激动核受体RXR对大鼠心肌细胞饥饿损伤中自噬和凋亡的双重调控作用

目的探讨激动维甲类X受体(RXR)对大鼠心肌细胞无糖无血清（SGD）饥饿状态下的调控作用及其机制。方法将大鼠心肌细胞株H9c2置于无糖DMEM中培养6h,建立饥饿模型。用9-顺式维甲酸（c-RA）为RXR激动剂,HX531为RXR拮抗剂,并将细胞实验按以下分组：对照组（C组）、SGD干预组（SGD组）、SGD+100nmol/Lc-RA干预组（RA组）、SGD+100nmol/Lc-RA+2.5滋mol/LHX531干预组（HX组）,MTT法检测细胞活性,流式细胞法检测细胞凋亡比例及含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶（Caspase）-3活力,Westernblot法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及下游活性片段Caspase-9蛋白表达,以及自噬相关蛋白LC3、Beclin1表达,透射电镜检测心肌细胞自噬小体。结果与C组比较,SGD组和HX组心肌细胞活力均下降,凋亡百分比、Bax/Bcl-2比值和Caspase-9蛋白水平均上升（均P＜0.01）;与SGD组比较,RA组心肌细胞活力均上升,凋亡百分比、Bax/Bcl-2比值和Caspase-9蛋白水平均下降（均P＜0.01）。SGD组平均荧光强度（MFI）波峰明显右移,为C组的2.3倍（P＜0.01）;而RA波峰出现明显左移,MFI值仅为C组的1.3倍,明显低于SGD组（P＜0.01）;HX组波峰与SGD组相似,MFI值显著高于C组（P＜0.01）。透射电镜下观察到C组中细胞质内细胞器完整,而SGD组和HX组自噬小体数增加,内含有被吞噬的线粒体等结构,部分呈空泡样改变,同时自噬相关蛋白LC3-II/I比值上升,Beclin1表达增加（均P＜0.01）;RA组心肌细胞自噬小体数量明显减少,LC3-II/I比值下调,Beclin1蛋白表达水平降低（均P＜0.01）。结论激动核受体RXR可以保护心肌细胞SGD状态下的损伤,其机制与对凋亡和自噬通路的双重调控作用有关。     

霉酚酸酯与环磷酰胺治疗Ⅱ、Ⅲ级紫癜性肾炎的疗效比较

目的比较分析激素联合霉酚酸酯（MMF）与环磷酰胺（CTX）治疗Ⅱ、Ⅲ级紫癜性肾炎（HSPN）患儿的临床疗效。方法选取经肾穿刺肾脏病理活检确诊为Ⅱ或Ⅲ级的接受激素联合免疫抑制剂治疗的HSPN患儿45例,按照治疗措施分为MMF组15例和CTX组30例。记录治疗前及治疗后1、3、6、9、12个月尿常规、24h尿蛋白定量、血清白蛋白、血清肌酐、血尿素氮等指标,观察临床表现变化,记录两组治疗期间出现的药物不良反应。结果治疗3、6、9个月时MMF组24h尿蛋白定量均明显低于CTX组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。MMF组治疗1、3个月尿蛋白转阴比例分别为46.7%（7/15）和86.7%（13/15）,高于CTX组的16.7%（5/30）和56.7%（17/30）,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。治疗3、6个月时MMF组血尿缓解率分别为60.0％（9/15）和73.3％（11/15）,明显高于CTX组的23.3％（7/30）和40.0％（12/30）,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。治疗3个月时MMF组血清白蛋白明显高于CTX组,差异有统计学意义（P＜0.05）。两组患儿治疗1、3、6、9、12个月时总缓解率比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）;但治疗6、9个月时MMF组完全缓解率均明显高于CTX组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。MMF组出现胃肠道反应及上呼吸道感染各1例;CTX组出现胃肠道反应4例,上呼吸道感染1例,白细胞下降、肝损害、脱发各3例。结论激素联合MMF治疗Ⅱ、Ⅲ级HSPN患儿的近期疗效优于CTX,能更快速地缓解血尿、降低蛋白尿、升高血清白蛋白,达到临床完全缓解,且胃肠道反应、骨髓抑制及肝损害等常见不良反应发生率低,安全性较高。     

