转化人关节软骨细胞的Ⅱ型胶原表型诱导

目的 用离心管聚集体培养（Aggregate culture)诱导转化人关节细胞的Ⅱ型胶原。方法 将体外长期培养的第30，40，50代转化软骨细胞消化后进行离心管培养，比较细胞在单层培养，离心管聚集体培养，以及在普通培养基，RAI诱导培养基下[2型骨形态发生蛋白（BMP－2）＋抗坏血酸盐（Ascorbate) 胰岛素（insulin)]，Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ型胶原的表达和胞外基质发生情况。结果 在单层培养条件下，转化软骨细胞只表达Ⅰ型胶原，而在BAI诱导培养基及离心管聚集体培养下转化软有细胞表达的Ⅱ型胶原和大量胞外基质。结论 离心管聚集体培养是诱导转化软骨细胞Ⅱ型胶原的有效方式。     

三维立体培养法诱导去分化软骨细胞Ⅱ型胶原的重新表达

目的用藻酸盐三维立体培养法及离心管聚集体诱导培养法促进去分化的永生化软骨细胞第50代(IHACs50)重新表达软骨细胞的Ⅱ型胶原标志性表型。方法利用藻酸盐三维立体培养法以及离心管聚集体诱导培养法分别诱导培养去分化的永生化人关节软骨细胞第50代,然后用Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型胶原的免疫组织化学染色、Ⅱ型胶原的逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测、激光共聚焦显微镜检测、胶原定量检测该永生化软骨细胞的Ⅱ型胶原表型表达情况。结果免疫组织化学染色、激光共聚焦显微镜检测、RT-PCR检测分别提示藻酸盐三维立体培养法和离心管聚集体诱导培养法使去分化永生化人关节软骨细胞的Ⅱ型胶原染色阳性以及621 bp的Ⅱ型胶原mR- NA表达,Western blot和3H-脯氨酸标记SDS-PAGEⅡ型胶原定量检测发现前者促进Ⅱ型胶原分泌较后者多。结论去分化永生化人关节软骨细胞可以经不同的诱导方法而重新表达Ⅱ型胶原表型,藻酸盐三维立体培养法因与软骨细胞的生理环境相似,故促进Ⅱ型胶原重新表达较多。     

组织工程法修复兔肌腱缺损

目的　应用组织工程的原则 ,种植成纤维细胞于人羊膜细胞外基质 (HA ECM)以修复兔的肌腱缺损。方法　从胎兔分离的成纤维细胞用 5 溴脱氧尿嘧啶核苷 (BrdU)标记后种植于人羊膜细胞外基质上。以 1cm长的兔跟腱缺损为修复对象 ,用聚酯聚二氧杂环己烷缝线 (PDS)轴心桥接肌腱缺损 ,外包种植有成纤维细胞的HA·ECM膜。术后进行功能锻炼。结果　成纤维细胞在HA·ECM上生长良好 ,放射状或平行排列。成纤维细胞 HA ECM组能够修复肌腱缺损并且腱化的速度和质量明显优于仅用PDS和HA ECM(无成纤维细胞 )修复组 ,与正常肌腱相似 ,抗张强度达正常腱的 81 8%。BrdU免疫组化显示成纤维细胞在腱化过程中起了重要的作用。术后的功能锻炼促进了修复腱的腱化及抗张强度的提高。结论　成纤维细胞 HA·ECM膜能够有效修复肌腱缺损 ,可作为肌腱修复的另一种选择方法。     

微创侧入路腰椎椎间融合联合后路内固定治疗腰椎间隙感染

目的微创极外侧入路腰椎椎间融合(extreme lateral interbody fusion,XLIF)联合后路经皮椎弓根螺钉内固定治疗腰椎间隙感染的临床疗效分析。方法回顾本院2012年1月至2018年12月施行XLIF联合后路经皮椎弓根螺钉内固定治疗成人化脓性腰椎间隙感染20例23个节段,其中男13例,女7例,年龄18～67岁,平均54.9岁。统计手术时间、出血量、卧床时间、临床症状改善及并发症,测量相关影像学指标以评估矢状位平衡改善、局部后凸畸形纠正、间接减压指标特点以及骨融合情况。结果本组患者均获随访,随访11～56个月,平均18.9个月。单节段平均手术时间(279.6±73.9)min,出血量(241.3±70.1)mL,术后平均卧床(4.4±2.8)d。末次随访腰部VAS评分(0.65±0.49)分、ODI评分(9.30±1.63)%,均显著低于术前的(6.60±1.05)分和(77.65±9.41)%(P0.05)。腰椎前凸角增加6.12°(14.7%)(P0.05),腰椎矢状位平衡得到有效改善;局部后凸Cobb角减少1.99°(-21.6%)(P0.05),后凸畸形得到纠正。术后椎间隙高度、椎间孔高度、椎间孔面积、椎管面积、椎管中央矢状径等间接减压指标较术前均显著提高(P0.05)。植骨均获融合,术后临床恢复良好,无感染复发需再次手术病例。结论对于选择合适的化脓性腰椎间隙感染病例,微创XLIF联合后路经皮椎弓根螺钉内固定术病灶清除彻底、脊柱稳定性好,术后临床症状和影像学指标均显著改善,是一种微创、安全、有效的治疗成人腰椎间隙感染手术方式。     

