抗角蛋白抗体进入活细胞的共聚焦显微镜观察

目的：观察抗角蛋白抗体能否进入活细胞。方法：以鼠单克隆抗体（mAb)IgG作用于培养中的人Tca8113细胞，以黑素瘤细胞和抗HBsAg抗体作用的Tca细胞作为阴性对照。细胞固定后与FITC标记的羊抗鼠IgG结合，用荧光显微镜及共聚焦显微镜，观察细胞的荧光着色。结果：抗角蛋白mAb作用的Tca8133细胞胞浆呈亮绿色，着色较均匀，细胞核未见着色。两种对照均未见着色。结论：抗角蛋白mAb可进入活细胞，并结合于胞浆成分。     

抗角蛋白16单克隆抗体对角质质形成细胞增殖活性的影响

目的 研究抗角蛋白单克隆抗体（mAb）对体外培养的角质形成细胞增殖活性与细胞周期的影响。方法 以无血清培养基体外原代培养角质形成细胞。应用^3H-TdR掺入DNA合成测定法，观察抗角蛋白16mAb(anti-K16 mAb)对角质形成细胞代谢增殖的影响。用流式细胞仪分析anti-K16 mAb作用后角质形成细胞的细胞周期变化。结果 mAb作用后，角质形成细胞样品的epm降低，并呈抗体剂量依赖方式。流式细胞信分析表明，处于S期的细胞比例由27％上升至42．2％，同时处于G1期与G2期的细胞比例分别相应下降。结论 anti-K16 mAb可抑制体外培养的角质形成细胞的增殖活性，且将细胞阻滞于S期，无法进入G2期与M期分裂增殖。     

神经元自发放电混沌节律中的高阶非稳定周期轨道

0　引言　在神经元上记录到的放电多数为不规则模式 ,这类节律是否服从确定性混沌规律一直是研究的热点 .混沌系统生成的奇怪吸引子包含无穷多的非稳定周期轨道 (UPOs) ,它们构成了吸引子的骨架 [1 ] .运用实验数据集的非稳定周期轨道检测 ,可辨别节律中存在的确定性和可预报性 [2 ] .我们分析大鼠坐骨神经结扎损伤模型的起步点的不规则节律 ,运用UPOs分析确认其混沌性 ,进一步分析高阶的非稳定周期轨道 .1　方法1.1　实验性起步点放电的采集　实验选择成年 SD大鼠 (体质量 15 0～ 30 0 g) ,按文献 [3]所述制备坐骨神经慢性结扎损伤动物…     

抗角蛋白16单克隆抗体对角质形成细胞增殖活性的影响

目的研究抗角蛋白单克隆抗体(mAb)对体外培养的角质形成细胞增殖活性与细胞周期的影响.方法以无血清培养基体外原代培养角质形成细胞.应用3H-TdR掺入DNA合成测定法,观察抗角蛋白16mAb(anti-K16mAb)对角质形成细胞代谢增殖的影响.用流式细胞仪分析anti-K16mAb作用后角质形成细胞的细胞周期变化.结果mAb作用后,角质形成细胞样品的cpm降低,并呈抗体剂量依赖方式.流式细胞仪分析表明,处于S期的细胞比例由27%上升至42.2%,同时处于G1期与G2期的细胞比例分别相应下降.结论anti-K16mAb可抑制体外培养的角质形成细胞的增殖活性,且将细胞阻滞于S期,无法进入G2期与M期分裂增殖.     

小剂量藜芦碱诱发大鼠脑海马CA1区锥体神经元异常放电癫痫脑片模型的特征

背景阵发性去极化漂移是癫痫活动的脑神经元的细胞学特征,过去认为其产生与突触传递异常有关.近年来,阵发性去极化漂移的内因机制得到进一步关注和重视.;目的观察小剂量藜芦碱诱发大鼠脑海马CA1区锥体神经元产生癫痫样活动的特征,探讨其可能的离子机制.设计探索性观察实验.单位解放军第四军医大学的神经科学研究所.材料实验于2002-10/2004-10在解放军第四军医大学神经科学研究所完成.选择出生后14 d的健康SD大鼠40只,所需试剂购自天津市医药公司和Sigma公司.干预大鼠经腹腔麻醉后取脑切片,通过0.5 μmol/L藜芦碱诱发癫痫样活动.在6张脑片上诱发产生阵发性去极化飘移样放电后,灌流液中加入80 nmol/L河豚毒素,在另外5张脑片上,用抗癫痫药物苯妥英(5μmol/L)替换河豚毒素,观察在不同药物作用下细胞电生理特性的变化.主要观察指标①细胞放电模式.②电压钳模式下通过细胞Ⅰ-Ⅴ反应计算河豚毒素敏感性持续性钠电流的大小.结果小剂量藜芦碱细胞外灌流后,随着神经元膜的超极化,大鼠CA1区锥体细胞表现出固定模式的阵发性去极化漂移串样放电,这种电活动可被小剂量(80 nmol/L)河豚毒素或(5 μmol/L)苯妥英所阻断.电压钳模式下测量阈下河豚毒素敏感性钠电流,在膜电位-55,-60,-65mV范围内,癫痫放电神经元测值明显增大,表明小剂量藜芦碱可增强持续性钠电流,并具有电压依赖性.结论小剂量藜芦碱可在大鼠脑海马CA1区锥体神经元上诱发出阵发性去极化漂移样癫痫活动.小剂量河豚毒素或苯妥英可阻断这种癫痫活动,其离子机制可能与持续性钠电流的增强有关.     

