嵌合HAdV六邻体蛋白抗原表位的rFLU/HAdV/Hexon疫苗候选株构建及免疫效果研究

目的构建、拯救以PR8流感病毒为载体嵌合HAdV六邻体蛋白抗原表位的疫苗候选株,对其免疫原性及免疫保护性进行评价。方法应用反向遗传学技术,以流感病毒PR8为载体,将HAdV六邻体蛋白抗原表位的基因插入流感病毒非结构蛋白NS基因,构建重组质粒NS1-Hexon,将重组质粒与PR8流感病毒其他7个基因组质粒共转染COS-1/MDCK共培养细胞,成功拯救嵌合HAdV六邻体抗原表位重组疫苗候选株,命名为rFLU/HAdV/Hexon,通过HA、RT-PCR、IFA、Western blotting和电镜等方法对rFLU/HAdV/Hexon进行鉴定。rFLU/HAdV/Hexon经鸡胚培养、浓缩纯化后滴鼻免疫Balb/c小鼠,评价小鼠机体产生的体液免疫、细胞免疫和黏膜免疫应答,进一步采用PR8流感病毒和HAdV-3病毒攻击小鼠评价其免疫保护性。结果成功拯救出基于PR8流感病毒为载体嵌合HAdV六邻体蛋白抗原表位的rFLU/HAdV/Hexon疫苗候选株。rFLU/HAdV/Hexon疫苗株形态符合流感病毒典型特征,能够诱导小鼠机体产生高效价的针对PR8和HAdV-3的特异性抗体,肺鼻灌洗液可检测到高效价的sIgA抗体;攻毒实验结果显示,rFLU/HAdV/Hexon疫苗株免疫小鼠可明显减轻感染症状、有效降低肺鼻的病毒载量、显著改善肺组织的病理病变情况。结论研制的嵌合HAdV六邻体蛋白抗原表位的rFLU/HAdV/Hexon疫苗株是有发展前景的腺病毒候选疫苗株,为腺病毒疫苗的研究提供了新思路。     

双抗夹心化学发光免疫分析定量检测Ⅳ型胶原方法的建立

目的 建立基于双抗夹心微孔板化学发光酶免疫分析的人血清Ⅳ型胶原定量检测方法.方法 应用Ⅳ型胶原多抗进行包被,辣根过氧化物酶标记Ⅳ型胶原单抗,以鲁米诺化学发光体系检测,调整优化各种反应液的工作浓度和各类反应条件后建立双抗体夹心的检测方法;评价所建立方法的线性范围、特异性、灵敏度、稳定性等性能指标;应用肝纤维化患者血清与进口试剂进行比对实验.结果 所建立方法的灵敏度为15.5 ng/ml,线性范围25 ～ 850 ng/ml,批内、批间变异均小于8％.检测Ⅳ型胶原的临床高、中、低值血清回收率分别为98.5％、94.3％和102.6％;在4℃和37℃条件下分别进行了3、5、7d的稳定性考察,线性相关系数均＞0.99,标准偏差＜7％;比对实验分析显示与进口试剂相关性具有统计学意义.结论 成功建立了定量Ⅳ型胶原化学发光酶免疫分析方法,该方法有较好的准确性、灵敏度、重复性,与进口试剂检测结果等效.     

动态监测ICU肝病患者PCT水平在判断血流感染和指导抗生素使用中的临床价值

目的：研究动态监测降钙素原(PCT)水平在诊断ICU肝病患者早期血流感染及指导抗生素使用的临床价值。方法监测中国人民解放军第302医院2013年4月至2015年4月30例健康对照者体检当日和530例新转入重症监护病房(ICU)的肝病患者当日血清PCT浓度,对怀疑存在血流感染的肝病患者监测转入ICU后第1、2、3天清晨空腹血PCT浓度、WBC计数、血培养和细菌鉴定。结果有致病菌生长组266例,PCT均值8.0μg/L,阳性率94.3%(251/266);无致病菌生长组264例,PCT均值0.4μg/L,阳性率为35.6%(94/264);30例对照组血培养均阴性,PCT均<0.05μg/L,阳性率为0;真菌生长组40例,PCT均值2.8μg/L,阳性率为60.0%(24/40);革兰氏阳性菌生长组82例,PCT均值6.1μg/L,阳性率为85.4%(70/82);革兰氏阴性菌生长组144例,PCT均值15.1μg/L,阳性率为95.8%(138/144)。有致病菌生长组、无致病菌生长组的PCT浓度均较对照组高,差异均具有统计学意义(P<0.01);革兰氏阳性菌生长组、革兰氏阴性菌生长组、真菌生长组的PCT浓度比较差异具有显著统计学意义(P<0.01),而白细胞(WBC)比较差异无统计学意义(P>0.05);抗生素治疗有效组和治疗无效组在抗生素治疗后第2天和第3天PCT浓度比较差异有统计学意义(P<0.01);抗生素治疗有效组在血流感染后第3天的PCT浓度与峰值PCT浓度相比,下降幅度为87.8%,而抗生素治疗无效组在血流感染后第3天的PCT浓度与峰值PCT浓度相比下降不超过3%,两者比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论动态监测肝病ICU患者的PCT水平将有助于脓毒血症的早期干预和合理使用抗生素的用药指导,从而降低病死率。     

