TrKA-siRNA抑制乳腺癌细胞系MCF-7 NF-κB的表达并促细胞凋亡

目的 探讨TrKA基因表达的变化对NF-κBp65核蛋白的表达和细胞凋亡的影响。方法 构建TrKA特异小干扰RNA（siRNA）表达载体,重组体经测序鉴定正确后转染乳腺癌MCF-7细胞。G418(geneticin)筛选稳定表达TrKA siRNA干扰细胞株,命名为TrKA-siRNA。荧光实时定量RT-PCR,Western blot和免疫组化法检测TrKA基因的表达,Western blot检测NF-κBp65核蛋白的表达,流式细胞术检测细胞凋亡。结果 成功构建 TrKA-siRNA 表达载体,TrKA mRNA和蛋白水平分别下调74.7%和80.5%（P<0.05）。阳性对照 GAPDH 基因表达水平下降85.0%（p<0.05）;NGF作用2 h后,MCF-7组细胞NF-κBp65核蛋白表达明显增加,而TrKA-siRNA组细胞NF-κBp65核蛋白改变不显著。与MCF-7组相比,TrKA- siRNA组细胞凋亡明显增加（p<0.05）,NGF对其凋亡无促进作用。结论 有效阻断TrKA基因的表达能抑制NF-κB抗凋亡途径的活化,从而增加了乳腺癌MCF-7细胞的凋亡。此作用可能不依赖于外源性的NGF。     

CXCR4抑制性多肽对不同乳腺癌细胞株中CXCR4表达的影响

目的:探讨CXCR4抑制性多肽(NT21MP)对HER-2受体表达不同的乳腺癌MCF-7细胞和SKBR3细胞CXCR4受体表达的影响。方法:免疫组化法和RT-PCR法检测MCF-7、SKBR3细胞中HER-2与CXCR4的表达;分别用1μg/ml和10μg/mlNT21MP处理乳腺癌SKBR3、MCF-7细胞48h后,用RT-PCR法和Western blot法检测CXCR4 mRNA及其蛋白的表达。结果:CXCR4在乳腺癌细胞SKBR3和MCF-7表达水平相似(P>0.05),HER-2表达水平差异有统计学意义(P<0.01);NT21MP显著下调人乳腺癌细胞SKBR3、MCF-7细胞中CXCR4受体的表达,但存在细胞差异性(P<0.01)。结论:NT21MP能不同程度地下调乳腺癌细胞MCF-7和SKBR3 CXCR4受体表达。     

2013-2014年临床分离常见革兰阴性杆菌及耐药性分析

目的：了解山东省中医院2013年至2014年分离革兰阴性杆菌的分布及其耐药性分析,以指导临床对抗菌药物的合理使用。方法：临床标本采用常规分离培养,阳性菌株用VITEK-2进行鉴定及药敏,收集革兰阴性菌株并用WHONET5.6软件进行数据分析。结果：共分离得到6737株革兰阴性杆菌,其中铜绿假单胞菌2160株（32.06%）;大肠埃希菌1013株（15.03%）;粘质沙雷菌947株（14.06%）;鲍曼不动杆菌760株（11.28%）;肺炎克雷伯菌619株（9.19%）。铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌对多数抗生素均有不同程度的耐药性,对亚胺培南的耐药率分别为46%和70%,多数菌株只对阿米卡星具有敏感性;粘质沙雷菌对β-内酰胺类耐药、对三四代头孢菌素类也有不同程度的耐药性,对亚胺培南的耐药率也达到了11%;大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对抗菌药物特别是碳青霉烯类药物的敏感性总体良好,只有个别菌株对亚胺培南耐药。结论：碳青霉烯类耐药的鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌检出率较高,粘质沙雷菌对常用抗菌药物的敏感性有下降趋势,临床在选择用药时应考虑这些因素,更合理的使用抗菌药物。     

