哮喘大鼠气道平滑肌细胞ERK信号通路调控Smad6/7的研究

目的探讨在哮喘大鼠气道平滑肌细胞(ASMC)中ERK信号通路对Smad6/7蛋白的调控。方法复制哮喘大鼠模型,原代培养ASMC,实验设未干预组(A组)、细胞外调节激酶(ERK)阻断剂(U0126)组(B组)、血小板源性生长因子(PDGF)组(C组)、PDGF+ERK阻断剂组(D组)。免疫组化法测定Smad6/7蛋白的表达,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定Smad6/7 mRNA表达。结果哮喘大鼠ASMC中Smad 6/7蛋白B组显著高于A组(P<0.01),C组显著低于A组(P<0.01),D组与A组比较无统计学差异(P>0.05);各组哮喘大鼠ASMC中Smad6/7 mRNA表达无统计学差异。结论哮喘大鼠ASMC中ERK信号通路调控Smad6/7的作用发生在蛋白水平,不发生于基因水平。     

哮喘大鼠气道平滑肌细胞培养方法探讨

目的：探讨哮喘大鼠气道平滑肌细胞培养方法,了解其生长特性。方法：制作慢性哮喘大鼠模型,用酶解离法、组织贴块法分别培养哮喘大鼠气道平滑肌细胞,倒置相差显微镜观察其生长情况,用免疫组化SP法分析SM α-action抗原的表达。结果：以酶解离法培养2～3d可见细胞贴壁,7～9d可融合;以贴块法培养7～10d组织块周围有细胞长出,10～14d融合,传代后细胞“谷峰”生长明显。SM-α action免疫组化SP法染色均呈阳性。结论：两种方法均能培养出纯度较高的哮喘大鼠平滑肌细胞,其中酶解离法细胞产量高,纯度高,生长速度快,能为气道疾病细胞实验提供可靠的细胞模型。     

ERK信号转导通路在哮喘大鼠气道重塑中的作用

目的研究在哮喘大鼠气道平滑肌细胞ASMC（airway smooth muscle cell）中ERK信号转导通路对哮喘气道重塑中的作用。方法原代培养ASMC,实验设未干预组（A组）、ERK阻断剂（U0126）组（B组）、PDGF组（C组）、PDGF＋ERK阻断剂组（D组）。B组又分为B1组、B2组、B3组、B4组,加入浓度分别为0．1μmol／L、1μmol／L、5μmol／L、10μmol／L的U0126;C组又分为C1组、C2组、C3组、C4组,加入浓度分别为1μg／L、10μg／L、25μg／L、50μg／L的PDGF—BB。免疫组化法测ERK。蛋白的表达（仅测A、B4、C4、D组）,RT—PCR法测其mRNA表达。结果ASMC中ERK,蛋白表达B4组显著低于A组（P〈0．01）,C4组显著高于A组（P〈0．01）,D组与A组相比差异无统计学意义（P〉0．05）;B1组、B2组、B3组．B4组ERK,mRNA表达均显著低于A组（P〈0．01）,U0126以浓度依赖性的方式抑制PDGF—BB诱导ASMC中ERK的活化;C1组、C2组、C3组、C4组ERK1 mRNA表达均显著高于A组（P〈0．01）,ERK1 mRNA的表达与PDGF—BB存在明显的浓度依赖关系,D组则与A组相比差异无统计学意义（P〉0．05）。结论PDGF可剂量依赖地激活哮喘大鼠ASMC内的ERK通路,ERK通路参与了PDGF诱导的ASMC增殖的细胞内信号转导过程。     

PDGF对哮喘大鼠气道平滑肌细胞中ERK通路的影响研究

目的：研究血小板源性生长因子（PDGF）对哮喘大鼠气道平滑肌细胞（ASMC）中ERK信号通路的调控作用。方法建立哮喘大鼠模型,原代分离培养ASMC,设未干预组（A组）、ERK阻断剂组（B组）、PDGF组（C组）和PDGF＋ERK阻断剂组（D组）。A组不加干预;B组又分为B1、B2、B3、B4组,分别加入浓度为0.1、1、5、10μmol/L的ERK阻断剂U0126;C组又分为C1、C2、C3、C4组,分别加入浓度为1、10、25、50μg/L的PDGF同二聚体PDGF- BB;D组加入10μmol/L的U0126和50μg/L的PDGF- BB。以RT- PCR法检测各组ERK1和TGF-β1的mRNA表达,免疫组化法检测A、B4、C4和D组中以上蛋白的表达。结果 RT- PCR提示B1、B2、B3、B4组ERK1 mRNA表达均显著低于A组（均P＜0.01）,U0126以浓度依赖的方式抑制PDGF诱导的ASMC中ERK的活化,C1、C2、C3、C4组ERK1 mRNA表达均显著高于A组（均P＜0.01）,ERK1 mRNA的表达与PDGF- BB存在明显的浓度依赖关系,D组与A组比较无统计学差异（P＞0.05）。免疫组化提示B4组ASMC中ERK1蛋白表达显著低于A组,C4组显著高于A组（均P＜0.01）,D组与A组相比无统计学差异（P＞0.05）;B4组TGF-β1蛋白表达显著低于A组,C4组显著高于A组,同时C4组显著高于B4组（均P＜0.01）,D组与A组相比无统计学差异（P＞0.05）。结论 PDGF可剂量依赖性激活哮喘大鼠ASMC内的ERK通路,同时伴随TGF-β1信号通路的活化。ERK通路参与了ASMC增殖的细胞内信号转导过程,PDGF可能经ERK环节促进TGF-β1通路活化。     

抗IgE单克隆抗体奥莫立迈在哮喘治疗中的应用

IgE介导的免疫反应在支气管哮喘(哮喘)的发病机制中起着重要作用.奥莫立迈是一种重组人抗IgE单克隆抗体,选择性地与人IgE结合,阻断IgE依赖的抗原呈递,最终减缓或阻止IgE介导的炎症反应,用于12岁以上中到重度持续性哮喘联合应用吸入糖皮质激素加长效β2受体激动剂效果不佳患者的治疗.临床试验表明,奥莫立迈能明显降低哮喘的恶化次数和严重程度,改善患者肺功能和提高生活质量.     

抗IgE单克隆抗体奥莫立迈在哮喘治疗中的应用

IgE介导的免疫反应在支气管哮喘(哮喘)的发病机制中起着重要作用.奥莫立迈是一种重组人抗IgE单克隆抗体,选择性地与人IgE结合,阻断IgE依赖的抗原呈递,最终减缓或阻止IgE介导的炎症反应,用于12岁以上中到重度持续性哮喘联合应用吸入糖皮质激素加长效β2受体激动剂效果不佳患者的治疗.临床试验表明,奥莫立迈能明显降低哮喘的恶化次数和严重程度,改善患者肺功能和提高生活质量.