乳腺癌内分泌治疗耐药的信号通路研究进展

乳腺癌是目前全球范围内发生率最高的恶性肿瘤之一。内分泌治疗是雌激素受体(estrogen receptor,ER)阳性乳腺癌重要的辅助治疗手段,治疗药物根据针对ER的作用,分为拮抗剂、竞争剂和降解剂。虽然内分泌治疗的疗效显著,可显著提高患者预后生存,但获得性内分泌耐药依然是目前攻克乳腺癌的一大难题。本文就不同信号通路及其抑制剂在乳腺癌内分泌治疗耐药中的作用进行归纳探讨,对靶向信号通路在乳腺癌内分泌治疗耐药中的研究前景进行展望。     

荧光定量PCR检测VEGF-C、CEACAM-1在胃肠肿瘤中的表达及意义

目的 观察血管内皮生长因子C(VEGF-C)和癌胚抗原相关黏附分子1(CEACAM-1)在消化道癌组织和癌旁组织中的表达情况,探讨其表达与肿瘤分期的关系,与术前血清癌胚抗原(CEA)水平一起比较其在肿瘤诊断中的价值.方法采用实时定量聚合酶链反应(PCR)检测53例消化道肿瘤及相应癌旁对照组织中VEGF-C、CEACAM...     

肿瘤相关巨噬细胞模型建立的实验研究

目的建立肿瘤相关巨噬细胞(TAM)的体外分化模型。方法分离健康人外周血单核细胞进行体外培养;经白细胞介素4(IL-4)、白细胞介素13(IL-13)刺激后,利用流式细胞术检测细胞表面标志物CD14、CD204、CD206的表达改变;利用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测单核细胞白细胞介素10(IL-10)分泌量的改变;继而将刺激后的单核细胞与肿瘤细胞共培养,采用Hoechst染色观察其对肿瘤细胞的杀伤情况。结果经IL-4和IL-13刺激后,单核细胞表面CD14的表达率未发生明显变化,而CD204和CD206的表达显著增高,同时IL-10的分泌量也显著增高;与肿瘤细胞共培养结果显示,经IL-4/IL-13刺激的单核细胞对肿瘤细胞的杀伤能力显著下降。结论 IL-4/IL-13可在体外诱导单核细胞呈现TAM的表型和功能,适用于TAM分化模型的建立,该模型可应用于针对TAM的相关研究。     

双质控法在流式细胞分析室内质量控制中的应用

目前国内即刻法主要用于酶联免疫吸附试验（ELISA）检测的质控，但各实验室流式细胞仪（flow cytometry，FCM）的室内质控则由于室内质控品保存期短、价格昂贵等原因，主要使用卫生部临床检验中心的室间质控品进行质控而不使用室内质控品。本实验室采用“双即刻法”对流式细胞仪每周进行1次室内质控品检测以降低随机误差的产生，并给FCM室内质控提供了一种简单的方法。下面以CD4^＋T细胞为例加以说明。     

肿瘤相关巨噬细胞诱导乳腺癌耐药的实验研究

目的探索肿瘤相关巨噬细胞(TAM)在乳腺肿瘤细胞耐药中的作用及其耐药机制。方法通过佛波酯(PMA)、白细胞介素4(IL-4)、白细胞介素13(IL-13)刺激人单核细胞白血病细胞系THP-1,建立TAM模型在体外与乳腺癌细胞共培养,运用流式细胞术(FCM)检测TAM表面分子CD14、CD204;使用噻唑蓝(MTT)比色法检测紫杉醇对乳腺癌细胞系T47D、BT-549的有效杀伤浓度和时间,以及乳腺癌细胞单独培养、乳腺癌细胞与TAM/TAM上清共培养下乳腺癌细胞的杀伤;运用Western blot检测肿瘤细胞的磷酸化信号转导与转录激活因子3(p-STAT3)、磷酸化c-jun氨基末端激酶(p-JNK)信号通路变化。结果 THP-1细胞经PMA、IL-4、IL-13诱导分化为TAM,其细胞表面表达CD14、CD204(表达率分别为31.52%±9.39%、48.21%±8.76%)。TAM/TAM上清与肿瘤细胞共培养均可显著削弱紫杉醇对肿瘤细胞的杀伤(T47D相对存活率由43.52%±9.40%提高至92.68%±2.32%/92.20%±2.10%,BT-549相对存活率由63.08%±2.71%提高至77.96%±2.64%/79.55%±2.35%,P0.05),明显下调其凋亡信号p-JNK(P0.05),同时显著上调p-STAT3(P0.05)。结论成功建立TAM模型,TAM介导乳腺肿瘤细胞耐药,其机制可能与TAM分泌的细胞因子影响肿瘤细胞STAT3、JNK信号分子磷酸化有关。     