粘质沙雷菌在我院ICU的感染现状及耐药性变迁

目的：了解近三年来粘质沙雷菌在我院重症监护病房（Icu）的感染状况及耐药率。方法：将2013—2015年送检合格标本中分离的感染菌分别进行汇总,对粘质沙雷的感染状况及耐药率（剔除同一患者相同结果）进行统计。结果：在ICU病房,连续三年粘质沙雷菌的检出量超过鲍曼不动杆菌,而成为仅次于铜绿假单胞的第二位感染菌。氨苄西林、氨苄西林／舒巴坦、氨曲南、头孢曲松、环丙沙星耐药率持续〉70％;阿米卡星、头孢他啶、头孢替坦、哌拉西林／他唑巴坦、复方新诺明、亚胺培南、美罗培南耐药率均低于30％;头孢替坦、头孢吡肟、亚胺培南、左氧氟沙星在2015年的耐药率较2013年、2014年有不同程度的升高。阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素则呈下降趋势。结论：作为肠杆菌科细菌的粘质沙雷菌,在ICU不仅感染率高,而且耐药率也较高,尤其对于治疗产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）及AmpC酶等多重耐药菌株最有效药物之一的亚胺培南,其耐药率呈不同程度增长,应引起高度重视。     

神经营养素及其受体与肿瘤的相关性和作用的研究进展

神经营养素（neurotrophins，NTs）是一组结构具有同源性，功能相似的基因家族。主要包括神经生长因子（nerve growth factor，NGF）、脑源性神经营养因子（brain derived growth factor，BDNF）、神经营养因子-3、（neurotrophin-3，NT-3）、神经营养因子-4／5（NT-4／5）、神经营养因子-6（NT-6）、神经营养因子-7（NT-7）。所有的NTs结构相似，其相互之间的氨基酸序列具有高度同源性。NTs通过与两种类型的细胞表面受体结合而发挥作用，这两种受体包括高亲和力受体和低亲和力受体。     

TrKA特异小干扰RNA表达载体构建及对乳腺癌细胞增殖的影响

背景与目的:构建TrKA特异小干扰RNA(siRNA)表达载体,并观察其对神经生长因子(NGF)促细胞增殖作用和对细胞周期的影响.材料与方法:通过Genbank提供的TrKA基因mRNA全序列,应用设计软件选择设计能转录短发夹状RNA(short hairpin RNAs,shRNA)的DNA序列,并与PsilencerTM 4.1-CMV reo质粒载体连接,经DNA测序鉴定重组体DNA序列正确后转染乳腺癌MCF-7细胞.利用G418筛选稳定表达TrKA-siRNA的MCF-7细胞株,通过Real-time PCR、Western blot和免疫组化在mRNA和蛋白水平检测TrKA的表达水平.MTT法检测TrKA干扰后NGF对细胞增殖作用的影响.流式细胞术观察细胞周期的变化.结果:序列测定表明成功构建TrKA-siRNA表达载体,Real-time PER显示TrKA mRNA下调74.7%(P＜0.05),Western blot显示蛋白表达下降80.5%,免疫组化结果也显示TrKA蛋白表达下降.试剂盒提供阳性对照GAPDH基因其表达水平下降85.0%(P＜0.05).MTT检测显示,NGF组细胞增殖反应均较NGF+siRNA组、siRNA组和对照组明显升高(P＜0.05),NGF+siRNA组的细胞增殖反应较其余各组下降(P＜0.05),表明TrKA干扰能有效抑制NGF诱导的乳腺癌细胞MCF-7的增殖.流式细胞术检测细胞周期结果显示:与对照组相比,NGF+siRNA组和siRNA组细胞G0/G1期增加,S期减少(P＜0.05),细胞周期阻滞于Go/G,期.结论:TrKA特异siRNA表达载体有效下调TrKA基因的表达,并抑制NGF引起的细胞增殖效应.     

