近年新细胞因子的克隆及其技术路线

本文简要介绍了近二年来所克隆的几种新的细胞因子，如ＩＬ－１５，ＴＰＯ，ＭＣＰ－３等。新因子的发现不仅有助于人们对免疫调节，细胞因子网络的深入和全面了解，而且具有巨大的潜在临床应用价值，成为征服疾病的有力武器。本文还试图从新因子克隆过程出发，总结概括新因子克隆的技术路线，以期对我们以后的工作有所帮助。     

微藻异养产生二十碳五烯酸的新进展

二十碳五烯酸(Eicosapentaenoic acid简写EPA)是一种长链多不饱和脂肪酸，在营养强化、防治心血管疾病、减轻炎症等方面起着十分重要的作用。目前EPA主要来源于鱼油，很难满足市场对EPA日益增长的需求，必须寻求替代生产EPA的资源。一些微藻可在不需要光的条件下以廉价的有机物为原料异养生长，在异养条件下，可以很好地控制培养模式，有可能大规模地生产EPA。工业上用微藻生产EPA研究包括：筛选高EPA产量的微藻株，通过基因工程改善藻株，优化培养条件以及建立有效的培养体系。本文综述了近几年微藻在异养条件下生产EPA的最新进展，着重阐明硅藻是一种能在异养条件下生长且具有高EPA产率的模式藻株。     

杜氏盐藻基因组文库的构建

目的　构建杜氏盐藻基因组文库,旨在进一步分离和研究杜氏盐藻基因的结构和功能。方法　采用改进的SDS裂解法提取杜氏盐藻基因组DNA ,通过限制性内切酶Sau3AI进行部分酶切,用T4DNA连接酶将目的片段与噬菌体EMBL3载体臂进行连接后转染大肠杆菌LE3 92。结果　体外包装构建了杜氏盐藻基因组文库,得到重组子数为2 .2×10 4,经测定文库滴度为2 .2×10 5pfu/mL。结论　构建了杜氏盐藻基因组文库,为进一步筛选盐藻重要基因及其序列分析奠定基础。     

ST段抬高急性心肌梗死患者血清氧化低密度脂蛋白抗体-IgM水平与冠状动脉病变程度及住院期间预后的相关研究

目的：探讨血清氧化低密度脂蛋白抗体-IgM（ox-LDL-Ab IgM）水平在ST段抬高急性心肌梗死（STEMI）患者中与冠状动脉病变程度及近期预后的相关性。方法选取2008年8月至2009年5月诊断明确并行急诊经皮冠状动脉介入（PCI）治疗的STEMI患者95例,根据冠状动脉造影结果分为单支病变组、双支病变组及三支病变组,并以Gensini积分评价冠状动脉狭窄程度,分别测定血清ox-LDL-Ab IgM、丙二醛（MDA）、血脂,计算体质量指数（BMI）,统计患者住院期间心血管事件发生情况,分析ox-LDL-Ab IgM水平与冠状动脉病变程度及近期预后的关系。结果 STEMI患者血清ox-LDL-Ab IgM水平随冠状动脉病变支数增加而降低（P＜0.05）,但与Gensini积分无明显相关性（P＞0.05）;ox-LDL-Ab IgM水平与血脂、血糖水平等无明显相关性（P＞0.05）,与MDA水平呈显著负相关（r＝-0.319,P＜0.05）;ox-LDL-Ab IgM水平与患者住院期间心血管事件发生率呈显著负相关（r＝-0.708,P＜0.05）,logistic回归分析显示, ox-LDL-Ab IgM是STEMI患者住院预后的保护因素（OR＝-0.588,P＜0.05）。结论血清ox-LDL-Ab IgM水平可在一定程度上反映STEMI患者冠状动脉病变的严重程度。其可能通过调节机体氧化应激水平,减少LDL氧化修饰生成ox-LDL,从而减轻冠状动脉粥样硬化的面积,可能对STEMI患者近期预后具有保护作用。     

大黄与西药的相互作用

大黄是中医临床上最常用的一味中药,最近研究和临床证明,大黄具有显著的清热解毒、消炎抑菌、利胆通便等多种功效。随着对其药理作用研究的不断深入,目前已引起国内外医药学界的重视。本品与西药联用现象亦与日俱增。大黄中的多种有效成分尤其是蒽醌类和鞣质类成分与西药发生作用,对临床疗效有很大影响。因此,了解其相互作用具有重要意义。     