精英式医学生科研能力培养模式探索

随着医学改革的不断深化,医学教育越来越趋于精英教育——既具备扎实的临床功底,又具备缜密的临床科研思维。从医学生科研能力培养目标、内容、方式3方面对精英教育科研能力的培养模式做具体阐述。     

应用方法评价决定图评价流式细胞术检测淋巴细胞亚群的性能

实验分析方法的误差可否接受,是评价实验室检测质量的标准依据。质量控制是保证误差在可接受范围的一个重要手段。其目的在于控制检测分析人员的实验误差,以保证检测结果的不精密度和不准确度达到客观评价规定的质量要求。其包括两方面：（1）室内质控（IQC）,旨在检测和控制常规工作的不精密度,     

pcDNA3.1(+)-LYVE-1真核表达质粒的构建及其在COS-7细胞中的表达

目的 构建人淋巴管内皮细胞特异标志物LYVE-1融合基因表达质粒,观察其在COS-7细胞中的表达,为进一步探讨该标志物在肿瘤淋巴转移中的作用提供工具.方法 从本院结肠癌根治术患者术所取组织中的淋巴结抽提总RNA,RT-PCR扩增LYVE-1基因片段,并将其插入pMD19-T Simple Vector进行测序,鉴定正确后构建pcDNA3.1(+)-LYVE-1并转染COS-7细胞,RT-PCR、Western印迹检测目的 蛋白表达,间接免疫荧光检测该基因表达在COS-7细胞上.结果 成功获取了人淋巴管内皮细胞特异标志物LYVE-1全长cDNA,构建了其真核表达载体pcDNA3.1(+)-LYVE-1,转染COS-7细胞后检测出目的 蛋白的表达,并且证明该基因表达在细胞上.结论 成功构建了pcDNA3.1(+)-LYVE-1重组质粒,为进一步研究LYVE-1在肿瘤淋巴管转移中的功能提供了重要的实验材料.     

改良反相高效液相色谱法监测血清中甲氨喋呤浓度及临床应用

目的 建立一种反相高效液相色谱法(RP-HPLC)检测肿瘤患者血清中甲氨喋呤(MTX)浓度的方法.方法 色谱柱为反相柱C18(150.00 mm×4.60 mm),柱温35℃.流动相为0.15 mol/L乙酸钠乙腈=8911(体积比),流速1.5 ml/min.进样量为10μl,检测波长303 nm,用高氯酸沉淀血清标本的蛋白.结果 血清中MTX的检测范围为0.25～100.00 mg/L,决定系数(r2)=0.999,线性关系良好,平均回收率100.95%,日内及日间相对标准差(RSD)均＜5%.结论 RP-HPLC适用于临床对血药浓度的监测.     

血浆HA与外周血M2型单核细胞/M1型单核细胞比值联合检测在乳腺癌中的临床应用价值

目的探讨血浆透明质酸(HA)与外周血M2型单核细胞/M1型单核细胞比值(简称M2/M1比值)联合检测在乳腺癌中的临床应用价值。方法选取98例乳腺癌患者(乳腺癌组)、37例乳腺良性疾病患者(乳腺良性疾病组)和41名体检健康者(正常对照组)。采用化学发光法检测血浆HA和糖类抗原(CA)15-3水平;采用流式细胞术检测外周血M1型(CD14+CD163-CD86+)和M2型(CD14+CD163+CD204+)单核细胞的表达,并计算M2/M1比值。各项指标之间的相关性分析采用Spearman相关分析。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析各项指标的诊断效能。结果乳腺癌组血浆HA、CA15-3水平及M2型单核细胞比例、M2/M1比值均明显高于乳腺良性疾病组及正常对照组(P0.05),而乳腺良性疾病组与正常对照组之间差异均无统计学意义(P0.05)。HA与M2/M1比值、M2型单核细胞比例、M1型单核细胞比例均相关(rs值分别为0.401、0.393、-0.189,P0.05)。M2/M1比值诊断乳腺癌的曲线下面积(AUC)、敏感性和特异性均高于其他指标,且HA与M2/M1比值联合检测可提高对乳腺癌的诊断效能。血浆HA与乳腺癌组织学分化情况有关(P0.05),M2/M1比值与乳腺癌TNM分期、淋巴结转移、组织学分化情况及雌激素受体(ER)均有关(P0.05),CA15-3与乳腺癌临床病理特征均无关(P0.05)。结论 HA与M2/M1比值联合检测对辅助诊断乳腺癌具有一定的临床价值。