霉酚酸酯对高糖所致大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响

霉酚酸酯（MMF）是一种新型的免疫抑制剂。本研究旨在探讨MMF对不同浓度葡萄糖所致的系膜细胞增殖及细胞外基质增多是否有抑制作用。     

变异链球菌腺苷磷酸硫酸酶的原核表达及功能研究

目的构建变异链球菌aps基因原核表达载体,表达纯化目的蛋白,继而对其生物学功能进行初步鉴定。方法以变异链球菌UA159株基因组DNA为模板PCR扩增变异链球菌aps基因编码区,插入原核表达载体pASK-IBA43plus,转化E.coli Top 10,无水四环素诱导His-APS蛋白表达,经Ni-NTA纯化后,检测His-APS蛋白腺苷磷酸硫酸酶活性及核糖核酸酶活性。结果 PCR扩增出933bp的aps基因开放读码框,成功构建aps基因原核表达载体pASK-aps,并在E.coli Top 10中诱导表达,SDS-PAGE检测重组His-APS蛋白分子质量单位为38ku,该蛋白在Mg2+及Mn2+存在条件下能水解pAp,且呈时间及浓度依赖性,但不能降解Cy5标记的随机6nt寡核苷酸探针。结论重组His-APS蛋白具有腺苷磷酸硫酸酶活性,呈时间及浓度依赖性,但不具有核糖核酸酶活性。     

维持血液透析患者血清铝负荷及其相关因素研究

背景 铝在人体内的蓄积给维持血液透析患者带来了严重危害,然而目前国内对血液透析患者血清铝水平的大规模调查尚不多见。目的 检测福建省慢性肾衰竭维持血液透析患者血清铝水平,探讨影响血清铝水平的因素。方法 收集2012年1月-2013年12月福建省厦门市、漳州市、龙岩市、泉州市、三明市15所医院透析中心慢性肾衰竭维持血液透析患者和健康体检者血清标本,共收集慢性肾衰竭维持血液透析患者449例,健康体检者262例,采用AA800原子吸收光谱仪检测血清中铝水平。采用多重线性回归分析影响慢性肾衰竭患者血清铝水平的因素。结果 慢性肾衰竭维持血液透析患者血清铝水平为（18.34±6.16）μg/L,高于健康对照者的（1.57±0.45）μg/L（t=2.324,P＜0.05）。52例（11.6%）慢性肾衰竭维持血液透析患者血清铝水平超过了国际肾脏病组织推荐的慢性肾衰竭患者血清铝允许上限值（30 μg/L）。男性慢性肾衰竭维持血液透析患者血清铝水平为（18.45±6.48）μg/L,女性为（18.22±5.64）μg/L,两者比较,差异无统计学意义（t=1.058,P＞0.05）。各透析中心透析液及所在城市饮用水铝水平比较,差异有统计学意义（F=4.252、3.316,P＜0.05）。服用磷结合剂、VitD制剂、注射促红细胞生成素（EPO）及近期接受输血治疗的血液透析患者血清铝水平高于未接受上述治疗患者（P＜0.05）。慢性肾衰竭维持血液透析患者中不同饮茶量、食加工面食比例者血清铝水平比较,差异有统计学意义（P＜0.05）;不同食肉食比例患者血清铝水平比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。多重线性回归结果显示,饮茶量、面食饮食、饮用水铝含量、每日尿量、透析频率、透析液铝含量、服用磷结合剂、服用VitD、注射EPO、输血为影响慢性肾衰竭患者血清铝水平的因素（P＜0.05）。结论 福建省慢性肾衰竭维持血液透析患者铝负荷较高,饮食习惯、治疗措施及透析情况影响患者血清铝水平。     

氯沙坦防治糖尿病肾病的比较研究

目的观察在微量白蛋白尿发生前后应用氯沙坦对糖尿病肾病(DN)的治疗作用及其机制。方法单侧肾切除的链脲霉素(STZ)糖尿病大鼠,随机分为正常对照组、DN组、早期治疗组和晚期治疗组。早期治疗和晚期治疗组分别于糖尿病模型建立后即刻或第9周起开始给予氯沙坦20 mg.kg-1.d-1灌胃,疗程均为8 w。第16周时,观测肾组织形态学及肾功能变化,并采用荧光实时定量RT-PCR检测肾脏转化生长因子β1(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)、;纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)等细胞因子的表达情况。结果DN组大鼠尿微量白蛋白排泄率(UAER)持续上升;血肌酐(Scr)、肾脏肥大指数(KW/BW)、肾小球平均体积(MGV)、系膜面积比(FMA)以及肾脏TGF-β1、CTGF、PAI-1和纤维连接蛋白(FN)的mRNA表达均明显升高,而肌酐清除率(Ccr)已开始下降。早期治疗和晚期治疗组以上指标均明显改善,但两组之间无显著差异。结论氯沙坦可通过下调肾脏细胞因子基因表达,起到肾脏保护作用;但在微量白蛋白尿出现之前进行干预并不比在微量白蛋白尿出现之后进行治疗的效果更好。     

肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体系统和核因子κB在糖尿病大鼠肾脏中的表达

目的探讨肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体（TRAIL）系统在糖尿病肾病发生发展中的作用。方法观察TRAIL及其死亡受体4（DR4）、诱骗受体2（DcR2）和核因子KB（NF-KB）在糖尿病大鼠不同时期肾脏中的表达及分析其与肾功能的关系。将80只Wistar大鼠随机分为对照组（NC组）和糖尿病组（DM组），一侧肾切除后，腹腔注射链脲佐菌素（STZ，55mg／kg）建立糖尿病大鼠模型。在第4、8、12、16周末，随机处死各组8只大鼠，收集血液、尿液和肾组织，检测血生化指标、尿蛋白量（24h）和肥大指数等。应用荧光实时定量RT-PCR和免疫组织化学的方法检测肾皮质TRAIL及其受体DR4、DcR2和NF-KB的mRNA和蛋白的表达情况。结果各时间点DM组大鼠尿蛋白量（24h）和肥大指数（肾质量，体质量）均显著高于NC组（P〈0．05）；血白蛋白在第8周末开始显著低于NC组（P〈0．01）；Scr、BUN于第16周末显著高于NC组（P〈0．01）。DM组大鼠TRAIL及其受体DR4mRNA在第4、8及12周末时表达均显著低于NC组（P〈0．01）；第16周末时表达显著高于NC组（P〈0．01）。DM组大鼠DcR2mRNA在第4、8及12周末时表达均显著高于NC组（P〈0．01）；NF-KB的基因表达均显著高于NC组（P〈0．05）。免疫组化结果显示TRAIL及其受体DR4、DcR2主要在肾小管表达，而在肾小球和脉管系统未见表达；NF-KB在肾小球和肾小管均有表达；TRAIL及其受体和NF-KB在各组表达趋势与PCR结果一致。结论TRAIL系统作为调节细胞凋亡的一组重要因子，参与了糖尿病肾病的发生发展。     

肾淋巴循环障碍对大鼠肾功能和组织结构的影响

目的：观察肾淋巴循环障碍对大鼠肾脏功能及组织结构的影响。方法：雄性Wister大鼠48只，随机分为模型组和假手术对照组各24只。每组分别在术后1、2、4、8周各处死6只。测定24?h尿蛋白和血肌酐。PAS和Masson染色观察肾组织病理改变，并行半定量分析。透射电镜观察肾脏超微结构改变。结果：模型组大鼠尿蛋白显著增加，且随时间推移肾功能逐渐减退，并出现明显的组织病理改变，尤其小管损伤指数及小管间质纤维化指数明显高于对照组（分别为P＜0.01和P＜0.05）。电镜结果显示，肾小球内皮细胞中线粒体多出现低密度或空化，系膜插入，局部足突细胞融合。结论：肾淋巴循环障碍可致大鼠肾脏功能及小管间质损害，并随时间延长而加重，提示肾淋巴循环障碍为引起慢性肾损害的原因之一。     

尿液蛋白质组学研究进展

在蛋白质组学广泛深入到医学界各个研究领域的同时,尿液蛋白质组学也取得了较大进展,在寻找各种泌尿系统及其它系统疾病早期诊断性标志物、探索疾病发生发展的机制方面取得了重要的研究成果。本文着重从蛋白质组学分析的角度,追踪尿液蛋白质组学研究的最新进展, 对其研究方法和几种主要的实验技术及其对疾病诊断及临床应用中的研究进展做一概述。     

慢性肾衰竭患者血清铝负荷及相关因素分析

目的：探讨慢性肾衰竭患者血清铝水平的变化及其影响因素。方法收集530例慢性肾衰竭患者与262例健康体检者血清标本,采用石墨炉原子吸收光谱法测定血清中铝含量。对所得数据和资料进行统计学处理,多元线性回归筛选分析慢性肾衰竭患者血清铝的影响因素。结果慢性肾衰竭患者血清铝水平为17.33±3.15μg/L,显著高于正常人血清铝水平1.57±0.45μg/L（P〈0.001）;慢性肾衰竭患者血清铝水平与性别、体重、身高、血压、饮食中肉食所占的比例无显著相关,与尿量周透析次数成负相关,与年龄、使用维生素D（VitD）、红细胞生成素（EPO）和磷结合剂、近期接受输血、透析次数成正相关,与透析方式显著相关。结论慢性肾衰竭患者铝负荷较高,肾功能下降、饮食习惯、治疗措施及透析情况影响患者血清铝水平。     