乙型肝炎病毒DNA检测对乙型肝炎患者筛查的临床意义

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)DNA检测对乙型肝炎患者筛查的临床意义。方法回顾性分析2017年1月至2021年12月在解放军总医院第五医学中心检测HBV DNA的682 331例乙型肝炎患者, 其中男性481 159例, 女性201 172例, 年龄(41.34±16.13)岁。根据HBV DNA结果分为HBV DNA阳性组(219 879例)和HBV DNA阴性组(462 452例), 收集其乙型肝炎5项及乙型肝炎表面抗原定量(HBsAg-QN)、肝功能、甲胎蛋白(AFP)和凝血酶原时间(PT)检测结果及基本临床资料, 统计分析HBV DNA阴性和阳性与HBV患者的各年龄段、临床诊断以及临床特征的关系。结果 682 331例HBV DNA检测乙型肝炎患者中, HBV DNA阳性率为32.22%(219 879/682 331)。各年龄段中以18～44岁青年人HBV DNA阳性率最高(40.34%, 128 038/317 380)。HBV DNA阳性组的<1、45～59和≥60岁患者比例低于HBV DNA阴性组, 而1～17和18～44岁患者比例高于HBV DNA阴性组(P均&...     

欧蒙印迹仪EURO Blot Master Ⅱ在HIV抗体确证实验中的应用研究

目的 探讨并验证EURO Blot Master Ⅱ(简称EBM Ⅱ)全自动免疫印迹仪与AUTOBLOT SYSTEM 20(简称AS20)蛋白印迹仪同时进行HIV初筛阳性标本确证实验结果的一致性与相关性,评估EBM Ⅱ全自动免疫印迹仪可以满足HIV抗体确证实验的要求,可以在中国各级疾病预防控制中心及通过认证的HIV确证实验室中使用.方法 采用MP公司AS20蛋白印迹仪作为参比仪器,欧蒙EBM Ⅱ全自动免疫印迹仪为实验仪器,两台仪器同时对71例HIV初筛阳性血清标本进行检测.计算其阳、阴性符合率,验证两种仪器对同一样本检测结果的一致性与相关性.结果 两台仪器的阳、阴性符合率均达到100％,阳、阴性预测值也都达到了100％.结论 EBMⅡ与AS20的检测结果具有很好的一致性及相关性,完全符合各级疾病预防控制中心及HIV确证实验室的用于HIV抗体确证实验检测的使用要求.     

罗氏Cobas 6000全自动电化学发光分析仪HBsAg携带污染率检测及评价

目的分析和评价罗氏Cobas 6000全自动电化学发光检测系统的携带污染率。方法以罗氏Cobas 6000测定乙肝表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)为例,设定携带污染的检测方案,并分析检测结果。结果 3个浓度阳性血清(Ha、Hb、Hc)、阴性血清(L)测试结果均值(8785,2878,275,0.449)、标准偏差和变异系数(coefficient of variation,CV)分别为Ha(136,1.55%),Hb(66,2.28%),Hc(9,3.32%),L(0.025,5.51%)。4个通道3个浓度HBsAg的携带污染率分别为:1模块-1通道(0.000708,0.001367,0.004247),1模块-2通道(0.000035,-0.00011,0.008525),2模块-1通道(-0.00053,0.001398,-0.00281),2模块-2通道(0.000045,0.003092,0.003786)。结论罗氏Cobas 6000全自动电化学发光免疫分析仪携带污染未检出,能确保临床检测的准确性。     

北京市街头无偿献血者人群结构分析

目的 探讨北京市街头无偿献血者人群结构,为本市采供血机构招募街头无偿献血者提供参考.方法 选择2013年1月至2015年12月,于中国人民解放军总医院街头采血车无偿献血的9 408例街头无偿献血者为研究对象.根据街头无偿献血者填写的《无偿献血登记表》中的性别、年龄、无偿献血时间资料,以及血液初筛结果中的血型结果,采用Excel软件分别对不同性别、年龄段、ABO血型,以及献血月份的无偿献血者人数进行统计.采用统计学方法比较2013-2015年北京市街头无偿献血者的性别、年龄及ABO血型构成比.结果 ①2013-2015年9 408例北京市街头无偿献血者中,男性献血者为6 327例(67.3％),女性为3 081例(32.7％),男、女性献血者比例为2.1∶1;2013-2015年无偿献血者性别构成比比较,差异无统计学意义(x2=2.30,P=0.316).②本组无偿献血者中,以年龄为18～40岁青、壮年无偿献血者为主,所占比例为77.3％(7 271/9 408),年龄为＞50～59岁的老年无偿献血者构成比呈逐年增加趋势.2013-2015年,各年龄段构成比比较,差异有统计学意义(x2=35.45,P＜0.001).③本组无偿献血者中,O型、B型、A型、AB型无偿献血者所占比例依次下降,分别为31.1％(2 928/9 408)、32.7％(3 073/9 408)、25.9(2 433/9 408)、10.3％(974/9 408).2013-2015年,各ABO血型构成比比较,差异无统计学意义(x2=6.73,P=0.347).④2013-2015年,每年3至5月为北京市街头无偿献血的高峰期,而每年1至2月为街头无偿献血的低谷期,6至9月街头无偿献血人数相对稳定.结论 北京市街头无偿献血者以青、壮年献血者为主,街头无偿献血呈“季节性”变化规律.建立适应无偿献血者人群结构特点的招募方法,在无偿献血高峰季积极组织各种献血活动,有利于推动街头采血工作健康发展.     

