用DAPI和Hoechst33342染色法检测DNA的流式细胞方法探讨

目的：探索利用DAPI和Hoechst33342两种荧光染料检测DNA的流式细胞技术。方法：分别用DAPI、Hochest和PI 3种荧光染料标记HT-29细胞,通过流式细胞仪检测其G0/G1期、S期和G2/M期的DNA含量,比较3种方法测定结果。用标准荧光微球和DNA 质量控制试剂盒做测试质控。结果：质控实验显示,紫外激光的变异系数（CV）为2.4;DAPI和Hoechst33342标记的小鸡红细胞核(chicken erythrocyte nuclei,CEN)出现4个峰,第2、第3和第4峰所在道数的平均值与第1峰的比值为2、3、4,且第1峰的CV均为2.4。DAPI、Hoechst33342标记小牛胸腺细胞核（calf thymocyte nuclei ,CTN）出现2个峰,G2/G1为1.97,且G0/G1峰的CV为2.4。DAPI、Hoechst33342和PI 3种染料标记的HT-29细胞呈现完整的细胞周期峰,结果分别为CV值 3.40、3.02和4.42,G0/G1期含量为60.86%、60.22%和60.81%,S期含量为28.85%、29.70%和29.82%,G2/M期含量为10.29%、9.09%和9.37%,3种标记法测定结果一致。 结论：本文探索的DAPI和Hoechst33342标记法简单易行,可作为具备紫外激光器的流式细胞仪的首选DNA荧光染料。     

FACSAria流式细胞仪无菌操作分选高纯度细胞亚群

BGC823细胞瞬时转染绿色荧光蛋白(GFP)质粒2d后,用FACSAria流式细胞仪分选GFP阳性和阴性BGC823细胞亚群,检测其分选纯度并培养分选后细胞,观察其无菌生长状态;商品化FITC直标抗体孵育SMMC7721细胞后,FACSAria流式细胞仪分选FITC阳性和阴性细胞亚群.将所有分选的细胞进行培养检测无菌状态,并观察细胞生长情况.FACSAria流式细胞仪分选得到的GFP阳性细胞群的分选纯度达99.6％,GFP阴性细胞群的分选纯度达98.8％,同时激光共聚焦荧光显微镜显示分选后的GFP阳性细胞明显富集;分选后的BGC823细胞和SMMC7721细胞常规培养,细胞均无污染且生长状态良好.     

自体调节性T细胞可抑制恶性淋巴瘤细胞的增殖

本研究探讨自体调节性T细胞对T细胞淋巴瘤细胞系EIA的作用及其机制。应用免疫磁珠分离法（MACS）分选获得C57BL／6小鼠CD4＋CD25＋T细胞（Treg细胞）,流式细胞术检测细胞纯度及Foxp3表达情况,MTY比色法检测分选的Treg细胞对T细胞淋巴瘤细胞系EL4的体外抑制作用,应用ELISA方法检测TGF—B1和IL-10的含量。结果表明：MACS分选获得CIM＋CD25＋T细胞纯度达91．6％,活细胞比例〉95％,Foxp3表达率为78．9％。MTT比色法证实自体Treg细胞在体外能够明显抑制EIA细胞的增殖（P〈0．05）,且呈细胞因子非依赖性。作者首次证明,自体Treg细胞体外有明显抑制T细胞淋巴瘤细胞系EIA增殖的作用。