真核表达载体pLNCX/anti-CD20scFv/IgGFc/CD80/CD28/ζ的构建及其在NIH 3T3细胞株中的表达

目的: 构建pLNCX/anti-CD20scFv/IgGFc/CD80/CD28/ζ的重组真核表达载体，并在NIH 3T3细胞株中表达。方法: 采用DNA重组技术把pBULLET上的CD28-ζcDNA插入到已含anti-CD20 scFv/IgGFc/CD80的真核表达载体pLNCX质粒上，转染NIH 3T3细胞株，经G418筛选细胞，用RT-PCR、流式细胞术检测目的基因表达情况。结果: 经菌落PCR、酶切及一次测序鉴定均证实pLNCX/anti-CD20scFv/IgGFc/CD80/CD28/ζ的成功构建；经RT-PCR法，能够从转染的NIH 3T3细胞中扩增出1条与目的基因大小一致的DNA片段，流式细胞术检测显示该目的基因能够在NIH 3T3细胞中表达目的蛋白。结论: 重组表达载体pLNCX/anti-CD20scFv/IgGFc/CD80/CD28/ζ的构建，并在NIH 3T3细胞株中的成功表达，为该重组质粒转染原代T淋巴细胞从而制备CD20靶向性嵌合锚定T细胞奠定了基础。     

抗CD20scFv/CD80/CD28/ζ重组基因修饰T细胞的构建与靶向杀伤效果

目的构建表达抗CD20scFv／CD80／CD28／ζ重组基因修饰T细胞，体外观察其特异性清除CD20^＋淋巴瘤细胞的能力，为肿瘤的过继免疫治疗提供新思路。方法采用DNA重组技术将pBULLET上的CD28-ζcDNA插入到已含有抗CD20scFv／CD80的真核表达载体pLNCX质粒上，转染PA317包装细胞，挑取高滴度的包装细胞收获病毒，用收获的病毒感染刺激分裂的人外周血T淋巴细胞，经G418筛选1周后与CD20^＋淋巴瘤细胞株Daudi、Raji在体外共同培养，用非放射性的细胞杀伤试剂盒和ELISA检测试剂盒分别检测T细胞的抗原特异性杀伤和细胞因子分泌的功能。结果酶切及测序鉴定均证实pLNCX／抗CD20seFv／CD80／CD28／ζ构建成功，重组基因修饰的T细胞能在体外杀伤CD20^＋淋巴瘤细胞株Daudi、Raji，而对CD20^＋细胞株K562无杀伤作用，同时CD20^＋靶细胞组上清液中IL-2和IFN-γ水平与CD20^-组相比明显升高。结论重组基因修饰的CD20靶向性T细胞构建成功。该T细胞在体外能特异性杀伤CD20^＋淋巴瘤细胞株。     

用重组牛痘预防和排斥肿瘤

肿瘤特异性抗原(TSA)或其抗独特型抗体已被用于控制动物模型中肿瘤的生长,但有效的免疫应答需要抗原和宿主组织相容性决定簇的同时提呈。作者用表达多瘤病毒(PY)蛋白的牛痘重组株接种动物模型来了解在宿主细胞中表达TSA的活的牛痘重组病毒能否更好地激发肿瘤免疫。 PY在啮齿动物中具有肿瘤原性,用灭活的PY转化细胞能诱导肿瘤免疫,故认为这些转化细胞含TSA。被转化细胞早期含三种表达蛋白:大T(LT)、中T(MT)和小T(ST),但它们作为TSA的作用还不知道。因此,作者把这三种T蛋白基因分离出来,分别在     

活菌ELISA夹心法的建立

<正> ELISA以其敏感和特异性而已被广泛应用于各种诊断,但用于细菌菌体抗原的检测报道不多,同时不能获得活菌作进一步的确诊。本文研究的目的是把ELISA的敏感性和细菌培养的高度特异性结合起来,试图建立一种既能用ELISA快速检测预报,又能在ELISA检测后原位培养获得活菌的方法,称谓活菌ELISA夹心法。实验研究结果证明,本法不单具有一般ELISA夹心法的敏感和特异性,检测结果报告后,还可以从中分离培养出活菌确诊。