排序方式: 共有5条查询结果,搜索用时 0 毫秒
1
1.
目的:设计和构建表达PD-1 shRNA的靶向CD19 CAR-T细胞并验证其体外肿瘤细胞杀伤能力。方法:设计并构建 表达PD-1 shRNA的CD19 CAR分子基因,将其包装成逆转录病毒载体,通过qPCR法检测病毒载体拷贝数。将慢病毒转导人原 代T细胞,获得三种CAR-T细胞,分别为RNAU6-CD19 CAR-T、PD-1 shRNA1-CD19 CAR-T、PD-1 shRNA2-CD19 CAR-T细胞。 采用qPCR法检测三种CAR-T细胞中PD-1 mRNA的表达水平,流式细胞术检测三种CAR-T细胞中PD-1表达水平,萤光素酶报 告基因实验、流式细胞术检测在不同效靶比时 CAR-T 细胞对 CD19 阳性靶细胞(人淋巴瘤 daudi 细胞)的杀伤功能。结果: RNAU6-CD19 CAR、PD-1 shRNA1-CD19 CAR、PD-1 shRNA2-CD19 CAR 三种 CAR 分子成功包装成逆转录病毒载体,病毒载 体拷贝数均高于 1×107 拷贝/mL,转导人原代 T 细胞获得 CAR-T 细胞,RNAU6-CD19 CAR-T、PD-1 shRNA1-CD19 CAR-T、PD-1 shRNA2-CD19 CAR-T细胞转导效率分别为43.1%、55.1%、41.7%。与RNAU6-CD19 CAR-T细胞相比,PD-1 shRNA1-CD19 CAR-T、 PD-1 shRNA2-CD19 CAR-T细胞中PD-1 mRNA表达水平均显著降低(均P<0.01)、细胞表面PD-1表达水平更低(均P<0.01)、体 外对daudi细胞的杀伤率更高(P<0.05或P<0.01)。结论:成功构建表达PD-1 shRNA的靶向CD19 CAR-T细胞,其对CD19阳性 靶细胞的杀伤率显著提高,PD-1 mRNA及其翻译产物PD-1的表达减少,CAR-T细胞的耗竭减缓。 相似文献
2.
3.
目的 应用CRISPR/cas9技术构建敲除CD19的Raji-Luc淋巴瘤细胞,并对其免疫逃逸能力进行初步验证。方法构建PB-CRISPR-CD19小向导RNA(small guide RNA, sgRNA)质粒,筛选最优的sgRNA序列,用pCAG-PBase转座酶、PB-CD19 sgRNA及PB-CRISPR-Cas9共同电转染Raji-Luc细胞,采用流式分选和极限稀释法筛选得到稳定敲除的单克隆细胞株。经过基因序列检测对敲除效果进行验证;酶标仪检测细胞系表面荧光素酶的表达情况;以实验室前期构建的CD19 CAR-T和CD38 CAR-T作为效应细胞,用荧光素酶化学发光法验证Raji-Luc CD19 KO细胞株的免疫逃逸能力。结果 电转染制备的Raji-Luc CD19 KO细胞转染效率较高,筛选所得两组单克隆细胞敲除效率均达到99%以上,与原始Raji-Luc细胞的荧光素酶表达无显著差异,且不能激活CD19 CAR-T细胞对其进行杀伤。结论 成功构建了Raji-Luc CD19 KO淋巴瘤细胞系。 相似文献
4.
目的:探讨shRNA靶向抑制CD38的方法能否增强抗CD38 CAR-T细胞的抗癌功能。方法:构建shRNA靶向抑制CD38的抗CD38 CAR-T细胞的CAR分子,利用逆转录病毒载体包装成功后转导人原代T细胞,制备CAR-T细胞。实验分为shRNA1 CD38 CAR-T组、shRNA2 CD38 CAR-T组和对照组(shR-NC-CD38 CAR-T细胞)。采用qPCR法检测CAR-T细胞CD38 mRNA相对表达水平,计算CAR-T细胞培养0~14 d的增殖倍数,CFSE法检测CAR-T细胞与人Burkitt淋巴瘤细胞Raji-luc或人多发性骨髓瘤外周血B淋巴细胞RPMI-8226-luc共培养时的增殖情况,荧光素酶化学发光法检测CAR-T细胞在不同效靶比(1∶1、1∶2、1∶4、1∶8)时对Raji-luc和RPMI-8226-luc细胞的杀伤效率,ELISA法检测CAR-T细胞杀伤Raji-luc或RPMI-8226-luc细胞时上清液中IFN-γ水平,FCM检测CAR-T细胞表面耗竭T细胞生物标志物PD-1的表达水平。结果:shR-NC-CD38 CAR、shRNA1-... 相似文献
5.
目的 探究女性围绝经期性激素水平与性欲障碍的关系,并分析雌激素替代疗法干预的作用与意义。方法 选取2018年3月至2021年3月海南现代妇女儿童医院就诊的103例围绝经期女性作为研究对象,根据女性性功能指数(FSFI)问卷调查结果分为性欲正常组(n=22)与性欲障碍组(n=81)。比较两组性欲评分、绝经指数、性激素[雌二醇(E2)、卵泡生成素(FSH)、孕酮(P)、睾酮(T)]水平,分析性激素水平与性欲评分、绝经指数的相关性及对性欲障碍的预测价值;性欲障碍组均给予雌激素替代疗法干预,对比不同干预效果患者性激素变化。结果 性欲障碍组性欲评分、E2、P、T水平低于性欲正常组,绝经指数、FSH高于性欲正常组(P<0.05);E2、P、T水平与性欲评分呈正相关,与绝经指数呈负相关,FSH与性欲评分呈负相关,与绝经指数呈正相关(P<0.05);受试者工作特征(ROC)曲线显示,E2、P、T、FSH联合预测性欲障碍的曲线下面积(AUC)为0.920,高于各指标单独预测。性欲障碍组经雌激素替代疗法干预... 相似文献
1