小干扰RNA沉默YAP基因对人牙周膜干细胞增殖凋亡的影响

目的 本研究通过小干扰RNA（siRNA）沉默人牙周膜干细胞（hPDLSCs）YAP基因,观察YAP基因沉默后对细胞增殖凋亡的影响。方法 将化学合成siRNA序列以脂质体LipofectamineTM 2000介导瞬时转染hPDLSCs,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、Western blot检测转染后YAP表达水平,细胞增殖活性检测试剂盒（CCK-8）检测siRNA在体外对hPDLSCs增殖能力的影响,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡率的变化。采用SPSS 19.0软件对数据进行处理,设P<0.05为差异有统计学意义。结果 在转染48 h后hPDLSCs的YAP mRNA和蛋白水平明显降低（P<0.001）,YAP蛋白表达水平在细胞被转染48、72 h后无显著差异,表明siRNA可以持续有效地抑制YAP的表达;CCK-8增殖活性实验结果显示细胞增殖活性受到抑制;沉默YAP基因后细胞早期及晚期凋亡率均增加。细胞周期检测结果显示细胞周期发生改变,G1及S期细胞比例增多（P<0.01）,G2期细胞比例明显减少（P<0.05）。结论 siRNA沉默YAP基因后hPDLSCs增殖活性降低,细胞凋亡率明显增加,细胞的周期分布发生改变;YAP基因可以调控hPDLSCs的增殖与凋亡。     

子宫内膜癌SREBP1表达及SREBP1 shRNA对内膜癌细胞生物学行为的影响

目的:探讨胆固醇调节元件结合蛋白质1(SREBP1)在子宫内膜癌中的表达情况及SREBP1 shRNA对子宫内膜癌细胞AN3-CA生物学行为的影响。方法:采用免疫组织化学染色、实时定量逆转录聚合酶链反应、蛋白免疫印迹、Transwell体外细胞侵袭试验等方法分析SREBP1在子宫内膜组织中的表达及其对细胞生物学行为的影响。结果:SREBP1在正常子宫内膜组织中低表达,在子宫内膜癌组织中高表达,且免疫组织化学染色H-Score评分在子宫内膜癌高分化组和中、低分化组之间具有统计学差异(P<0.001);SREBP1 shRNA可减慢子宫内膜癌细胞AN3-CA的增殖速度并降低AN3-CA细胞的侵袭能力,均具有统计学差异(P<0.001)。结论:SREBP1的表达与活化参与子宫内膜癌的进展;SREBP1 shRNA可降低子宫内膜癌细胞的增殖和侵袭能力,表明内源性SREBP1参与子宫内膜癌的进展与转移,为子宫内膜癌潜在的分子靶向治疗提供了一定的理论基础。     

干扰TAZ基因对舌鳞癌细胞CAL27增殖凋亡的影响及其机制

目的 探讨干扰TAZ基因后对舌鳞癌细胞CAL27增殖和凋亡的影响以及可能的分子调控机制。 方法 实验分为干扰组和对照组,将稳定干扰TAZ基因的慢病毒载体转染至舌鳞癌细胞CAL27中作为干扰组,并以非特异性序列转染CAL27细胞作为对照组。利用实时荧光定量PCR(RT-PCR)及Western blotting检测干扰效率,CCK-8细胞活力实验及EdU染色法检测转染后细胞增殖能力的改变,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡情况,Western blotting检测与周期及凋亡相关蛋白的表达情况。 结果 干扰TAZ基因后,RT-PCR和Western blotting检测结果显示,TAZ mRNA和蛋白表达水平明显降低;CCK-8细胞增殖活力检测及EdU染色法显示细胞增殖能力降低;细胞早期凋亡和晚期凋亡比例均增多; G0/G1期细胞比例增多,而G2/M期细胞减少。同时,干扰TAZ基因后,周期相关蛋白CYCLIN D1、CDK4和CDK6等表达水平降低;而凋亡相关蛋白Bax、cleaved Caspase9表达水平均升高,Bcl-2表达水平降低。 结论 干扰TAZ基因可以通过调控细胞周期和凋亡相关蛋白的表达,来影响舌鳞癌细胞的增殖和凋亡。