调控自噬对H9c2心肌细胞缺氧／复氧损伤的影响

目的探讨调控自噬水平对H9c2心肌细胞缺氧／复氧（H／R）损伤的影响及意义。方法将H9c2心肌细胞缺氧2h／复氧4h,建立H／R损伤模型。以3-甲基腺嘌呤（3-MA）为自噬特异抑制剂和雷帕霉素为自噬增强剂,试验随机分为四组：正常对照组（C组）、H／R组、H／R＋100mol／L3-MA组（M＋H／R组）、H／R＋100nmol／L雷帕霉素（R＋H／R组）,应用MTT法检测细胞活力,透射电镜检测心肌细胞自噬小体,流式细胞技术检测细胞凋亡比例,Westernblot法检测自噬相关蛋白LC3、Beclin1,凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及下游活性片段Caspase-9、Caspase-3蛋白表达。结果H／R组明显诱导H9c2心肌细胞自噬发生、细胞活力下降、凋亡增加（P〈O．01）．Westernblot检测发现,Bax、Caspase-9、Caspase-3活性片段蛋白表达明显增加,Bcl-2表达明显抑制,Bax／Bcl-2比值、活化蛋白Caspase-3、Caspase-9表达增加（P〈O．01）;M＋H／R组H／R损伤作用明显减弱,线粒体凋亡通路及下游蛋白表达抑制（P〈O．01）;而R＋H／R组线粒体凋亡通路进一步激活,促进细胞凋亡发生（P〈O．01）。结论自噬在H9c2心肌细胞H／R损伤中起到致命性作用,抑制自噬可保护心肌细胞H,R氧化应激损伤,其机制与抑制线粒体凋亡通路有关。     

WNK3激酶高表达对白介素-1β诱导HEK293细胞凋亡的保护作用

目的： 观察WNK3激酶高表达对白介素-1β （IL-1β）诱导人胚肾细胞（HEK293细胞）凋亡的作用。方法：HEK293细胞分为3组：Vector+NS组、Vector+IL-1β组和WNK3+IL-1β组。Vector+NS组、Vector+IL-1β组转染对照Vector,WNK3+IL-1β组转染WNK3。药物干预时,Vector+NS组加入等量0.9%氯化钠溶液,Vector+IL-1β组、WNK3+IL-1β组加入10 ng/mL IL-1β。分别于培养0、12、24、36和48 h时,采用CCK-8试剂盒检测细胞活性。孵育0、18、36 h时应用Western blot法检测Caspase-3、cleaved Caspase-3、Caspase-9、cleaved Caspase-9等凋亡蛋白。在IL-1β干预0、30、60 min时采用Western blot法检测JNK通路蛋白。 结果： Vector+IL-1β组在给药后细胞活性逐渐下降,在48 h达到最低值,WNK3+IL-1β组下降幅度较缓和,与同时间点Vector+IL-1β组比较细胞活性回升,在48 h时差异有统计学意义（ P＜0.01）。IL-1β孵育后cleaved Caspase-3和cleavedCaspase-9表达量增加。与36 h的Vector+IL-1β组比较WNK3+IL-1β组的cleaved Caspase-3显著减少,2组的cleaved Caspase-9在18 h及36 h时差异亦存在统计学意义（ P＜0.05）。WNK3转染后p-JNK的表达水平较未转染WNK3组的上升幅度降低（ P＜0.05）。 结论： IL-1β诱导HEK293细胞活性下降,而转染WNK3质粒可以有效逆转部分细胞活性。WNK3激酶通过减少JNK的磷酸化抑制Caspase途径的活化,减少细胞凋亡,起到在不利条件下保护肾脏细胞的作用。     

自然光疗对足月新生儿黄疸的效果观察

目的探讨自然光疗对预防新生儿病理性黄疸及减轻生理性黄疸的效果。方法选取足月新生儿200例,按随机数字表分成观察组和对照组各100例,对照组新生儿予常规护理,观察组新生儿在常规护理的基础上每天接受自然光照射3h,比较两组新生儿出生后0~5d及第15天经皮胆红素值,出生第5天血清总胆红素值及病理性黄疸发生率。结果观察组新生儿出生后0~5d、第15天经皮胆红素值及出生第5天血清总胆红素值均低于对照组,差异有统计学意义(P0.05),观察组无病理性黄疸发生,对照组病理性黄疸发生率9%。结论新生儿早期行自然光疗可预防病理性黄疸及减轻生理性黄疸。     

