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次氯酸对人血清白蛋白的氧化修饰影响及与高级氧化蛋白产物的关系 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 研究次氯酸对人血清白蛋白(HSA)的氧化修饰影响及与高级氧化蛋白产物(AOPPs)之间的关系。 方法 有氧条件下在恒定浓度的HSA(60 mg/ml)内加入不同浓度次氯酸(0、1、5、10、20、30、40、50、60 mmol/L,最终浓度),观察氧化剂对HSA的修饰作用。凝胶排阻色谱法检验HSA氧化修饰结果,在线光谱扫描(190 nm~400 nm)分析修饰产物的光谱特性。结果 次氯酸可氧化修饰人血清白蛋白,其修饰产物主要为二聚体HSA和六聚体HSA。发现次氯酸对HSA单体和HSA二聚体的氧化修饰为一级反应;对诱导生成的AOPPs为准一级反应;而对诱导生成的HSA六聚体则为二级修饰反应。同时发现白蛋白对AOPPs的主要贡献者是六聚体形式的HSA,光谱分析表明HSA聚集体的最大吸收峰发生红移,提示HSA聚集体是由于蛋白中的酪氨酸残基通过氧化交联方式而聚集形成的。 结论 HSA经次氯酸处理后主要发生了蛋白聚集。而对AOPPs的主要贡献者是六聚体形式的HSA。 相似文献
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卢燕雯 《国际泌尿系统杂志》2006,26(4):555-559
氧化应激与慢性肾功能不全(CRF)的一系列并发症如高血压、动脉粥样硬化、贫血、炎症、衰老等的发生有着密切关系。近年来的研究已明确氨基酸、肽类及蛋白质极易遭受各种自由基及相关氧化剂的攻击。血浆蛋白遭受自由基攻击后,发生氧化修饰而生成-高级氧化蛋白产物(AOPPs,AdvancedOxidativeProteinProducts),因其可作为一个敏感的评定氧化应激的指标而日益引起人们的关注。一系列的研究都显示,AOPPs在慢性肾功能衰竭时明显升高,其不仅是反应氧化应激的新指标,同时也是一种新型的尿毒症毒素。 相似文献
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目的建立人血浆3-氯酪氨酸(3-CT)浓度的定量分析方法。方法用三氯乙酸沉淀血浆蛋白后,HPLC—ECD定量检测。结果3.氯酪氨酸血浆标准曲线的线性范围为0.0625—2.000μmol·L^-1,r〉0.9966,回收率〉71.8%。日内和日间的精密度(RSD%)分别〈8.8%和11.1%。3-氯酪氨酸的保留时间为(16.57±0.30)min,总分析时间32min。测得健康人和尿毒症患者(各6例)血浆3-CT浓度分别为(0.16±0.13)和(2.47±0.73)μmol·L^-1(P〈0.01)。结论本法所需样本量低,预处理步骤简便,适用于临床进行氧化应激、治疗、预后、诊断等研究工作之需。 相似文献
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50例PTFE人造血管术后存活率及并发症分析 总被引:1,自引:0,他引:1
一直以来,桡动脉-头臂静脉(bresica-cimino)自体动静脉内瘘因其寿命长、并发症低而成为维持性血透患者的首选血管通路,但即使经过仔细地术前筛选,仍有20%~40%患者不能成功建立自体动静脉内瘘[1],此时,polytetra-fluorothylene(PTFE)人造血管往往成为替代的选择。我们对近年PTFE人造血管通路的通畅率、并发症及相关因素进行回顾性分析。一、对象与方法1.研究对象:1997年10月至2000年10月,我们共对41例维持性血透患者进行了50例次PTFE人造血管置管术。患者平均年龄为(63±10)(28~81)岁,其中男性16例,女性25例,18例为糖尿病患者。所有患者接受人造血管手术之前均有自体动静脉内瘘失败史,其中22例曾有2次或以上失败记录。 相似文献
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目的 研究次氯酸氧化的人血清白蛋白(human serum albumin-advanced oxidative protem products,HSA-AOPPs)的制备标准化、次氯酸的清除以及微量HSA-AOPPs的检测.方法 于搅拌条件下在HSA(60mg/mL)内滴加次氯酸至终浓度为60 mmol/L即制得HSA-AOPPs.透析法或层析法清除次氯酸.碘量法测定次氯酸残留量.微量HSA-AOPPs的测定采用高效凝胶色谱法(HP-SEC),曲线下面积(AUC)用于定量计算.结果 恒定的次氯酸加入量对HSA-AOPPs的产量非常关键.当次氯酸和HSA两者克分子浓度之比为1:66左右时最为理想.过量次氯酸可导致高分子量AOPPs的破坏,大量蛋白碎片产生.层析法清除次氯酸残留优于透析法.色谱法检测AOPPs的灵敏度比分光光度法要高100倍以上.结论 AOPPs的标准化制备关键在于恒定次氯酸对HSA的克分子比值.HP-SEC方法可用于微量AOPPs的测定. 相似文献