大鼠背根节内两类兴奋性神经元的放电特征

目的:观察大鼠背根节(DRG)神经元兴奋性分类的放电特征.方法:在新鲜分散的中、小型大鼠背根节神经元运用全细胞膜片钳技术,观察给予胞内去极化,超极化电流刺激引起细胞放电的特征.结果:根据大鼠背根节神经元的放电特征可将它们区分为两类兴奋性.1类:神经元兴奋性与刺激强度相关,逐渐增强的去极化刺激可引发频率由低到高的动作电位.一般于超极化刺激后不产生反跳动作电位.动作电位的幅值一致,符合"全或无"定律.2类:神经元的兴奋性与去极化刺激强度关系不明显,神经元放电频率比较稳定,不随刺激强度的增强而增加,放电前后有规律的膜电位振荡.于较弱的超极化刺激后可产生反跳动作电位.动作电位的幅值不一致.结论:大鼠DRG两类兴奋性神经元各具不同的放电特征.     

基因工程技术制备的人源性抗Mr 48×103角蛋白抗体Fab片段的纯化与活性鉴定

目的用基因工程技术制备人源性抗角蛋白抗体Fab片段,并对其纯度、抗原结合活性及特异性等进行鉴定. 方法将从半合成噬菌体抗体库中成功地筛选到的特异表达抗角蛋白Fab片段的阳性克隆转化大肠杆菌,IPTG诱导表达,产物经金属鏊合层析纯化,并用ELISA鉴定抗原结合活性和特异性、SDS-PAGE鉴定纯度和蛋白印迹检测抗角蛋白抗体Fab片段识别的抗原组分. 结果可溶性表达的抗角蛋白抗体Fab片段经金属鏊合层析可有效地纯化,蛋白印迹明确纯化产物为人Fab片段.所纯化的Fab片段在非还原SDS-PAGE中形成Mr 50×103单一条带,在还原SDS-PAGE中可见Mr 23×103,Mr 25×103两条带. ELISA和Western blot证实该片段具备良好的抗原结合活性和抗原特异性. 结论成功表达并鉴定了人源性抗Mr 48×103角蛋白的Fab可溶性片段,为人源性抗角蛋白抗体工程化、进一步研究该抗体的生物活性并提高其临床应用价值奠定了良好的基础.     

神经元阵发放电序列的非稳定周期轨道分析

大鼠背根节(dorsal root ganglion,DRG)神经元在慢性压迫损伤后可自发产生大量不规则的阵发放电.为探讨此类放电序列的动力学机制,我们以单纤维引导的方法记录了受损神经元阵发放电的动作电位间期(interspike interval,ISI)序列,并计算得到放电的事件间期(interevent interval,IEI)序列.然后,运用一种从时间序列中识别非稳定周期轨道(unstable periodic orbits,UPOs)的新方法对阵发放电IEI序列进行分析.从得到的10例数据中无一例外地检测到了具有高度统计显著性的非稳定周期1轨道.在此基础上,进一步对阵发放电的非稳定周期轨道分级进行了初步研究,检测到了显著的周期2与周期3轨道.结果表明:受损DRG神经元的不规则阵发放电节律具有显著地确定性动力学机制.     

天然抗角蛋白自身抗体与银屑病关系的实验研究

目的　探讨天然抗角蛋白自身抗体 (antikeratinautoantibody ,AKautoAb)与银屑病的关系及AKautoAb在银屑病中的作用和意义。方法　应用自银屑病患者血清和鳞屑洗脱液内纯化的AKautoAb ,在体外观察其对培养角质形成细胞DNA合成及细胞代谢的影响。结果　银屑病患者血清内可纯化出AKautoAb ,但其纯化量明显低于正常人 ,鳞屑洗脱液中亦可纯化出AKautoAb ;纯化的AKautoAb在体外能抑制角质形成细胞的代谢活性 (P <0 .0 5 )。结论　存在于银屑病患者血清和鳞屑内的AKautoAb可能是一种具有保护作用的继发性反应。     

酪氨酸蛋白激酶抑制剂对正常人角质形成细胞增殖的影响

目的　观察酪氨酸蛋白激酶抑制剂 genistein对体外培养的正常人角质形成细胞增殖代谢的影响 .方法　将不同浓度的 genistein(GST)作用于体外培养的正常人角质形成细胞 ,测定 MTT值及 3 H- Td R参入量 ,并用流式细胞仪测定细胞周期的变化 .结果　以对照组 MTT和 A490 nm值作为百分之百 ,不同浓度的 GST(10 - 7,10 - 6,10 - 5m ol· L- 1 )的 MTT和 A490 nm值变化率分别为 (90 .8± 5 .2 ) % ,(76 .5± 4.8) %和(6 4.3± 5 .7) % (P<0 .0 1) ,cpm值的变化率分别为 (87.1±4.9) % ,(73.4± 5 .3) %和 (5 7.6± 5 .6 ) % (P<0 .0 1) .表明不同浓度的 GST可明显抑制角质形成细胞的代谢与 DNA合成 ,并存在着剂量效应 .与对照组相比 ,10 - 5mol· L- 1的GST作用 2 4h可使体外培养的正常人角质形成细胞 G1 期细胞比例明显增加 (4 0 .3% vs 71.6 % ,P<0 .0 1) ,而 G2 +S期细胞比例则明显下降 (5 9.7% vs2 8.4% ,P<0 .0 1) .结论　GST在体外能明显抑制体外培养的正常人角质形成细胞的增殖与代谢 .