缬沙坦联合霉酚酸酯对糖尿病大鼠肾脏TRAIL及NF-κB的影响

目的 探讨肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)及其核因子-κB(NF-κB)在糖尿病大鼠肾组织的表达及其联合应用缬沙坦(valsartan)和霉酚酸酯(MMF)对糖尿病大鼠肾组织TRAIL及其NF-κB的影响.方法 采用一侧肾切除腹腔注射STZ(55 mg/kg)建立糖尿病大鼠模型,将80只Wistar大鼠随机分为:对照组(NC)、糖尿病组(DM)、缬沙坦治疗组(DM+V)、霉酚酸酯治疗组(DM+M)、联合治疗组(DM+V+M).取材,检测各项生化指标,并采用荧光实时定量RQ-PCR方法检测肾皮质TRAIL及其NF-κB的mRNA的表达.免疫组织化学测定肾组织TRAIL及其NF-κB蛋白的表达.结果 ①DM组24 h尿蛋白和肾重/体重比均高于NC组(均P＜0.05),并随糖尿病时程延长逐渐增高,于DM12周时达到最大值;血白蛋白在DM8周组开始下降(P＜0.01),并逐渐降低;血肌酐、尿素氮于DM16周组开始下降(P＜0.01).各治疗组与DM8周组相比较,肾重/体重比变小(P＜0.05),24 h尿蛋白总量降低(均P＜0.05),血白蛋白回升(P＜0.05).以联合组最为明显.②荧光定量PCR显示TRAIL在12周前表达降低(均P＜0.01),16周时其表达量明显升高(P＜0.01).各治疗组与DM8周组比较表达增加(P＜0.05),以霉酚酸酯组和联合组最为明显(P＜0.01).DM组NF-κB的mRNA表达随时间延长逐渐增强(P＜0.01),各治疗组与DM8周组比较表达均降低(均P＜0.05),以联合组最为明显.③免疫组化显示TRAIL主要在肾曲小管表达,肾小球和脉管系统没有表达.DM各组在12周前表达均降低(均P＜0.05),差异有统计学意义;16周后表达明显增强(均P＜0.01).各治疗组阳性细胞数明显增加(均P＜0.05).NF-κB在肾小球和肾小管均有表达,DM各组NF-κB表达量随时间逐渐增高,各治疗组可显著降低NF-κB表达.结论 TRAIL作为自身免疫系统的一个重要监控因子,其在糖尿病大鼠肾脏中的表达说明其密切参与了糖尿病肾病的发生发展,机制可能由NF-κB调节.早期缬沙坦和霉酚酸酯联合干预治疗可通过来增强TRAIL的表达,对肾脏产生保护作用.     

变异链球菌clpP基因启动子的克隆及活性测定

目的 克隆变异链球菌clpP基因启动子,并进行初步验证。方法 PCR分别扩增变异链球菌clpP基因5′-侧翼序列FclpP及其突变体FclpP-ΔRS,插入β-半乳糖苷酶 (β-glucuronidase, gusA)报道基因表达载体pIB107 BamHI/XhoI酶切位点之间,构建clpP基因5′-侧翼序列及其突变体gusA报道基因表达载体pFclpP和pFclpP-ΔRS,PCR、酶切及测序鉴定;经Bgl II线性化后转化变异链球菌UA159,卡那霉素筛选阳性克隆,得到clpP基因5′-侧翼序列及其突变体gusA报道基因表达株SClpP和SClpP-ΔRS,经PCR及测序鉴定后,测定SClpP、SClpP-ΔRS、阳性对照SAmi和阴性对照SIB107的GusA活性。结果 成功扩增出变异链球菌clpP基因5′-侧翼序列及其突变体;变异链球菌clpP基因gusA报道基因表达载体经PCR、酶切及测序鉴定正确无误;PCR及测序结果表明成功构建clpP基因5′-侧翼序列及其突变体变异链球菌gusA报道基因表达株SClpP和SClpP-ΔRS;GusA活性测定证实变异链球菌clpP基因5′-侧翼序列及其变体gusA报道基因表达株SClpP和SClpP-ΔRS的GusA活性分别是阴性对照pIB107的34.6和8.7倍,是阳性对照松鼠葡萄球菌ami基因启动子片段gusA报道基因表达株活性的5.2和1.3倍,提示插入片段FclpP和FclpP-ΔRS具有较强的启动子活性。结论 成功定位并克隆变异链球菌clpP基因启动子,为今后研究clpP基因上游调控序列提供试验和理论依据。