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血浆白蛋白中胱氨酸和精氨酸是主要的氧化剂攻击基团 总被引:1,自引:1,他引:0
目的 探讨自由基攻击对白蛋白结构的影响。 方法 以正常人为对照组,尿毒症患者为实验组,高级氧化蛋白产物(AOPPs)和羰基为氧化应激指标。先对各组的氧化应激水平进行评价,随后从各组分离、纯化出白蛋白,再对其氨基酸组成进行分析比较。结果 尿毒症患者的AOPPs,及羰基水平约为正常人的2倍(P < 0.01)。同正常人相比,尿毒症患者水解出的17种白蛋白氨基酸组成大部分低10%左右,其中胱氨酸和精氨酸在两组间差异有统计学意义(P < 0.05)。结论 氨基酸的普遍损失是影响血浆蛋白结构和功能的关键因素,其中胱氨酸和精氨酸是自由基攻击的两个主要靶基团。 相似文献
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目的 探讨尿毒症患者体内长期积蓄的高水平尿毒素是否会通过参与高级氧化蛋白产物(AOPP)的生成而介导蛋白质的氧化损伤。 方法 以丙二醛(10 mmol/L)、马尿酸(20 mmol/L)和对甲酚(10 mmol/L)为尿毒素代表。人血清白蛋白(HSA)、健康人和尿毒症患者血浆用20 mmol/L的PBS(pH 7.4)统一调整到质量浓度为50 g/L,随后分别加入尿毒素至指定浓度。对照组内不加任何尿毒素。37℃分别温育0.5 h和24 h后,分别测定各组的AOPPs、蛋白巯基及二酪氨酸浓度。高效液相色谱(HPLC)法用于观察蛋白质的交联聚集情况。 结果 与对照组相比,尿毒素组的AOPP浓度平均增加了121.5%(P < 0.05)。尿毒素尚可降低蛋白巯基浓度,降低幅度平均达14.7%(P < 0.05);同时蛋白二酪氨酸水平增至119.2%(P < 0.05)。HPLC结果表明尿毒素可以时间依赖性方式显著诱导高分子量AOPP(HMW-AOPPs)的生成,平均增幅为148.4%~333.3%(P < 0.05)。 结论 小分子类尿毒素可通过时间依赖性方式诱导HMW-AOPPs的生成而介导蛋白质的氧化损伤。除了髓过氧化物酶(MPO)-H2O2-Cl-通路的激活之外,尿毒素的介导损伤也是较为重要的体内AOPP生成机制之一。 相似文献
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抗中性粒细胞胞浆抗体检测在肾脏病诊治中的应用 总被引:5,自引:0,他引:5
抗中性粒细胞胞浆抗体检测在肾脏病诊治中的应用上海医科大学华山医院(200040)林善锬,卢燕雯抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)是针对中性粒细胞胞浆抗原而产生的一类自身免疫性抗体。中性粒细胞包含了多种颗粒成分如蛋白酶3(PR3)、髓过氧化物酶(MPO)... 相似文献
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目的 探讨尿毒症时高磷是否通过局部环氧化酶2( COX2)途径刺激人甲状旁腺细胞增生和功能亢进.方法 收集19例行甲状旁腺切除术的尿毒症患者甲状旁腺组织,通过免疫组化和免疫共染法观察COX2和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达和分布.进行人甲状旁腺细胞原代培养,分别予高磷和正常磷干预,48 h后检测两组细胞上清液甲状旁腺激素(iPTH)水平;应用Western印迹和实时PCR方法观察细胞中COX2及PCNA的表达.结果 在获取的62枚尿毒症甲状旁腺结节中43枚为结节性增生,19枚为弥漫性增生,均观察到大量PCNA阳性细胞和COX2高表达.在弥漫性和结节性增生的甲状旁腺组织中,分别有80.60%及85.20%的COX2阳性细胞同时表达PCNA.在体外原代培养的尿毒症患者甲状旁腺细胞中,高磷能显著增加iPTH分泌,同时显著上调COX2及PCNA蛋白和基因表达.结论 高磷可能通过局部COX2表达和代谢途径参与尿毒症甲状旁腺细胞增生和功能亢进. 相似文献
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