大黄素通过减少DNMTs的表达对胰腺癌细胞抑癌基因ppENK发挥去甲基化作用研究

目的 研究大黄素对胰腺癌细胞Panc1 DNA甲基转移酶（DNA methyltransferases,DNMTs）的影响,及其对抑癌基因前脑啡肽原（pre-proenkephalin,ppENK）启动子区Cp G岛的去甲基化作用,探讨大黄素是否可通过降低DNMTs的表达逆转ppENK的甲基化状态。方法 CCK-8检测不同浓度大黄素对Panc1细胞生长的影响,探索最佳用药浓度,重亚硫酸盐测序PCR(bisulfite genomic sequencing PCR,BSP)检测不同浓度大黄素对ppENK基因甲基化状态的影响,PCR和Western Blot检测ppENK及甲基转移酶DNMT1、DNMT3a的m RNA和蛋白表达情况。结果 大黄素以时间梯度和浓度梯度依赖性抑制Panc1细胞生长,其半数最大抑制浓渡（half maximal inhibitory concentration,IC50）约为40μmol/L,大黄素可使ppENK甲基化状态减弱,非甲基化状态增强;可减弱DNMTs的m RNA和蛋白表达,增强ppENKm RNA和蛋白表达。结论 大黄素可不同程度地使Panc1 pp...     

大黄素联合5AzA-cdR增强对胰腺癌细胞ppENK抑癌基因的去甲基化作用研究

目的 研究大黄素联合5-氮-2’脱氧胞苷（5AzA-cdR）能否增强其对胰腺癌细胞抑癌基因前脑啡肽原（ppENK）的去甲基化作用。方法 选择Panc1细胞为研究对象,首先采用细胞计数实验（CCK-8）检测不同浓度大黄素对胰腺癌细胞的生长抑制情况,根据CCK-8结果选择最适大黄素用药的浓度,后将Panc1细胞分为四组：对照组、最适大黄素浓度组、5AzA-cdR组和大黄素联合5AzA-cdR用药组,采用斑点杂交实验（Dot-blot）检测四组对基因组5-甲基胞嘧啶（5mc）的影响,最后使用重亚硫酸盐测序PCR(BSP)检测四组对ppENK甲基化的影响。结果CCK-8显示,大黄素以浓度梯度和时间梯度抑制Panc1细胞生长;Dot-blot结果显示,最适大黄素浓度组和5AzAcdR组5 mc水平低于对照组,差异均有统计学意义（t分别=12.55、20.12,P均<0.05）,5AzA-cdR组5 mc较最适大黄素浓度组下降明显,差异有统计学意义（t=17.76,P<0.05）,大黄素联合5AzA-cdR用药组5 mc较对照组、最适大黄素浓度组以及5AzA-cdR组显著下降,差异有统...