用PCR技术检测牙周微生物中间普氏菌

中间普氏菌是一种产黑色素、革兰氏阴性厌氧菌,它是急性坏死溃疡性龈炎,妊娠期龈炎、成人牙周炎的重要致病菌。变黑普氏菌是与中间普氏菌极相近的菌种,在口腔健康牙周中也可检测到。目前鉴别这两种细菌的方法有多种,但只有利用16 SrRNA寡核苷酸探针杂交方法才能直接检测临床样本中的中间普氏菌。本文报道用PCR检测牙周的中间普氏菌,以区别于变黑普氏菌及其它菌种。     

口腔链球菌丙酮酸氧化酶基因缺陷型变异株的构建

目的:利用口腔链球菌丙酮酸氧化酶基因(sopox) 的克隆序列,重组构建新的不能产生H2O2 的口腔链球菌变异株。方法:口腔链球菌株ATCC10557 经培养后用酚-氯仿法抽提细菌染色体基因组DNA ,经PCR 扩增sopox 基因,用BamHI 进行限制酶切;参照Chris 方法进行电转化,挑选阳性菌落测定其上清液中H2O2 的含量;将细菌传3～4 代后再次重复上述检测。结果:转化子经筛选后得到1 株阳性菌落,测定上清液中H2O2 含量,第1 次检测表明变异株产生H2O2 的量仅有所下降(介于阳性对照ATCC 10557 和阴性对照大肠杆菌JM109 之间) ,经3～4 次传代后变异株中上清液H2O2 量已经明显低于阴性对照。结论:成功构建了口腔链球菌丙酮酸氧化酶基因缺陷型变异株。     

伴全身性疾病患者的牙周治疗

对伴有全身系统疾病的牙周病患者,常因其疾病的特殊性以及全身、口腔的并发症,牙周医生需相应调整牙周治疗计划,这对患者的全身整体治疗有重要意义。本文着重就不同的伴全身疾病患者的牙周治疗特点及相关措施作一综述。     

显著性龋均指数

12岁儿童是龋病流行病学调查研究中一个较重要的群体 ,世界卫生组织 (ＷＨＯ)推荐的《口腔健康调查 (第四版 )》的年龄组划分中 12岁儿童代表未成年儿童[1 ] 。对于大多数国家该人群的调查数据相对容易获得 ,该年龄段儿童刚刚进入中学阶段 ,在中国这一过程一般持续 6年 ,很容易在学校开展流行病学研究工作。而且 12岁也作为全球监控龋病的年龄 ,用于比较和监控各国口腔疾病趋势。1 背景近二十年来世界范围内儿童恒牙的患龋情况出现了两个重要的趋势。首先 ,大多数国家 ,特别是发达国家儿童恒牙患龋率发生了大幅度的下降。Ｐａｋｈｏｍｏｖ认…     

口腔链球菌丙酮酸氧化酶调节基因的克隆和功能分析

目的 :阐明体外扩增得到的口腔链球菌丙酮酸氧化酶基因的上游区序列是否即是调控序列 ,是否具有启动子活性。方法 :将口腔链球菌丙酮酸氧化酶基因调节区PCR扩增产物经HindⅢ酶切 ,克隆至载体PKK2 32 - 8,转化E .coliJM 10 9,通过氯霉素抗性筛选阳性菌落 ,重新增菌后取质粒DNA ,再经酶切鉴定。将重组子点种于不同浓度的氯霉素平板上 ,37℃培养 18h ,观察菌落生长情况 ,测定重组质粒转化子对氯霉素的抗性水平。结果 :筛选得到 1个阳性菌落 ,重组质粒DNA的酶切产物经 10 g/L琼脂糖凝胶电泳 ,表明获得片段的Mr约为 1.3kb ,与预计大小相符 ,证实其为阳性重组克隆。测定重组质粒转化子对氯霉素的抗性水平显示其抗性达 10 2 0 μg/mL。 结论 :本研究已成功克隆口腔链球菌丙酮酸氧化酶调节基因。     

LIM矿化蛋白1对牙周膜细胞生物学特性的影响

目的以LIM矿化蛋白1（LIM mineralization protein 1,LMP-1）基因构建真核表达载体PET43.1a-LMP-1,转染人牙周膜细胞,观察对其生物学特性的影响。方法采用基因工程技术构建真核表达载体pET43.1a-LMP-1,脂质体法转染人牙周膜细胞,四唑盐比色法和酶联免疫吸附测定法测定真核表达载体pET43.1a-LMP-1转染对牙周膜细胞活性以及碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）的影响。结果与空质粒转染组和空白对照组相比,pET43.1a-LMP-1真核表达载体转染后牙周膜细胞中LMP-1 mRNA和蛋白表达显著增强（P〈0.05）;细胞增殖明显增加;ALP表达明显增强,并随时间延长逐渐上升。结论外源性LMP-1转染进入牙周膜细胞能够促进细胞的增殖和矿化能力。     