伴毛细血管内增生的儿童紫癜性肾炎的临床病理及转归分析

目的：探讨伴毛细血管内增生的儿童紫癜性肾炎（EP-HSPN）的临床、病理和疾病转归。方法：回顾性分析2005年1月-2013年6月本院收治的经肾活检确诊为EP-HSPN患儿的临床、病理和随访资料,选取同时段的非EP-HSPN患儿作为对照,将2组进行比较。进一步将EP-HSPN患儿毛细血管内增生的受累肾小球比例按≥50%、＜50%分为DEP-HSPN组（弥漫性毛细血管内增生的HSPN）和非DEP-HSPN组,将2组进行比较。结果：①EP-HSPN组46例,非EP-HSPN组44例,与非EP-HSPN组患儿比较,EP-HSPN组患儿年龄小,起病较急,临床多见关节肿痛、胃肠道受累、肾病水平蛋白尿及低白蛋白血症,更多表现为肾病综合征型;病理上,EP-HSPN组患儿较多呈III级病理表现,新月体比例、毛细血管袢坏死比例高,肾小管间质病变损伤程度轻。②46例EP-HSPN患儿中,DEP-HSPN组13例,非DEP-HSPN组33例,与非DEP-HSPN组患儿相比,DEP-HSPN组患儿有较高的24 h尿蛋白量、血尿素氮,更多表现为肾病水平蛋白尿、低白蛋白血症和肾病综合征型,较少表现为血尿和蛋白尿型。③针对EP-HSPN患儿多采取激素联合环磷酰胺冲击治疗（占50.0%）,非EP-HSPN患儿则较多采用对症治疗（占47.7%）。随访结果中,2组患儿在随访时间和疾病转归上差异无统计学意义。结论：EP-HSPN患儿临床表现和肾小球病理改变较重,早期积极予以激素联合免疫抑制剂干预可获得良好的短期疗效。     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌儿童尿路感染临床特点及预测因素分析

目的：总结产超广谱β-内酰胺酶（Extended- Spectrum β- Lactamase,ESBLs）大肠埃希菌儿童尿路感染（Urinary tract infection,UTI）病例的临床特点及相关预测因素,旨在从临床特点中早期识别产ESBLs细菌感染病例,指导经验性治疗。方法收集195例尿培养阳性病例,对其中112例大肠埃希菌感染病例进行回顾性分析,对比产ESBLs组与非产ESBLs组的临床特点,采用字2检验及多元逐步logistic回归分析产ESBLs大肠埃希菌感染的预测因素。结果195例中,大肠埃希菌为112例(占57.44%),其中产ESBLs菌株79例（占70.54%）。发病年龄＜2岁、培养前使用抗生素、存在尿路异常者更易致产ESBLs菌株感染,产ESBLs大肠埃希菌感染组年龄更小,培养前使用抗生素及存在尿路异常的比例更高,临床上发热、血CRP值升高的表现更显著,非产ESBLs大肠埃希菌组经验性治疗有效率较高,平均住院日更短（P＜0.05或0.01）。多因素logistic回归分析提示培养前使用抗生素、尿路异常、发热、血CRP升高为产ESBLs菌株感染的预测因素（OR =4.657、2.961、5.721、1.442,P＜0.05）。结论对于年龄＜2岁、发热性尿路感染、存在尿路异常,培养前使用过抗生素,血CRP值较高水平的病例,更有可能提示产ESBLs大肠埃希菌感染,可以选择β-内酰胺酶抑制剂复合物类抗生素或碳青霉烯类抗生素作为经验性治疗药物,而没有这些特点的病例,倾向于非产ESBLs大肠埃希菌感染,头孢三代抗生素可作为选择药物。     

儿童溶血尿毒综合征的血液净化治疗

目的 探讨血液净化在儿童溶血尿毒综合征（HUS）中的治疗价值。方法 收集2000年1月~2017年1月温州医科大学附属第二医院、育英儿童医院收治的12例应用血液净化治疗的HUS患儿的临床资料。其中8例患儿予以血浆置换（PE）治疗,4例在此基础上联合连续性肾脏替代治疗（CRRT）或血液透析（HD）;4例患儿单独行腹膜透析（PD）。回顾性分析其治疗前后的临床和实验室指标变化、治疗不良反应及其预后情况。结果 经血液净化治疗,除1例（8.3%）患儿合并呼吸衰竭转院后失访,11例（91.6%）临床表现均改善。治疗后血红蛋白、血小板、血清尿素氮、肌酐、尿酸、乳酸脱氢酶水平、总胆红素及间接胆红素等实验室指标均好转（P<0.05）。8例（66.7%）患儿遗留蛋白尿、伴/不伴镜下血尿。3例（37.5%）患儿PE期间出现过敏反应。1例（25%）PD的患儿继发急性腹膜炎。随访期间,2例（17.4%）出现病情复发,其中1例再予多次PE后好转。结论 PE、CRRT、HD及PD等血液净化治疗能够缓解HUS患儿的临床症状、改善血液学及肾功能指标,是治疗儿童HUS的有效方法。