血管生成相关因子在口腔扁平苔藓中的表达

目的 研究血管生成相关因子血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)、血管细胞黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)在口腔扁平苔藓患者血清和组织中的表达情况.方法 30例扁平苔藓患者纳入扁平苔藓组,15例健康志愿者作为对照(正常组)用于血清收集,收集扁平苔藓组织患者活检组织30例及外科手术切除的多余正常口腔黏膜组织15例,应用免疫组织化学技术分析VEGF、ICAM-1、VCAM-1分别在扁平苔藓病损局部组织及正常黏膜组织中的表达情况.结果 ELISA结果显示VEGF在2组血清中表达差异无统计学意义(t=1.837,P=0.074),而ICAM-1(t=2.730,P=0.009)、VCAM-1(t=2.167,P=0.035)在扁平苔藓组血清中的表达明显高于正常组.免疫组织化学染色结果显示VEGF、ICAM-1、VCAM-1在口腔黏膜正常上皮中呈现少量阳性表达或阴性表达,而在扁平苔藓组织中VEGF(x2=33.632,P<0.05)、ICAM-1(x2=45.000,P<0.05)、VCAM-1(x2=37.286,P<0.05)表达较正常黏膜组织均出现上调趋势.结论 在扁平苔藓患者的血清和病变组织中,血管生成相关因子表达上调.     

基因突变对RUNX2蛋白亚细胞定位的影响

目的拟建立包含基因突变位点的真核表达载体,通过细胞转染了解RUNX2突变体亚细胞定位的改变。方法从患者全血中提取总RNA,通过反转录酶-聚合酶链反应获得目的片段,定向克隆获得包含基因突变位点及野生型位点的pEGFP-C1-RUNX2真核表达载体,通过瞬时转染NIH3T3成纤维细胞,显微镜下观察突变蛋白的亚细胞定位变化。结果成功构建包含突变位点及野生位点的真核表达载体pEGFP-C1-RUNX2,转染细胞24 h后,在荧光显微镜下观察转染细胞内的荧光蛋白表达情况,转染野生型RUNX2基因的细胞仅在胞核内表达绿色荧光,胞浆内无绿色荧光表达;分别引入突变位点c.674 G〉A及c.673 C〉T的表达载体转染的两组细胞,在胞浆胞核内均表达绿色荧光。结论不同的突变位点可以造成RUNX2蛋白亚细胞定位的改变,蛋白在核内累计表达量不足可能是造成单倍体不足的原因之一。     

聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳和琼脂糖水平电泳检测基因型的比较研究

目的比较聚丙烯酰胺凝胶电泳（polyacrylamide gel electrophoresis,PAGE）垂直板法-银染和琼脂糖凝胶水平电泳应用于环氧合酶-2（cyclooxygenase-2,COX-2）-1195GA基因型检测的效果。方法由两名实验人员分别应用PAGE垂直板法-银染和琼脂糖水平电泳两种方法读取100例患者的COX-2-1195GA基因型,比较结果一致性以及两种方法的特点。结果两种方法检测结果符合率100%。PAGE垂直板法-银染灵敏度较高,但技术难度较大,操作时间长,成本高,图片较难编辑;琼脂糖凝胶水平电泳可分离相差50 bp的片段,且操作简单,节省时间,图片易编辑。结论在酶切片段易于分离检测时,琼脂糖凝胶水平电泳可推广应用于聚合酶链反应—限制性片段长度多态性分析的基因型检测。     

颅骨锁骨发育不良患者牙齿矿化不全超微结构的研究

目的:研究成骨细胞特异性转录因子(runt-related gene 2,runx 2)基因突变导致的颅骨锁骨发育不良(cleidocranial dysplasia,CCD)患牙超微结构以及Ca、P元素含量的改变.方法:收集临床CCD患者的滞留乳牙以及萌出下恒切牙,制备牙齿磨片,通过扫描电镜研究CCD患牙超微结构的改变,通过色散能分光计对牙釉质和牙本质中Ca、P元素含量进行能谱分析.结果:与正常牙齿相比,CCD患牙发育不良:釉丛和釉板结构增多,釉牙本质界平直,牙本质小管分布不均,牙骨质薄;牙釉质和牙本质中Ca、P含量降低.结论:runx 2基因突变对CCD患者牙齿构成及其组成元素均有很大的影响,表明runx 2基因对于牙齿正常发育有重要作用.     

