川芎嗪诱导肺癌细胞凋亡及其机制研究

目的探究川芎嗪对肺癌A549细胞凋亡的影响及其机制。方法体外培养肺癌A549细胞,将细胞分为空白对照组(NC组)以及用不同浓度(200μg/ml、400μg/ml、800μg/ml)的川芎嗪处理人肺癌A549细胞实验组,用吖啶橙/嗅化乙锭(AO/EB)双荧光染色观察细胞凋亡形态;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot检测A549细胞凋亡相关蛋白表达情况;实时荧光定量PCR(real-time PCR)和Western Blot检测Fox M1的表达水平。转染过表达Fox M1质粒,用800μg/ml川芎嗪干预,分别用AO/EB双荧光染色和流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果相对于NC组,AO/EB双荧光染色结果显示不同浓度的川芎嗪干预后,可见橘红色荧光的凋亡细胞,并且随着川芎嗪的浓度增加而增加,呈浓度依赖性。流式细胞仪检测结果显示川芎嗪干预的A549细胞凋亡数显著增加。WB结果显示不同浓度的川芎嗪干预后,Bcl-2蛋白的表达水平下调,Bax蛋白的表达水平上调,呈浓度依赖。qPCR结果显示Fox M1 mRNA显著下降,WB结果同样显示Fox M1蛋白表达水平降低,并随着川芎嗪的干预浓度增加而下降,具有浓度依赖性。过表达Fox M1蛋白后,相对于阴性对照组,AO/EB双荧光染色结果显示肺癌A549细胞橘红色荧光减少,流式细胞仪检测结果显示,细胞凋亡率降低。结论川芎嗪能有效地诱导肺癌A549细胞凋亡,其作用机制可能与下调Fox M1蛋白表达有关。     

C2株蓝氏贾第鞭毛虫ILP基因的克隆表达及蛋白结构分析北大核心CSCD

目的利用大肠杆菌对C2株蓝氏贾第鞭毛虫ILP蛋白(Impact-like protein)进行克隆表达,运用生物信息学软件进行蛋白结构分析。方法提取C2株蓝氏贾第鞭毛虫基因组DNA,PCR扩增ILP基因,构建pGM-T重组载体,挑选阳性克隆并进行序列分析;将ILP基因连入原核表达载体pET-28a(+),并转化大肠杆菌Rosetta(DE3),IPTG诱导表达。运用PSIPRED和SWISS-MODEL进行蛋白结构分析。结果成功构建了原核表达载体pET-28a(+)-ILP,该基因全长831bp。SDS-PAGE结果显示,目的蛋白条带出现在相对分子量约33kD的位置,与预期相符。Western blot结果表明,大肠杆菌成功表达了重组蛋白。结论成功克隆、表达并分析C2株蓝氏贾第鞭毛虫ILP蛋白,为蓝氏贾第鞭毛虫ILP蛋白结构与功能的研究提供了有价值的资料。     

C2株蓝氏贾第鞭毛虫组蛋白H3基因的克隆表达与基因分析

目的 克隆表达C2株蓝氏贾第鞭毛虫H3组蛋白基因,与WB株蓝氏贾第鞭毛虫进行同源分析,构建C2株蓝氏贾第鞭毛虫H3组蛋白分子进化树。方法 PCR扩增获取H3组蛋白基因,构建pGM-T-H3重组载体,转化E. coli TOP10感受态宿主细胞,挑选阳性克隆并进行序列分析,利用限制性内切酶NcoⅠ和 XhoⅠ构建pET28a(+)-H3重组载体,转化E. coli Rosetta( DE3),IPTG诱导组蛋白H3表达,Western blotting鉴定表达,与美国WB株蓝氏贾第鞭毛虫及模式生物H3组蛋白基因和蛋白序列进行同源分析。结果 成功克隆表达C2株蓝氏贾第鞭毛虫H3组蛋白基因,同源比对结果显示C2株蓝氏贾第鞭毛虫基因序列与美国WB株完全一致,但与其他现存真核生物亲缘关系较为疏远。结论 C2株蓝氏贾第鞭毛虫H3组蛋白分子进化树分析表明贾第虫H3组蛋白基因在进化过程中与其他物种分化较早,本研究结果为进一步研究蓝氏贾第鞭毛虫的生物进化地位提供有价值的实验资料。     

