人脐带间充质干细胞分离培养及鉴定的相关研究

目的：原代培养并鉴定人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells，hUCMSCs)，对hUCMSCs的生物学性状、表面抗原、多向分化潜能等进行研究，并初步检测其内源性Hedgehog(Hh)信号通路主要因子的RNA水平。方法：取足月健康剖宫产胎儿脐带，提取hUCMSCs，贴壁培养。绘制生长曲线，检测细胞周期。进行体外成骨、成脂及成软骨诱导。流式细胞仪检测细胞表面标志物。Real-time PCR检测原代细胞内源性Hh信号通路主要因子的mRNA水平。结果：脐带剪碎经胶原酶消化后24 h细胞即可贴壁，7 d可生长达培养皿底面积85%融合。 P3代hUCMSCs的生长曲线呈上升趋势，传代后第3 d进入倍数生长期。并具有成骨分化、成脂分化及成软骨分化的能力。流式细胞仪检测99.04％的细胞高表达整合素分子CD29，98.80％的细胞高表达粘附分子CD44，85.09％的细胞高表达内皮糖蛋白分子CD105，只有0.19％的细胞表达造血干细胞标记物CD45，0.58%的细胞表达血管内皮分子CD34。脐带来源的间充质干细胞内能检测到Hh信号通路中主要因子的内源性表达，其中Shh水平相对较高。结论：原代培养的hUCMSCs为进一步探索Hh信号通路在颅颌骨缺损修复中的作用机制提供可靠的细胞来源。