血清中甲胎蛋白异质体L3含量与肝癌分期及大小的相关性

目的 探讨原发性肝癌患者血清中的甲胎蛋白异质体L3（AFP-L3）水平与肝癌分期和癌灶大小的相关性.方法 随机选取162例原发性肝癌（PHC）患者的血清,分别进行总甲胎蛋白（AFP）和AFP-L3的纯化和检测,并计算AFP-L3的百分含量后与患者的癌灶大小和肝癌分期进行相关性分析.结果 PHC患者血清AFP-L3百分含量与癌灶大小呈正相关（r=0.332,P=0.009）,与肝癌分期不相关（r=0.121,P=0.189）.结论 AFP-L3的测定对于判断癌灶的大小具有一定的临床意义.     

老年患者梅毒螺旋体特异性抗体生物学假阳性结果分析

目的 分析我院老年患者梅毒螺旋体特异性抗体筛查情况,同时探讨其生物学假阳性的原因及临床意义.方法选取2016年1月至2016年12月我院8741例60岁以上老年患者,利用化学发光微粒子免疫检测法(CMIA)检测梅毒螺旋体特异性抗体,梅毒甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)检测梅毒螺旋体非特异性抗体,同时采用免疫印迹法(Western Blot)进行梅毒确证.根据老年患者年龄将其分为60～69岁、70～79岁和80岁以上三个年龄组进行统计学分析.结果8741例60岁以上老年患者中有354例患者梅毒螺旋体特异性抗体阳性,60～69岁、70～79岁和80岁以上三个年龄组的梅毒螺旋体特异性抗体阳性率分别为3.42%、6.30%和6.02%,差异具有统计学意义(x2=31.236,P<0.001);同时,60~69岁与70~79岁年龄组比较,差异具有统计学意义(x2=28.932,P<0.001).240例老年患者CMIA筛查梅毒抗体阳性标本经TRUST和Western Blot检测都为阴性,且无临床症状和体征、无相关病史,结果判为假阳性.老年患者梅毒抗体假阳性人群主要分布在60~69岁.但随着老年患者年龄的增加,梅毒螺旋体抗体假阳性率也呈上升趋势,60~69岁、70~79岁和80岁以上三个年龄组的梅毒抗体假阳性率分别64.81%、71.43%和87.50%.老年患者梅毒螺旋体抗体生物学假阳性伴有的其他临床症状及指标异常主要包括癌症(55.36%)、溶栓剂或抗凝剂治疗(35.71%)、糖尿病(28.57%)、肝硬化(25.00%)、严重感染(25.00%)、肾病(17.86%)、自身抗体阳性(16.07%)、手术(14.29%)、肝炎(12.50%)和代谢紊乱(8.93%),各类原因相互影响,梅毒抗体检测假阳性S/CO值最高可达10.29.而梅毒螺旋体特异性抗体真阳性老年患者伴有的其他临床症状及指标异常百分比情况明显低于生物学假阳性患者.结论 对于CMIA梅毒筛查阳性而TRUST检测阴性的老年患者,需进行Western Blot检测并结合临床症状、体征和病史,作出最后诊断.老年患者随着年龄的增高,梅毒抗体的假阳性率也呈上升趋势,需注意癌症、自身免疫病、严重感染、代谢紊乱等可能会导致老年患者梅毒抗体检测生物学假阳性的因素,有助于临床医生分析检测结果并向患者作出合理解释.     

两种献血目的人群的免疫四项结果对比分析

目的 回顾性分析我院互助献血与无偿献血的血液免疫四项(HBsAg、Anti-HCV、Anti-TP、Anti-HIV)情况,为进一步评价不同献血目的人群的血液传播疾病风险提供依据.方法 对我院2015年1月至11月所采集的29935例献血者的免疫四项检测结果进行回顾性分析,根据献血者种类将献血者分为无偿献血组与互助献血组,对两组献血者的免疫四项结果的阴阳性分别进行统计分析.结果 互助献血组14940例,免疫四项结果不合格628例,在同组人数中占比4.20％.其中,HBsAg、Anti-HCV、Anti-TP、Anti-HIV不合格率分别为2.23％、0.72％、1.14％、0.10％.无偿献血组14995例,免疫四项结果不合格154例,在同组人数中占比1.03％.其中,HBsAg、Anti-HCV、Anti-TP、Anti-HIV不合格率分别为0.23％、0.42％、0.35％、0.02％.互助献血组与无偿献血组的总不合格率、HBsAg不合格率以及Anti-TP不合格率差异均具有统计学意义.结论 互助献血来源的血液安全性远低于无偿献血来源的血液.