人牙周韧带细胞膜片的体外实验研究

目的 观察体外培养人牙周韧带细胞(hPDLCs)的成骨、成脂能力;构建hPDLCs膜片并鉴定膜片细胞外基质的主要结构蛋白.方法 通过酶联组织块法分离并纯化培养hPDLCs;免疫细胞化学法鉴定hPDLCs来源及干细胞标志物STRO-1表达情况;取第2～4代细胞分别用成骨诱导培养基和成脂诱导培养基培养,茜素红及油红O染色检测hPDLCs的成骨、成脂能力;制备成熟的hPDLCs膜片,苏木素-伊红(HE)及免疫组织化学染色法鉴定膜片细胞外基质主要结构蛋白Ⅰ型胶原、层黏蛋白及纤连蛋白的表达情况.结果 经原代培养的hPDLCs抗波形蛋白染色阳性,干细胞标志物STRO-1染色阳性,证实hPDLCs来源于间充质并具有干细胞潜在分化能力;hPDLCs在诱导成骨、成脂分化培养14～16 d后,茜素红及油红O染色结果阳性提示hPDLCs具有良好的成骨及成脂分化能力;HE染色及免疫化学染色发现hPDLCs膜片高表达细胞外基质主要结构蛋白Ⅰ型胶原、层黏蛋白及纤连蛋白.结论 本研究从细胞分离培养,来源鉴定、多向分化潜能诱导及细胞膜片技术等方面证实PDLCs中存在成体干细胞,提示hPDLCs膜片能为牙周组织再生种子细胞提供新来源,可进一步深入研究.     

不同浓度的含氟牙膏再矿化根面龋的体外实验

目的:比较氟浓度分别为1.1g/L、1.45g/L和5g/L的含氟牙膏促进根面龋再矿化的效果.方法:取第三磨牙靠近冠方的根部制备成牙根组织块,开窗后,置37℃脱矿液中96h,随机分为1.1g/L、1.45g/L、5g/L含氟牙膏组和不含氟牙膏组,每组8个样本,置于处理液、酸性缓冲液和中性缓冲液中,进行再矿化循环.每天6次,循环8天.应用电阻抗仪测量开窗区再矿化前后的电阻值,偏光显微镜观察各组样本再矿化后的形态学变化,激光扫描共聚焦显微镜(CLSM)分析样本再矿化后矿物质含量的变化.采用SPSS13.0软件包对数据进行单因素方差分析.结果:再矿化后含氟牙膏组样本的电阻值变化、CLSM总荧光量和平均荧光量变化均高于不含氟牙膏组,且5g/L含氟牙膏组的变化高于1.1g/L和1.45g/L组(P<0.05).偏光显微镜观察发现,含氟牙膏组样本再矿化后可见不同程度的矿物质沉积,5g/L含氟牙膏组的矿物质沉积带宽于1.1g/L和1.45g/L组.结论:含氟牙膏能有效再矿化人工根面龋,氟浓度为5g/L的牙膏再矿化效果优于氟浓度为1.1g/L和1.45g/L的牙膏.     

局部应用PVP-I和H_2O_2治疗牙周炎的临床研究

牙周病是微生物引起的感染性疾病,因而作用于病原因子的抗菌药物治疗愈来愈受到关注。聚维酮碘（ＰＶＰ－Ｉ）是一种新型的广谱杀菌剂,已有研究者将其作为牙周袋的冲洗药物［１,２］,我们将ＰＶＰ－Ｉ和Ｈ２Ｏ２用于牙周袋冲洗后的临床结果报告如下。材料和方法１－材料：１０％聚维酮碘（商品名：爱力克）,３％Ｈ２Ｏ２。２－临床资料：从我院门诊病人中选择中、重度牙周炎患者４８例,患牙１０６颗,年龄２２～６７岁,其中男性２８例,女性２０例,要求患者无严重系统性疾病,无妊娠,三个月内未服用过抗生素,半年内未接受过牙周治…     

环境因素对口腔链球菌产生过氧化氢速率的影响

目的 观察口腔环境多种因素对口腔链球菌（Streptococcus oralis．S.oralis）H2O2产生速率的影响。方法采用微量板法测定S、oralis在不同浓度的葡萄糖、蔗糖、Ca^2＋、F^-、HFPO3^-及不同pH值条件下产生H2O2的速率。结果S．oralis在无外源性糖的条件下H2O2产生速率为每分钟7．48μmol／L；加入0．01～10mmol／L葡萄糖和蔗糖后，H2O2产生速率显著增高（P〈0．05）；不同浓度的葡萄糖、蔗糖间，S．oralis H2O2产生速率差异无统计学意义（P〉0.05）；pH〈6．0时S．oralis的H2O2产生速率显著降低（P〈0．05）；Ca^2＋、F^-和FHPO3^-对S．oralis H2O2产生速率的50％抑制浓度分别为1820．71、1．90和12．65mmol／L。结论环境因素对S．oralis H2O2产生速率有一定影响。