益气蠲饮方辅助胸腔热灌注化疗治疗肺癌胸腔积液疗效观察

目的:观察益气蠲饮方辅助胸腔热灌注化疗治疗肺癌胸腔积液的临床效果。方法:选取2016年2月～2018年2月我院收治的肺癌胸腔积液患者120例,采用随机投掷法分为观察组(n=60)与对照组(n=60),对照组予以顺铂胸腔热灌注化疗,观察组在此基础上配合益气蠲饮方辅助治疗,均以3周为1个疗程,观察两组患者临床疗效,治疗前后中医证候积分、卡氏(KPS)评分、血清T淋巴细胞亚群水平变化及治疗过程中不良反应发生情况。结果:两组患者临床有效率分别为75.00%、55.00%,观察组显著高于对照组(P0.05);治疗后两组患者中医证候积分较治疗前均明显降低(P0.05),且观察组显著低于对照组(P0.05);两组患者治疗后KPS评分均显著升高(P0.05),且观察组明显高于对照组(P0.05);两组患者治疗前T淋巴细胞亚群水平无统计学差异(P0.05),治疗后观察组CD_3~+、CD_4~+、CD_4~+/CD_8~+均高于对照组(P0.05),CD_8~+水平低于对照组(P0.05);观察组消化道反应及骨髓抑制等不良反应发生率显著低于对照组(P0.05)。结论:肺癌胸腔积液患者采用益气蠲饮方辅助胸腔热灌注化疗治疗,可明显提高临床疗效,减少胸膜水液分泌渗出,缓解呼吸困难等临床症状,提高患者整体生存质量,改善机体免疫状态,降低化疗不良反应发生风险。     

双氢青蒿素对C2株蓝氏贾第鞭毛虫Delta giardin抑制作用的研究

目的 建立实时荧光定量RT-PCR( real- time quantitative, RT- PCR)检测C2株蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia)Delta giardin基因mRNA表达量的方法,分析双氢青蒿素(Dihydroartemisinin, DHA)对体外C2株蓝氏贾第鞭毛虫Delta giardin基因mRNA表达水平的影响。方法 分别采用100 μg/mL、200 μg/mL的双氢青蒿素改良型TYI-S-33培养基培养C2株蓝氏贾第鞭毛虫,以不含药物组作为阴性对照,分别培养2 h、4 h、8 h、12 h,提取总RNA,逆转录合成cDNA,实时荧光定量PCR检测Delta giardin基因mRNA表达情况。结果 100 μg/mL双氢青蒿素培养2 h、4 h、8 h、12 h后,Delta giardin基因mRNA相对表达量分别为0.44、0.26、0.25、0.02;200 μg/mL双氢青蒿素培养2 h、4 h、8 h、12 h后,Delta giardin基因mRNA相对表达量分别为0.30,0.26,0.11,0.02。药物对照组中C2株蓝氏贾第鞭毛虫Delta giardin基因mRNA表达量明显低于阴性对照组。结论 双氢青蒿素对C2株蓝氏贾第鞭毛虫Delta giardin基因mRNA的表达具有明显的抑制作用,提示双氢青蒿素对蓝氏贾第鞭毛虫具有明显的防治效果。     

双氢青蒿素对C2株蓝氏贾第鞭毛虫Alpha-7.3 giardin基因mRNA表达水平的影响

目的 观察双氢青蒿素 (dihydroartemisinin,DHA) 对C2株蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia)Alpha -7.3 giardin (α-贾第素)基因mRNA表达水平的影响,探讨其对蓝氏贾第鞭毛虫骨架蛋白的损伤作用。方法 用双氢青蒿素浓度为100 μg/mL、200 μg/mL的改良TYI-S-33培养基分别培养C2株蓝氏贾第鞭毛虫2 h、4 h、8 h、12 h后,以不含药物组为对照,实时荧光定量RT-PCR检测药物作用后Alpha -7.3 giardin基因mRNA表达水平的变化。结果 双氢青蒿素作用虫体后Alpha -7.3 giardin基因mRNA表达水平明显低于对照组,二者有显著性差异。结论 双氢青蒿素对C2株蓝氏贾第鞭毛虫Alpha -7.3 giardin基因mRNA的表达具有明显的抑制作用,抑制效果与药物浓度和作用时间相关,提示双氢青蒿素对蓝氏贾第鞭毛虫骨架蛋白具有损伤作用。     

比较基因组学在蓝氏贾第鞭毛虫进化研究中的应用新进展

蓝氏贾第鞭毛虫(简称贾第虫)作为一种古老的真核生物,在生物进化过程中的地位举足轻重。比较基因组学能够在基因组水平上深入认识贾第虫的进化关系,进一步明确贾第虫在生物进化中的地位。本文对比较基因组学的主要研究方法进行综述,同时介绍比较基因组学在贾第虫生物进化研究中的应用,对贾第虫比较基因组学的发展进行展望。     

C2株蓝氏贾第鞭毛虫ILP基因的克隆表达及蛋白结构分析

目的 利用大肠杆菌对C2株蓝氏贾第鞭毛虫ILP蛋白(Impact-like protein)进行克隆表达,运用生物信息学软件进行蛋白结构分析。方法 提取C2株蓝氏贾第鞭毛虫基因组DNA,PCR扩增ILP基因,构建pGM-T重组载体,挑选阳性克隆并进行序列分析;将ILP基因连入原核表达载体pET-28a(+),并转化大肠杆菌Rosetta(DE3),IPTG诱导表达。运用PSIPRED和SWISS-MODEL进行蛋白结构分析。结果 成功构建了原核表达载体pET-28a(+)-ILP,该基因全长831 bp。SDS-PAGE结果显示,目的蛋白条带出现在相对分子量约33 kD的位置,与预期相符。Western blot结果表明,大肠杆菌成功表达了重组蛋白。结论 成功克隆、表达并分析C2株蓝氏贾第鞭毛虫ILP蛋白,为蓝氏贾第鞭毛虫ILP蛋白结构与功能的研究提供了有价值的资料。