诱导转化人关节软骨细胞Ⅱ型胶原表型的有效方式

背量：诱导去分化软骨细胞重新表达Ⅱ型胶原主要基于软琼脂悬浮培养法。目的：用离心管聚集体培养(aggregate culture)诱导去分化转化人关节细胞的Ⅱ型胶原。设计：非随机非对照实验研究。地点和对象：实验在第三军医大学西南医院骨科完成，对象为转化人关节软骨细胞，美国Hyclone公司产品。干预：将体外长期培养韵第30，40，50代去分化转化软骨细胞消化后进行离心管培养，比较细胞在单层培养、离心管聚集体培养，以及在普通培养基，BAI诱导培养基下[2型骨形态发生蛋白(BMP-2) 抗坏血酸盐 胰岛素]，Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ型胶原的表达和胞外基质产生情况。主要观察指标：Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ型胶原的免疫组化染色，Ⅱ型胶原的mRNA表达。结果：在单层培养条件下，去分化转化软骨细胞只表达Ⅰ型胶原，而在BAI诱导培养基及离心管聚集体培养下该转化软骨细胞表达丰富的Ⅱ型胶原和大量胞外基质。结论：离心管聚集体培养和BAI诱导培养基是诱导去分化转化软骨细胞Ⅱ型胶原的有效方式。     

同种异体组织工程骨猪皮下植入后IL-2及TNF-α的表达

目的检测同种异体组织工程骨植入小香猪皮下后白细胞介素2（IL-2）及肿瘤坏死因子α（TNF-α）的表达,探讨同种异体骨髓间充质干细胞（MSCs）作为种子细胞构建组织工程骨的可行性。方法猪骨髓间充质干细胞体外诱导分化为成骨细胞,与猪源生物衍生骨材料复合培养,构建组织工程骨,植入15头免疫功能健全的异体小香猪背侧脊柱旁左侧皮下作为实验组,对侧植入单纯的脱钙骨基质（DBM）作为对照,于术后1、2、4、8和12周抽取静脉血,并行双侧局部组织取材,组织块作低温匀浆,ELISA法检测IL-2及TNF-α的水平变化。结果实验组和对照组术后各时间点IL-2及TNF-α水平无统计学差异,IL-2及TNF-α水平在术后第2周开始增高,第2~4周维持高水平,8周后随时间的延长而下降。外周血无明显变化。结论小香猪MSCs和DBM复合构建组织工程骨,植入异体小香猪体内引发微弱的免疫反应,同种异体MSCs可选择作为构建骨组织工程的种子细胞。     

克氏针结合外固定支架治疗桡骨远端不稳定骨折

目的 探讨微创手术治疗桡骨远端不稳定骨折的临床疗效.方法 回顾性分析自2003年5月采用克氏针结合外固定支架治疗的31例33侧桡骨远端不稳定骨折,男性12例,女性19例,年龄42～81岁,平均54.15岁.根据AO/SAIF分型:B1型2侧,B2型2侧,B3型4侧,C1型8侧,C2型12侧,C3型5侧.结果 术后随访6～36个月,平均18个月,均获得骨折愈合且对位良好,患者术后腕关节活动范围明显改善,疗效依照Dienst功能评估标准进行评定:优22侧,良7侧,可4侧,优良率为88%.结论 克氏针有限内固定结合外固定支架治疗桡骨远端不稳定骨折是一种微创手术,操作简单,固定可靠,疗效满意.     

Repair of flexor tendon defects of rabbit with tissue engineering method

OBJECTIVE: To repair rabbit tendon defects with tissue engineering method. METHODS: The third passage of fetal skin fibroblast cells was labeled with 5-bromo-2' deoxyuridine (Brdu) and then seeded on human amnion extracellular matrix (HA-ECM). Using 1 cm-long-Achilles tendon defects as repairing models in the experimental group, tendon defects were core bridged with polydioxanone (PDS) and then capsulated with the complex of fibroblasts-HA-ECM. In the control group I, defective tendons were sutured with PDS following the former procedure and capsulated with HA-ECM (without fibroblasts). In the control group II, only PDS was applied to connect the defective tendons. Gross examination, light microscopy, scanning electronmicroscopy and biomechanical measurement of the repaired tendons were respectively performed at postoperative 1, 2, 3 month as well as immunohistochemical examination. RESULTS: The optimal cell concentration for seeding fibroblasts was 3.5 x 10(6) cells/ml. Cells grew well and radiated or paralleled on HA-ECM. Immunohistochemistry showed that the labeled seed fibroblasts played an important role in tendonization. The results of light microscopy, electron microscopy, and biomechanical assessment suggested that the rate and quality of tendonization in the experimental group was superior to those of the control group I and II. The tensile strength in the experimental group was the greatest, the next was in the control group I, and the worst in the control group II (P<0.05). CONCLUSIONS: HA-ECM is the excellent carrier for fibroblasts. Fibroblasts-HA-ECM complex has the capability to repair tendon defect and to tendonize with rapid rate and good performance three months after operation. Its tensile strength is 81.8% of that of normal tendon.     

PBL法在临床骨科护理见习教学中的应用

在骨科临床护理见习教学中,选取160名本科见习学生,随机分为两组.PBL组进行以问题为基础的学习(PBL),LBL组采用传统的以授课为基础(LBL)的教学法.结果PBL组理论学习成绩显著优于LBL组(P＜0.05),PBL组的问卷调查满意率也高于LBL组,表明在骨科临床护理见习教学中PBL法优于LBL法.     

转化软骨细胞与正常软骨细胞的生物特性比较

目的比较转化人关节软骨细胞与正常软骨细胞之间的生物特性。方法观察两者的细胞形态、细胞的生长曲线、血清依赖性、染色体检查、软琼脂克隆形成试验、裸鼠致瘤性。结果转化软骨细胞更趋向于长梭形。两者的生长曲线比较相似,但转化软骨细胞的饱和密度要明显高于正常软骨细胞。两者都对血清有依赖性,都为二倍体核型,均不能在软琼脂上形成克隆。经6个月观察两者都不能使裸鼠致瘤。结论转化软骨细胞的生长速度要高于正常软骨细胞。转化软骨细胞为良性转化。