Meth Primer软件在ABO基因启动子区非CpG位点区设计4对特异性甲基化扩增引物,将ABO启动子附近区域的CpG岛分成4个片...     

mica基因的克隆及其在原核系统中的表达

本研究构建mica基因原核表达系统并纯化MICA蛋白。利用外周血标本提取RNA,经RT-PCR获取mica基因cDNA。将mica cDNA经TOPO克隆连接构建克隆载体,然后将克隆重组载体和原核表达载体pET-28a经双酶切后进行连接构建重组表达载体,进而转染宿主菌E.coliBL21DE3进行表达。利用亲和层析的Ni-NTASpin纯化重组的MICA蛋白。结果表明:带有重组质粒pET-28a-mica的宿主菌经IPTG诱导表达后,以可溶性形式大量表达重组的MICA蛋白,经Ni-NTA Spin纯化后得到重组的MICA蛋白。结论:本研究构建了mica基因原核表达系统并纯化了MICA蛋白,为探讨MICA与移植免疫的关系奠定了基础。     

献血者抗-HCV阳性标本中RIBA确认情况的研究

目的探索献血人群ELISA试剂抗-HCV阳性标本RIBA确认阳性情况。方法收集492份ELISA试剂抗-HCV阳性标本,采用重组免疫印迹实验(RIBA)进行确认,并比较不同ELISA试剂检测情况。结果 492份抗-HCV阳性标本中RIBA确认阳性89份、可疑164份、阴性239份,确认阳性比例为18.1%。RIBA确认阳性的标本,2种抗-HCV ELISA试剂检测结果均呈现阳性反应;一种ELISA抗-HCV试剂阳性反应的标本中,RIBA确认均为阴性或可疑。2种ELISA试剂抗-HCV均阳性反应的标本中,RIBA确认阳性率为56.9%—60.0%。结论献血人群ELISA试剂抗-HCV阳性标本中存在较高的假阳性反应,在反馈献血者检测信息中应加以考虑。     

基于电子认证的HIV确认阳性献血者屏蔽信息系统的研发

<正>卫生部《血站管理办法》和《血站质量管理规范》均要求血站建立对有易感染经血液传播疾病危险行为的献血者献血后的报告工作程序、献血屏蔽和淘汰制度。目前,国内血     

双碱基缺失型等位基因复合杂合导致的类孟买型个体1例

本研究探索1例类孟买型血型的分子机制,为稀有血型的筛选和鉴定提供理论基础。以血型血清学方法鉴定该个体红细胞的ABO和H表型,利用聚合酶链反应扩增类孟买表型个体的abo基因第6、7外显子和α1,2岩藻糖基转移酶基因(fut1)编码区,并对PCR产物直接测序分析。对纯化的fut1扩增产物进行TOPO克隆和测序,对2处变异位点进行单倍体序列分析。结果表明:血清学分析确认该个体为罕见的类孟买表型;直接测序发现先证者fut1基因第547位和880位附近存在碱基缺失或插入变异;TOPO克隆测序法证实,fut1基因1条单倍体存在第547-552位两碱基AG缺失,另1条单倍体存在880-882位两碱基TT缺失。这2种变异均导致移码突变,并提前形成终止密码。结论:在献血人群中发现1例罕见的类孟买表型,其分子机制为双碱基缺失型fut1等位基因复合杂合所致的α1,2岩藻糖基转移酶活性减弱。     

血站建立受者疑似感染经输血传播疾病处置机制的探索

<正>迄今为止,国内外采供血机构对医疗用血筛查输血传播病原体,所采用的无论是酶联免疫、化学发光还是分子生物学方法等,抑或几种方法的配伍,其结果都表明现有的方法尚无法避免经输血传播疾病的"窗口期"感染问题,因而经输血传播疾病的风险始终存在。由此,采供血机构建立受者疑似感染经输血传播疾病的处置机制并列入危机管理的范畴的重大课题摆在了血站管理者面前。我们结合血站管理的实践对此课题作了初步探讨,现报告如下。     

血液核酸筛查室内质控品浓度选择的探讨

<正>献血者血液检测HBV、HCV和HIV病原体的核酸能有效缩短病原体感染性指标检测的窗口期,降低输血传播性疾病风险,提升血液安全[1～3]。目前我国采供血机构正在逐步推广血液核酸检测技术的应用,而在《血站技术操作规程     

采供血机构防范HIV感染者献血的对策探讨

正献血法的实施,血站"一法两规"的贯彻执行,卫生部医疗质量万里行——血液安全督导检查活动的深入开展,使采供血机构的血液安全管理水平不断得到提升,输血的安全性和有效性得到进一步保障。然而,近年来随着我国艾滋病疫情出现的一些新特点,如:性传播持续成为主要传播途径,同     

不同培养体系对脐血造血干细胞粒细胞-巨噬细胞集落形成单位的影响

目的比较H4534与GF-H4434两种甲基纤维素培养基对脐血生成粒细胞-巨噬细胞集落形成单位（CFU-GM）的影响。方法从新鲜脐血标本中分离出造血干细胞,接种于H4534和GF—H4434培养基,于37℃、5％二氧化碳饱和湿度条件下培养14—16d。结果在样本中CD34＋细胞百分率和有核细胞总数检测结果相似的情况下,H4534与GF—H4434培养条件下CFU-GM集落数分别为（55．71±28．24）／105与（66．28±31．99）／105,两者比较差异有统计学意义（u=4．16,P〈0．05）。GF-H4434培养条件下还产生了红细胞爆裂型集落形成单位（64．89±34．95）／105和粒细胞-红细胞-巨噬细胞-单核细胞集落形成单位（2．53±2．08）／105。结论GF—H4434甲基纤维素培养基中脐血样本CFU-GM集落形成能力更强,更适合脐血质量鉴定。