颅骨锁骨发育不良综合征患者的RUNX2基因突变检测分析

目的:检测鉴定我国一个颅骨锁骨发育不良综合征(CCD)家系RUNX2基因突变情况.方法:采用先证者查证法,对家系各成员进行全身健康状况及口腔专科检查,进行CCD诊断;抽取先证者及其父母外周静脉血,提取基因组DNA, PCR扩增RUNX2基因并测序,BLAST同源分析,同时检测100名健康人的相同位点,排除多态位点的可能.结果:先证者具有典型的CCD临床特征,其母亲亦为CCD患者,父亲则无相应临床表现;将先证者的RUNX2基因测序结果进行Blastn比较分析,在Exon 2上发现了一个A→G突变;实际测序图谱显示双峰结构(G、A),对其CCD母亲的基因检测表明,此突变来自母系染色体该基因478位点的基因突变;密码子AAC→GAC可能部分引起第160位氨基酸的改变,天冬酰胺(Asn,N)变成天冬氨酸(Asp,D);该突变型为478 A>G,N160D.家系健康成员同一位点显示G的单峰,即与野生型序列相同.结论:检测到的478 A＞G,N160D为新的基因突变位点,拓展了国内CCD基因层次的研究领域,为国内外CCD致病基因的突变位点数据库增添了新的资料.     

携带RUNX2基因突变的人牙囊细胞的分离培养及鉴定

目的：研究携带RUNX2基因突变位点的人牙囊细胞的分离、鉴定及意义。方法：收集颅骨锁骨发育不良（cleidocranial dysplasia,CCD）患者,鉴定其致病基因RUNX2的突变位点,通过离体培养CCD患者的未萌牙牙囊细胞,检测其携带的基因突变位点,鉴定RUNX2＋/m牙囊细胞。结果：全血基因组测序结果发现,患者RUNX2基因第2外显子插入TG突变,该突变型为c.309_310insTG,成功分离培养及鉴定RUNX2＋/m牙囊细胞,并发现RUNX2基因突变减少了牙囊细胞中此蛋白的表达水平。结论：成功分离培养携带RUNX2基因突变位点的人牙囊细胞,为进一步研究RUNX2基因在牙囊及牙齿萌出中的作用提供实验模型。     

颅骨锁骨发育不全患者RUNX2基因突变检测——附1例报告

目的：研究颅骨锁骨发育不全（CCD）患者的RUNX2基因突变。方法：对1例患者进行全身健康状况及口腔专科检查,明确诊断为颅骨锁骨发育不全。提取患者全血基因组DNA,PCR扩增RUNX2基因,BLAST同源序列分析,检测基因突变位点。体外分离培养患者来源的牙囊细胞及正常对照牙囊细胞,cDNA测序验证基因突变。结果：患者RUNX2基因第2外显子插入TG突变,牙囊细胞cDNA测序结果相同,该突变型为c．309_310insTG。结论：成功发现了RUNX2基因新致病突变,补充了国内外CCD致病基因的突变位点数据库。     

人牙周膜细胞不同分离培养方法的比较研究

目的探讨组织块法、酶解组织块法和酶消化法体外分离培养人牙周膜细胞的优缺点。方法分别应用组织块法、酶解组织块法及酶消化法进行人牙周膜细胞分离培养,鉴定细胞来源,利用倒置显微镜观察细胞生长状况。结果应用组织块法从24块人牙周膜组织中成功分离培养出人牙周膜细胞,成功率96%（24/25）,细胞生长状态良好;应用酶解组织块法成功率80%（16/20）;应用酶消化法成功率75%（12/16）。结论组织块法原代培养人牙周膜细胞方法简单且成功率较高。     

白细胞介素-4基因-590C／T多态性与慢性牙周炎的相关性研究

目的研究白细胞介素-4（interleukin-4,IL-4）基因-590C／T多态性与慢性牙周炎易感性的关系。方法采用病例对照试验设计,聚合酶链反应一限制性内切酶片段长度多态性基因分析方法,比较104例慢性牙周炎患者（慢性牙周炎组）和106例牙周健康者（健康对照组）IL-4基因-590位点基因型和等位基因分布特点。结果IL-4基因-590位点C、T等位基因频率（X2=0．771,P=0．380）及基因型频率（X2=1．904,P=0．386）在两组间分布差异无统计学意义。结论IL-4基因-590位点的多态性与汉族人群慢性牙周炎的易感性无明显相关性。     

维生素D受体TaqⅠ位点单核苷酸多态性与重度慢性牙周炎易感性的相关性

目的 探讨维生素D受体(VDR)基因Taq Ⅰ位点单核苷酸多态性(SNP)与汉族人群重度慢性牙周炎(CP)易感性的相关关系.方法 收集汉族重度慢性牙周炎患者(观察组)156例及150例牙周健康对照者的颊黏膜拭子,以Chelex-100法提取基因组DNA,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFIP)方法测定Taq Ⅰ 基因型,并分析组间基因型和等位基因频率的差异.结果 观察组和对照组基因型及等位基因频率分布差异均有统计学意义(P分别为0.0097和0.016),TT vs (Tt+tt)OR=2.63,95%CI为1.28～5.42,T vs tOR=2.27,95% CI 为1.15～4.50.结论 VDR基因Taq Ⅰ位点单核苷酸多态性与汉族人群重度慢性牙周炎易感性可能存在一定的联系.