葡萄籽提取物对乳腺癌细胞增殖和 Survivin基因表达的影响

目的:观察葡萄籽提取物(GSE)对乳腺癌MCF-7细胞增殖抑制及对Survivin基因表达的影响,探讨GSE抑制肿瘤的分子生物学机制.方法:GSE剂量分别为40,80,120,160,200 mg·L~(-1),在不同时间段,MTT法检测GSE对乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制作用,计算IC_(50),流式细胞术检测细胞周期变化.RT-PCR方法检测肿瘤细胞中Survivin mRNA表达水平.荧光素酶试剂盒观察GSE作用于含Surivin核心启动子的pGL3荧光报告载体后Survivin核心启动子的活性变化,并利用生物信息学软件分析Survivin核心启动子序列上的转录因子结合位点.结果:GSE能有效抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖,具有剂量和时间依赖性(p＜0.05);GsE使细胞周期停滞于S期;GSE能有效抑制Survivin mRNA的表达(P＜0.01);GSE明显降低Survivin基因核心启动子活性(P＜0.01).结论:GSE使细胞周期停滞于S期,从而抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖,其作用机制之一可能是通过调控与Survivin核心启动子活性相关的转录因子的活性,进而降低Survivin基因的表达水平而实现的.     

葡萄籽提取物抑制小鼠移植性乳腺癌生长的实验研究

目的:观察葡萄籽提取物(GSE)对小鼠移植性乳腺癌的抑瘤作用.方法:MTT法检测GSE在体外对小鼠乳腺癌细胞株的生长抑制作用;皮下注射法建立小鼠荷瘤动物模型,灌胃给药,分组为空白对照组、模型组及GSE 50、100 mg/kg组,灌胃给药5次/周,共4周;肿瘤病理切片做HE染色,并做免疫组化检测增殖细胞核抗原的表达情况,TUNEL试剂盒检测肿瘤组织凋亡情况.结果:(1)GSE在体外能抑制小鼠肿瘤细胞的增殖,作用有剂量依赖性(P＜0.05).(2)与模型组相比,50 mg/ kg和100 mg/kg GSE组小鼠的肿瘤抑制率分别为34.78%和68.12%.(3)GSE对模型小鼠肝功能指标有一定改善作用.(4)免疫组化显示,GSE降低肿瘤组织中增殖核抗原PCNA的表达,同时TUNAL法检测肿瘤组织中凋亡细胞发现,GSE诱导肿瘤组织细胞发生凋亡.结论:葡萄籽提取物通过抑制肿瘤增殖和促进肿瘤组织的细胞凋亡而抑制小鼠乳腺癌细胞及荷瘤小鼠肿瘤的生长,且对荷瘤小鼠肝功能有一定的保护作用.     

葡萄籽提取物通过抑制Survivin的表达而抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖

目的观察GSE对乳腺癌细胞增殖的影响及其作用的分子信号途径,为寻找新的乳腺癌临床治疗药物奠定一定的理论基础。方法倒置显微镜观察不同浓度GSE作用后MCF-7细胞生长的形态学变化;PI单染后流式细胞仪检测MCF-7细胞的周期改变;半定量RT-PCR观察Survivin mRNA的表达;Western blot检测Survivin和Caspase-3的蛋白表达变化;荧光素酶试剂盒检测Survivin核心启动子的活性;半定量RT-PCR观察与Survivin核心启动子活性相关的转录因子Sp1、E2F-1和HIF-1α的表达变化。结果经GSE作用24h后,MCF-7细胞形态发生改变,细胞变圆、脱壁,并聚集成团;细胞生长周期发生改变,细胞阻滞于S期,G2/M期细胞明显减少;Survivin mRNA表达降低,Survivin蛋白表达减少;Caspase-3蛋白有活性片段产生;Survivin核心启动子活性明显降低,与其活性相关的转录因子Sp1、HIF-1α mRNA表达降低,E2F-1 mRNA表达升高。结论GSE通过调节Survivin核心启动子活性相关转录因子的表达而抑制Sur-vivin核心启动子的活性,下调Survivin基因的表达同时激活Caspase-3蛋白的活性,抑制了乳腺癌MCF-7细胞的生长,同时可能还诱导了肿瘤细胞的凋亡。