细粒棘球蚴2HSP70重组质粒的构建、原核表达、纯化和初步鉴定

目的构建细粒棘球蚴（Echinococcus granulosus，EG）2热休克蛋白70（heat shock protein，2HSPT0）表达重组质粒，原核表达及纯化重组蛋白，并对重组蛋白进行免疫学特性的初步鉴定。方法从EG2HSP70／pGEM-T／JM109质粒中分离EG2HSP70目的基因，将此片段重组入表达载体pGEX-6P-1后转化入大肠杆菌BL21，鉴定后以IPTG诱导表达，通过SDS-PAGE检测其表达水平，用亲和层析纯化并分离重组蛋白，利用Western blot来鉴定重组蛋白的免疫学特性。结果酶切鉴定及测序分析表明，成功构建细粒棘球蚴pGEX-6P-1／EG2HSP70重组质粒；IPTG诱导表达后，融合蛋白占菌体总蛋白的39％，占裂解物上清总蛋白的70．4%，表明重组的EG2HSP70基因能在BL21中高效表达，表达的蛋白大部分以可溶性状态存在。亲和层析法纯化重组蛋白EG2HSP70，通过Western blot证实该重组蛋白能被细粒棘球蚴囊壁免疫兔血清识别。结论成功构建细粒棘球蚴中国大陆株pGEX-6P-1／EG2HSP70重组质粒，重组的EG2HSP70能够高效表达，表达的EG2HSP70具有免疫学活性。     

occludin蛋白与人乳腺癌细胞恶性增殖的相关性研究

目的: 探讨occludin蛋白的表达与人乳腺癌细胞株MCF-7、MDA-MB-231、SKBR-3恶性增殖之间的关系。方法: 四甲基偶氮唑蓝法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期,FN蛋白黏附实验检测细胞黏附力,Transwell检测细胞迁移,RT-PCR检测occludin mRNA的表达,Western blot、细胞免疫化学技术检测occludin蛋白表达。结果: MCF-7细胞的增殖速度、S期所占比例、细胞黏附以及细胞迁移均小于MDA-MB-231和SKBR-3细胞(P < 0.05~P < 0.01),而MCF-7细胞中occludin mRNA及蛋白表达水平均高于MDA-MB-231和SKBR-3细胞(P < 0.01)。结论: occludin表达与人乳腺癌细胞恶性增殖、黏附及迁移呈一定的相关性。     

乙型肝炎患者血清乙型肝炎病毒-DNA与常用血清标志物的相关性分析

目的: 评估乙型肝炎(乙肝)患者血清乙肝病毒DNA(HBV-DNA)载量与血清免疫和生化标志物之间的关系。方法: 收集214例乙肝患者血清, 分别用荧光定量PCR法、化学发光法和速率法检测血清中的HBV-DNA、乙肝病毒表面抗原(HBsAg)、乙肝病毒e抗原(HBeAg)和丙氨酸氨基转移酶(ALT), 分析各标志物之间的关系。结果: 214例中, HBV-DNA阳性率为57.48%;HBeAg阳性率为28.04%。HBV-DNA载量与HBsAg和ALT水平均无相关关系(P>0.05), 但与HBeAg水平密切相关(P<0.01), HBV-DNA阳性组的HBeAg和ALT水平均明显高于HBV-DNA阴性组(P<0.01)。结论: HBV-DNA载量与HBeAg水平呈正相关关系, 与HBsAg和ALT水平无相关性, HBsAg水平作为HBV-DNA的替代方法仍需进一步验证。     

细粒棘球蚴重组延伸因子-1抗原的免疫原性研究

目的对细粒棘球蚴重组抗原EF-1的免疫原性进行初步鉴定,为重组疫苗研制的后续工作提供依据.方法用重组目的蛋白及融合表达蛋白作为抗原,分别免疫昆明小鼠获得抗血清,通过蛋白免疫印迹试验（Western blot）和酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清中产生的特异性抗体成分及其程度.结果重组目的蛋白EF-1和融合蛋白GST/EF-1免疫小鼠后均诱发产生了特异性抗体,实验组血清与对照组血清抗体含量差异有统计学意义（P＜0.05）;目的蛋白和融合蛋白免疫两组小鼠所得血清的抗体含量差异没有统计学意义.结论目的蛋白EF-1和融合蛋白GST/EF-1都具有一定的免疫原性.     