铜绿微囊藻抗性株与野生株对铜离子的富积效应

目的：分离筛选高铜离子抗性的铜绿微囊藻(Microcystis aeruginosa),并研究其抗性机制及对铜离子的富积效果。方法：将抗性株与野生株分别加入不同浓度铜离子的BG11培养基中,在不同时间段取样过滤,分析过滤液中铜离子的残留量。结果：在相同时间内,抗性株比野生株产生类金属硫蛋白(MTL)的量要大,培养基中Cu^2 减少主要发生在培养后24h以前。抗性株在24h之前对Cu^2 富积较快,24h的去除率为48．87％,96h的去除率为80．77％;而野生株在24h之前对Cu^2 富积相对较慢,24h去除率为20．88％,96h的去除率为34．29％。结论：利用抗性株铜绿微囊藻治理高铜离子污染源具有较大的应用前景。     

杜氏盐藻核基质附着区结合蛋白基因的克隆及原核表达

目的:构建杜氏盐藻核基质附着区(MAR)结合蛋白的原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),表达并纯化融合蛋白.方法:根据GenBank上杜氏盐藻MAR结合蛋白的cDNA全长序列设计出含有特定酶切位点的引物,PCR法获得MAR结合蛋白基因序列全长,将其克隆至载体pMD18-T中.酶切连接到pET-28a(+)上构建原核表达载体pET-MBP,转化感受态大肠杆菌BL21(DE3),异丙基硫代-β-半乳糖苷(IPTG)诱导其表达,Western blotting检验其表达结果.结果:重组质粒经酶切、PCR、测序鉴定,成功构建了原核表达载体pET-MBP,对表达的融合蛋白的Western blotting分析结果表明表达的蛋白质为目的蛋白.Ni2+亲和层析法纯化蛋白质,纯化后目的蛋白在总蛋白中的含量约为70%.结论:成功地克隆杜氏盐藻MAR结合蛋白基因的全长并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,且纯化了MAR结合蛋白的融合蛋白.     

腺病毒和腺伴随病毒基因元件提高白细胞介素—6在真核细胞中 …

目的：构建高效真核表达载体以提高细胞因子在真核细胞中的表达效率方法：利用基因克隆技术构建了两个新的白细胞介素－６（ＩＬ－６）真核表达载体ｐＡｄＣＩＬ－６和ｐ３３５ＣＩＬ－６。将它们瞬时转染ＣＯＳ－７细胞后，利用ＩＬ－６依赖株７ＴＤ１对上清中的ＩＬ－６进行检测。结果：两种新建载体分别能提高ＩＬ－６在真核细胞中的表达效率５．５和３．４倍。结论：腺病毒的病毒相关Ⅰ和ⅡＲＮＡ和腺伴随病毒的倒转末端重复序列     

PTKs及其在信号传导和T细胞活化中的作用

PTKs(Protein Tyrosine Kinases)即酪氨酸蛋白激酶,是1980年由Hunter等人首先在Rous肉瘤病毒的编码蛋白质中发现的。它能特异地将磷酸基团转移到酪氨酸(Tyr)而对Ser/Thr,Hyp无作用。随后相继发现了多种PTKs及其作用底物。进一步研究表明它在调控细胞生长、分裂、转化、衰老及细胞信号传导诸方面有极其重要的作用。本文就PTKS的特性及     

杜氏盐藻硝酸盐还原酶基因5'上游序列的克隆与序列分析

目的:克隆杜氏盐藻硝酸盐还原酶(NR)基因5'上游序列,并对其进行测序和序列分析.方法:提取杜氏盐藻基因组DNA,经过BamH I、EcoR I、Hind Ⅲ、Pst I、Sal Ⅰ及Xbal Ⅰ限制性内切酶分别酶切后,再与相应接头连接,分别构建盐藻步行基因组文库BL、EL、HL、PL、SL和XL.采用巢式(LA)-PCR方法,从上述步行基因组文库中扩增杜氏盐藻NR基因5'上游序列,克隆至pMD18-T,对酶切鉴定正确的克隆进行测序.结果:从HL里扩出约1 200 bp特异性片断,回收此片段并进行T载体克隆,对阳性克隆测序.该序列的3'端与已知NR基因cDNA 5'端序列完全一致.该序列含有多个与转录调控有关的保守序列(如CAAT-box和GAGA-box),含有与EBP、EFII、NF-E1、LV 等转录因子以及广谱激活剂Oct-1结合位点相似的核苷酸序列.结论:采用LA-PCR基因组步行方法,从已知cDNA 周围未知启动子或其他调控区域中克隆得到的NR基因的5'上游区序列,可能是一种新的杜氏盐藻启动子区序列.