快速诱导大鼠骨髓间充质干细胞成脂分化的培养体系

背景：目前常用的成脂刺激剂主要由胰岛素、地塞米松、IBMX和吲哚美辛组成,该体系涉及处理因素多、诱导周期长且对细胞毒性大,不利于脂肪形成抑制效应的研究。 目的：建立快速诱导大鼠骨髓间充质干细胞成脂分化的培养体系。 方法：大鼠全骨髓细胞原代培养,胰酶消化传代,富集形态均质的间充质干细胞,利用过氧化物酶体增殖物活化受体γ激动剂噻唑烷二酮类药物罗格列酮和吡咯列酮体外单独诱导大鼠骨髓间充质干细胞成脂分化,设立无糖、低糖和高糖DMEM三种基础培养体系,以经典的成脂刺激剂作为阳性对照,在诱导的不同时间点对分化细胞进行形态学观察和油红O染色。 结果与结论：与经典成脂刺激剂相比,罗格列酮或吡咯列酮单独均能诱导大鼠骨髓间充质干细胞向脂肪细胞分化,吡咯列酮诱导48 h和罗格列酮诱导72 h均可观察到富含脂滴或脂泡以及油红O染色的阳性细胞,吡咯列酮与罗格列酮的最佳诱导浓度分别为0.125 mmol/L和10 μmol/L,而高糖环境利于大鼠骨髓间充质干细胞成脂分化。说明基于高糖培养环境的以吡咯列酮或罗格列酮做为成脂刺激剂的培养体系可快速诱导大鼠骨髓间充质干细胞向脂肪细胞分化。     

ATF4在顺铂致肝癌细胞HepG2凋亡中的作用

目的 探讨ATF4在顺铂诱导的肝癌细胞HepG2凋亡中的变化,并对其作用进行初步研究.方法 人肝癌细胞HepG2经不同浓度顺铂处理24和48 h后,MTS法检测细胞活力;Western blot 检测内质网应激反应及凋亡相关蛋白(Bip、 ATF4、PARP、activated-Caspase3、CHOP)表达的变化;使用siRNA干扰技术沉默ATF4 的表达,并观察沉默ATF4蛋白表达后,肝癌细胞对顺铂敏感性的变化;利用Annexin V-FITC 和PI双标法,在倒置荧光显微镜中检测细胞凋亡情况.平板克隆形成实验用于判断单个细胞克隆生长速度.结果 与溶剂对照组相比,顺铂明显抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡;时间和浓度依赖性地引起内质网应激反应相关蛋白CHOP、ATF4表达水平上调,但不影响Bip的蛋白表达;同时导致activated-Caspase3的活化,引起PARP蛋白的切割. 使用siRNA沉默ATF4的蛋白表达后,能部分逆转顺铂引起的细胞凋亡以及克隆形成抑制.结论 顺铂可以通过上调ATF4的表达,触发内质网反应,从而诱导肝癌细胞凋亡.     

漆树酸对人前列腺癌细胞 LNCaP 细胞周期的影响及机制

目的：观察漆树酸对人前列腺癌细胞 LNCaP 细胞周期的影响并分析其机制。方法人前列腺癌细胞 LNCaP 经漆树酸处理后,MTS 法观察不同时间、不同浓度的漆树酸对细胞增殖率的影响,流式细胞术分析细胞周期变化,Western blot 方法观察漆树酸作用后细胞周期相关因子 CDK4、CDK6、cyclin D1和 P27蛋白水平的表达变化。结果（1）漆树酸时间和浓度依赖性地抑制细胞增殖;（2）经漆树酸处理后的细胞出现生长抑制,细胞主要阻滞在 G0／G1期;（3）漆树酸作用细胞后,CDK4、CDK6、cyclin D1蛋白表达水平低于溶剂对照组,而 P27蛋白表达水平高于溶剂对照组。结论漆树酸可抑制 LNCaP 细胞增殖,其机制可能是与细胞周期相关蛋白 P27的上调, CDK4、CDK6、cyclin D1表达下调有关,导致细胞阻滞在 G0／G1期。     

快速诱导大鼠骨髓间充质干细胞成脂分化的培养体系

背景：目前常用的成脂刺激剂主要由胰岛素、地塞米松、IBMX 和吲哚美辛组成,该体系涉及处理因素多、诱导周期长且对细胞毒性大,不利于脂肪形成抑制效应的研究.目的：建立快速诱导大鼠骨髓间充质干细胞成脂分化的培养体系.方法：大鼠全骨髓细胞原代培养,胰酶消化传代,富集形态均质的间充质干细胞,利用过氧化物酶体增殖物活化受体γ激动剂噻唑烷二酮类药物罗格列酮和吡咯列酮体外单独诱导大鼠骨髓间充质干细胞成脂分化,设立无糖、低糖和高糖 DMEM 三种基础培养体系,以经典的成脂刺激剂作为阳性对照,在诱导的不同时间点对分化细胞进行形态学观察和油红O染色.结果与结论：与经典成脂刺激剂相比,罗格列酮或吡咯列酮单独均能诱导大鼠骨髓间充质干细胞向脂肪细胞分化,吡咯列酮诱导48 h和罗格列酮诱导72 h均可观察到富含脂滴或脂泡以及油红O染色的阳性细胞,吡咯列酮与罗格列酮的最佳诱导浓度分别为0.125 mmol/L和10μmol/L,而高糖环境利于大鼠骨髓间充质干细胞成脂分化.说明基于高糖培养环境的以吡咯列酮或罗格列酮做为成脂刺激剂的培养体系可快速诱导大鼠骨髓间充质干细胞向脂肪细胞分化.