人鼻咽上皮细胞CYP2E1 cDNA克隆及序列分析

目的 :比较正常人胚鼻咽上皮 (HENE)细胞、二亚硝基哌嗪转化的人胚鼻咽上皮 (HENE)所建的细胞系( 742 9)、鼻咽癌细胞系 (HNE1)细胞色素P45 0 2E1(CYP2E1)mRNA表达序列 ,探讨CYP2E1在鼻咽癌变过程中的作用特点。方法 :采用RT PCR方法和DNA重组技术从HENE ,742 9,HNE13种细胞系中克隆的CYP2E1cDNA片段 ,测序并分析其结构改变特征。结果 :①与HENE 2E1比较 ,742 9 2E1存在 846位 (A→T)、90 1位 (A→G)两个点突变 ;HNE1 2E1存在 90 1位 (A→G)一个点突变。②与成人肝来源的CYP2E1CDs序列 (GenBank号为J0 2 843)比较 ,发现HNE1 2E1序列与其完全匹配 ;HENE 2E1序列存在 90 1位 (G→A)点突变。但上述突变对应部位氨基酸序列并无改变。结论 :鼻咽癌发生过程中CYP2E1基因cDNA序列仅存在少数无义突变 ,表现出其高度保守性。     

基于TCGA数据库分析B3GAT3基因在肝癌中的表达及临床意义

目的 ：基于TCGA数据库等公共数据库中的癌症数据,分析B3GAT3基因在原发性肝癌中的表达及其临床意义。方法 ：基于TCGA数据库等公共数据库中的原发性肝癌患者的基因表达相关数据和相应的临床资料,采用GEPIA、UALCAN数据库工具分析B3GAT3 mRNA、蛋白在肝癌与正常组织之间的表达情况,比较B3GAT3基因在肝癌各临床病理分期之间的表达差异,然后进行Kaplan-Meier生存分析评估其对肝癌患者生存期的影响,最后用SPSS24.0软件做ROC曲线分析该基因作为肝癌的一个诊断指标的可行性。结果 ：B3GAT3 mRNA、蛋白在肝癌组织中表达比正常组织高;B3GAT3表达与肝癌的临床分期没有显著的相关性（P>0.05）;B3GAT3高表达组的肝癌患者的总体生存率（OS）(P=2.4e-7<0.05)和无病生存率（DFS）(P=0.0066<0.05)低于B3GAT3低表达组的患者;B3GAT3mRNA的表达水平是影响原发性肝癌患者OS(HR=2.5,P=6e-7<0.05)和DFS(HR=1.5,P=0.0067)的一个危险因素。B3GAT3基因作为诊...     

《分子诊断学》课程教学探讨

正分子诊断学是以分子生物学理论为基础,利用分子生物学的技术和方法,研究人体内源性或外源性生物大分子和大分子体系的存在、结构或表达调控的变化,为疾病的预防、诊断、治疗和判断预后提供信息和决策依据~([1])。分子诊断学对疾病的诊断、预防和治疗正发挥着日益重要的作用,已成为推动检验医学发展的主要力量,是21世纪检验医学的主题~([2])。如何发挥分子诊断学在检验医学中的优势,是检验医学工作者面临的     

一个新的NPCEDRG基因mRNA剪接变异体的克隆及鉴定

目的:克隆并鉴定NPCEDRG基因mRNA剪接变异体.方法:利用5’-RACE、3’-RACE在CNE2细胞中对NPCEDRG基因mRNA剪接变异体进行扩增,T/A克隆入pMD20载体,所获得的阳性重组子经测序证实.结果:成功克隆得到一种新的NPCEDRG基因的mRNA剪接变异体V2,其TSS位于-23 nt处,其CD...     

口腔颌面部囊虫病六例报导

口腔颌面部囊虫病是链状绦虫的幼虫寄生在人体口腔颌面部所引起的疾病。它以豌豆大小可活动之囊性包块为主要临床表现,     

儿童囊虫病二例报告

例1 张×,女,10岁,1973年3月6日就诊。病史:右颊粘膜下肿物发现半月,近数月来面颊部微隆起,无疼痛,未引起注意。半月前由家长发现。无食生猪肉及癫痫史。     

反义四环素转录激活子表达细胞系的构建及鉴定

目的:构建反义四环素转录激活子(reverse Tc-controlled transactivator,rtTA)表达细胞系。方法:将RevTet-On基因表达系统中调控载体pRevTet-On转染NIH3T3细胞,经G418筛选及RT-PCR鉴定。结果:获得7个rtTA不同表达水平的细胞克隆。结论:成功构建rtTA表达细胞模型,为进一步研究特定外源基因的功能提供一个理想实验平台。     

人CYP450 2E1异源性表达模型的建立及底物的表达诱导作用

目的:探讨化学致癌物二亚硝基哌嗪(DNP)对人CYP2E1异源表达的诱导作用。方法:脂质体介导法将外源人CYP2E1cDNA导入NIH3T3细胞,G418筛选后挑取克隆,Southernblot鉴定外源基因的整合,用不同浓度乙醇和DNP处理阳性克隆,RT-PCR和Westernblotting检测各组细胞CYP2E1表达水平。结果:获得二个具有外源基因CYP2E1cDNA整合及稳定表达的细胞克隆;随着乙醇和DNP处理浓度的提高,细胞CYP2E1mRNA和蛋白质水平的表达增强。结论:DNP与乙醇能稳定诱导CYP2E1异源表达,其作用可能与其mRNA转录增强有关;DNP致癌可能与CYP2E1对其原位代谢活化相关。