血清高尔基体蛋白73诊断原发性肝癌价值探讨

目的探讨高尔基体蛋白73（GP73）诊断肝癌的价值。方法在肝癌107例、肝硬化53例、肝衰竭患者40例和健康人34例,采用ELISA法检测血清GP73浓度,采用ROC曲线寻找GP73诊断肝癌的最佳截断点,并与AFP进行比较,以评价GP73诊断肝癌的价值。结果原发性肝癌、肝硬化和慢性肝衰竭患者血清GP73水平分别为123.5±22.4ng/ml、108.9±30.3ng/ml和130.3±45.6ng/ml,均显著高于健康对照人群（44.1±38.9ng/ml,P〈0.05）;原发性肝癌、肝硬化和慢性肝衰竭患者血清AFP水平分别为236.6±205.3ng/ml、5.3±5.56ng/ml和53.9±40.40 ng/ml;选择血清GP73最佳截断点为77.4ng/ml,其诊断原发性肝癌的灵敏度为89.6%,特异度为100%,AFP的最佳截断点为35.4ng/ml,其诊断原发性肝癌的灵敏度为64.2%,特异度为100%;原发性肝癌患者血清GP73水平在不同年龄、性别、Edmondson分级和结节数目多寡之间无显著性相差,而在不同肿瘤大小、TNM分期和是否合并肝硬化方面均有显著性差异（P＜0.05）。结论血清GP73诊断肝癌的灵敏度优于AFP,尤其在AFP阴性患者诊断中有一定的意义。     

EV71结构蛋白VP1的原核表达及VP1单克隆抗体的制备

目的:原核表达EV71结构蛋白VP1并制备其单克隆抗体。方法:以肠道病毒71型(EV71)P1基因为模板,设计引物扩增出目的片段VP1,将其连接至大肠杆菌表达载体pET-32a(+)上,转化大肠杆菌TG1,筛选出阳性克隆后进行测序。将重组表达载体pET-32a(+)-VP1转化大肠杆菌表达菌株BLgold(DE3),对该工程菌进行诱导表达,SDS-PAGE电泳分析,表达产物以包涵体的形式存在。包涵体用6 mol/L盐酸胍溶解,经过Ni-NTA亲和层析法纯化,获得了纯度较高的目的蛋白。用纯化的VP1蛋白免疫小鼠,制备单克隆抗体(mAb)。结果:获得了24株mAb,其中1株EV71 Westernblot法鉴定呈阳性,5株EV71间接免疫荧光法(IFA)鉴定阳性。结论:成功地制备了VP1的mAb。     

藕断丝“莲”话营养

莲藕的药用功效非常惹人,中国最早的药典《神农本草经》记载莲藕的功效为“主补中养神,益气力,除百疾。久服,轻身耐老,不饥延年”。李时珍把莲藕视为祛淤生津之佳品。     

小鼠胚胎生殖细胞的建立及其印记状态

目的 成功建立小鼠胚胎生殖细胞（EGCs）系,并初步分析小鼠胚胎生殖细胞的印记状态。方法 建立交配后12.5d（12.5dpc）原始生
殖细胞 (PGCs）来源的小鼠EGCs,通过碱性磷酸酶（AKP）染色、免疫荧光细胞化学、体内分化及体外分化等方法检测EGCs的多能性,并以小鼠
胚胎干细胞（ESCs）为对照,应用Real-time PCR检测EGCs中与发育相关的Ins2、Lgf2、H19、Lgf2r等11个父源与母源印记基因的表达情况。结果
成功建立小鼠EG细胞系,EGCs克隆AKP染色显示有高水平的AKP活性,免疫荧光细胞化学方法显示克隆表达小鼠ESCs多能性标记物Oct4及细胞表面
标记SSEA-1。核型分析检测显示,小鼠EGCs为正常的40条染色体,体内可分化出3个胚层来源的组织,说明小鼠EGCs具有多能性;Real-time PCR
结果显示EGCs的印记基因表达量显著高于ESCs。结论 12.5dpc PGC来源的EGCs的印记基因处于擦除状态。     

血清GP73检测在肝脏疾病诊断中的临床意义

目的 探讨GP73检测在肝脏疾病临床诊断中的应用价值.方法 收集155例各类肝脏疾病患者(57例肝炎、69例肝硬化和29例肝癌)及216份对照组(80名健康人血清和136例非肝病患者)血清,利用酶联免疫分析方法 对血清GP73、AFP进行定量检测,利用生化分析仪检测ALP、ALT、AST、GGT、CHE、TP、ALB、TBIL、DBIL的含量,利用荧光定量PCR方法 检测HBV DNA拷贝,分析不同肝病患者血清GP73含量与其他指标的关系.结果 肝脏疾病组的血清GP73、ALP、ALT、TBIL含量中位数(171.3μg/L、100 U/L、51.5 U/L、39.6μmol/L)高于对照组中位数(49.6μg/L、52.5 U/L、33.5 U/L、20.0μmol/L),差异有统计学意义(χ~2值分别为91.429、33.441、36.490、28.183,P均<0.01),肝脏疾病组的血清TP、ALB、DBIL含量(64.5 U/L、30.7 U/L、15.2 μmol/L)与对照组(41.8 U/L、20.5 U/L、13.2 μmol/L)比较差异无统计学意义(χ~2值分别为1.093、2.350、0.335,P均>0.05);血清GP73与AST、CHE、ALB、TBIL和DBIL相关(r分别为0.308、-0.359、-0.278、0.338、0.333,P均<0.01),HBV感染与无HBV感染标本之间的GP73含量比较,差异无统计学意义(χ~2=2.731,P>0.05);将GP73与其他指标结合起来可以将肝病诊断的敏感度和特异度提高到85.2%和89.8%.结论 将GP73列入联合检测可提高各种肝病诊断的准确率.