甜菜碱体外抑菌活性的研究

目的 研究甜菜碱对临床病原菌的体外抑菌活性.方法 采用试管二倍稀释法进行体外抑菌试验,测定甜菜碱对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌和白色念珠菌的最小抑菌浓度.结果 甜菜碱对4种病原菌标准菌株的最小抑菌浓度（MIC）为大肠杆菌的MIC 6.25 mg/ml、铜绿假单胞菌的MIC 3.125 mg/ml、金黄色葡萄球菌的MIC 6.25 mg/ml、白色念珠菌的MIC 25 mg/ml.结论 甜菜碱对4种病原菌的标准菌株都有明显的抑菌作用,尤其对铜绿假单胞菌的MIC值最低.     

细粒棘球蚴中国大陆株线粒体苹果酸脱氢酶基因的克隆和序列分析

目的 获得细粒棘球蚴线粒体苹果酸脱氢酶（mMDH）基因片段，进行序列分析，为研究包虫病疫苗候选基因奠定基础。方法 从包虫病患者体内获取细粒棘球蚴原头蚴提取总RNA，根据国外细粒棘球蚴mMDH（线粒体苹果酸脱氢酶）基因的已知序列设计一对引物，采用RT—PCR技术扩增出细粒棘球蚴中国大陆侏mMDH基因。将PCR产物纯化后，亚克隆到pGEM—T载体并构建成基因工程菌株后进行序列测定和分析。结果 用RT—PCR成功扩增出细粒棘球蚴中囤大陆株mMDH基因，测序表明该基因开放阅读框为1017bp，与已发表基因核苷酸序列相比，同源性为99％，理论蛋白编码的氩基酸序列同源性为99％。结论 在国内首次获得细粒棘球蚴线粒体苹果酸脱氢酶（mMDH）基囚序列，为进一步构建重组表达基因工程菌株打下良好的基础。     

质量管理工作之体会

“质量是医院的生命”，这是有识之士的共识。新余市人民医院是一所地市级三级综合性医院，医院领导班子高度重视质量及质量管理，专门成立质控科，采取一系列政策和措施，旨在以质量为保证，以质量求发展并取得可喜成绩。现就近几年来质量管理初见成效谈谈个人体会。     

结核分枝杆菌CFP10诊断抗原基因的克隆及序列特性分析

目的扩增结核分枝杆菌培养滤液蛋白10基因（CFP10）,并将其克隆至质粒pGEMT中进行核苷酸序列特性分析,为研究结核病候选诊断抗原基因奠定基础。方法以结核菌标准菌株H37Rv为模板,通过PCR技术扩增出结核分枝杆菌CFP10抗原基因,将其重组到pGEM-T载体后进行酶切鉴定及序列测定和生物信息学分析。结果成功扩增出结核分枝杆菌CFP10抗原基因,测序表明该片段开放阅读框由303bp组成,与已发表基因核苷酸序列相比,同源性为100%,推导编码氨基酸序列同源性为100%。结论成功克隆CFP10基因,经DNA测序证实,该片段阅读框完整,为其原核表达及相关研究奠定了基础。     

三氧化二砷对HL-60细胞端粒酶hTERT启动子活性的影响

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)抑制HL-60细胞端粒酶hTERT表达的分子机制。方法:构建含有hTERT启动子不同片段的荧光素酶基因表达载体,转染HL-60细胞,分别在有无As2O3作用下检测各组荧光素酶活性变化,间接反映As2O3对hTERT启动子不同片段活性的影响。结果:在As2O3作用下,含有hTERT启动子不同片段的荧光素酶基因表达载体的荧光素酶活性均下降(P0.05～P0.01)。结论:As2O3对HL-60细胞端粒酶hTERT启动子活性具有抑制作用。