脐血和骨髓来源的CD34^＋细胞体外扩增巨核祖细胞差异的研究

本研究探讨脐血（CB）和骨髓（BM）来源的CD34^＋细胞体外扩增巨核祖细胞的差异。采用Ficoll—Hypaque分离法分离人CB及BM单个核细胞，免疫磁珠法制备CD34^＋细胞，在含血小板生成素（TPO）、TPO＋白介素11（IL—11）或TPO＋IL11＋肝素的无血清液体培养体系中培养14天。流式细胞术检测扩增产物（CD34^＋、CD41a^＋及CD34^＋CD41a^＋细胞）免疫表型、巨核细胞凋亡率及DNA含量，并以集落形成单位测定法进行粒巨-噬细胞集落形成单位（CFU—GM）、红系爆式集落形成单位（BFU—E）及巨核细胞集落形成单位（CFU—Mk）计数。结果表明：14天培养中，CB来源细胞在总细胞数、CD41a^＋及CD34^＋CD41a^＋细胞扩增倍数上均高于BM（P均〈0．05）。0天CB及BM来源CD34^＋细胞在CFU—GM、BFU—E及总的CFU—Mk的形成能力上无显著性差异（P均〉0．05），但CB来源CD34^＋细胞形成的CFU—Mk以大集落为主，其数量高于BM（P〈0．05）；在培养7、10和14天，CB及BM来源细胞CFU—GM扩增倍数无显著性差异（P均〉0．05），但CB来源细胞的BFU—E及总的CFU—Mk扩增倍数均高于BM（P均〈0．05）。14天培养中CB和BM来源巨核细胞的凋亡率无显著性差异（P均〉0．05）。DNA含量检测发现，14天培养中CB来源巨核细胞始终以2N细胞为主（比例〉90％），而BM来源巨核细胞随着培养时间延长，4N、8N及以上倍体巨核细胞比例逐渐增加。结论：CB来源CD34^＋细胞体外扩增巨核祖细胞能力高于BM，它可能是巨核祖细胞体外扩增较好的来源。     

脐血CD34^＋细胞体外扩增脐血巨核祖细胞的研究

本研究探讨人脐血CD34^＋细胞体外扩增的巨核祖细胞的生物学特性及其免疫原性变化，为体外扩增脐血巨核祖细胞的临床应用提供实验依据。采用Ficoll-Hapaque分离法分离人脐血单个核细胞，应用免疫磁珠法（MACS）再分离富集CD34^＋细胞，在含血小板生成素（TPO，50ng／ml）、白介素-1]（IL—11，50ng／ml）和肝素（25U／ml）的无血清液体培养体系中培养14天。用流式细胞术检测扩增产物免疫表型（CD34^＋、CD41a^＋、CD61^＋、CD34^＋CD41a^＋及CD34^＋CD61^＋）、巨核细胞凋亡率及其表面HLA Ⅰ、Ⅱ类分子的表达，并进行巨核细胞集落形成单位（CFU—Mk）的检测。结果显示：脐血CD34^＋细胞能够有效地向巨核细胞分化，CD41a^＋和CD61^＋细胞比例在培养第14天达到峰值，CD34^＋CD41^＋和CD34^＋CD61^＋细胞比例在扩增第7天达到最高峰[分别为（3．41±2．80）％和（1．89±1．43）％]；CFU—Mk大集落在扩增第7天达到高峰（（20．66±32．79）倍]，小集落在扩增第10天达到高峰[（435．62±482．65）倍]；在培养7、10和14天时巨核细胞的凋亡率分别为（19．48±9．64）％、（26．87±9．03）％和（52．46±11．74）％，其中培养7天和10天的凋亡率无显著性差异（P〉0．05），培养14天的凋亡率显著高于7天和10天（P均〈0．05）；巨核细胞表面HLA Ⅰ、Ⅱ类分子的表达随着扩增天数的延长逐渐降低，其中培养0到10天阶段下降明显．结论：采用TPO＋IL 11＋肝素组合．可以有效地扩增脐血巨核祖细胞；培养7天，CFU—Mk大集落扩增倍数、CD34^＋CD41^＋和CD34^＋CD61^＋细胞比例均达高峰，这是巨核祖细胞体外扩增的较佳培养时间。