粘液放线菌生物膜结构中细菌和胞外多糖关系的初步研究

目的探讨粘液放线菌形成的单菌种生物膜的结构以及胞外多糖在生物膜中的分布。方法采用微生物厌氧培养技术将粘液放线菌在玻璃片上形成24h单菌种生物膜,用荧光染料Fluorescein、BODIPY和Calcofluor进行荧光染色,激光共聚焦扫描显微镜观察其形成的生物膜结构和其中胞外多糖的分布。结果玻璃表面粘液放线菌粘附形成致密的生物膜,大量微菌落和沟壑间隙是其所形成生物膜的特征。临近粘附表面的生物膜基底部位细菌密度较低,而中部则较致密。生物膜中胞外多糖分布与菌落中的细菌分布一致。结论粘液放线菌依靠其合成的胞外多糖聚集形成了生物膜。     

L型钙离子通道Cav 1.2在大鼠根尖牙乳头干细胞成牙向分化中的作用

目的 探讨L型钙离子通道Cav 1.2在大鼠根尖牙乳头干细胞向成牙本质细胞样细胞分化过程中的作用。方法 利用酶消化法分离大鼠根尖牙乳头干细胞,体外扩增,结晶紫染色检测牙乳头干细胞的克隆形成率;利用慢病毒转染系统介导pLVX-shRNA2质粒在牙乳头干细胞中表达,抑制牙乳头干细胞中Cav 1.2基因的表达。荧光显微镜下观察转染牙乳头干细胞绿色荧光蛋白的表达,RT-PCR及Western印迹法检测牙乳头干细胞中Cav 1.2基因沉默效率;矿化诱导体系下诱导Cav 1.2基因沉默牙乳头干细胞向成牙本质细胞样细胞分化,应用茜素红染色检测Cav 1.2对牙乳头干细胞成牙向分化的影响。结果 牙乳头干细胞的克隆形成能力为每200个细胞形成6~10个克隆;PCR及Western印迹法结果显示牙乳头干细胞Cav 1.2基因沉默效率达到70%;在牙乳头干细胞成牙向诱导第10天时,与对照组Luc-Cav 1.2相比,Cav 1.2基因沉默组成牙相关基因DSPP表达水平明显下降,同样茜素红染色结果显示Cav 1.2基因沉默牙乳头干细胞钙化结节形成也受到明显抑制。结论 L型钙离子通道Cav 1.2在大鼠根尖牙乳头干细胞向成牙本质细胞样细胞分化的过程中发挥着非常重要的作用。【摘要】目的 利用慢病毒转染系统构建Cav 1.2基因沉默的大鼠根尖牙乳头干细胞(stem cells from apical papilla, SCAPs),探讨Cav 1.2在大鼠牙乳头干细胞成牙向分化中的作用。方法 取3周龄SD大鼠,采用酶消化法获取大鼠根尖牙乳头干细胞,取第二代大鼠根尖牙乳头干细胞进行克隆平板实验鉴定其增值能力;采用慢病毒转染的方法构建Cav 1.2基因沉默Sh-Cav 1.2牙乳头干细胞及对照组Luc-Cav 1.2牙乳头干细胞, RT-PCR及Western印迹法鉴定其转染效率,并诱导其向成牙本质细胞样细胞分化;在成牙向诱导分化第10天,RT-PCR及茜素红S染色观察Cav 1.2对大鼠根尖牙乳头干细胞成牙向分化的影响。结果 分离获得较强增殖能力的大鼠牙乳头干细胞,其中每200个细胞可形成6~10个克隆;荧光倒置显微镜下转染48h,Sh-Cav 1.2及Luc-Cav 1.2均呈现绿色荧光,转染效率均达到90%;在两组细胞成牙向诱导过程中,实验组Sh-Cav 1.2牙乳头干细胞成牙相关基因DSPP的表达及钙化结节的形成均明显低于对照组Luc-Cav 1.2。结论 L型钙离子通道Cav 1.2对大鼠根尖牙乳头干细胞成牙向分化有重要作用。     

生物膜细菌耐药性机制的研究近况

细菌形成生物膜，对抗生素产生较强耐药性，是许多慢性感染性疾病难以治愈的重要原因。生物膜细菌耐药性的产生，主要是由于形成抗生素渗透障碍；生物膜细菌生长速度减慢；及其独特的生物学特征所致，最终引起其对药物的敏感性降低，或产生抵抗性。     

浅谈口腔住院医师规范化培训

住院医师规范化培训是医学生毕业后教育的重要组成部分之一,也是我国住院医师培养模式转变的重要举措之一。本文以牙体牙髓专业为例,对规范化培训的模式、考核制度等进行了有益的探索。重点介绍我科住院医师规范化培训,分阶段逐渐形成了一套理论结合实践的渐进式的培训模式,并通过考核制度达到规范化培训的目标。     

下颌第二磨牙C形根管发生率的研究

目的：研究下颌第二磨牙C形根管系统的发生率。方法：选择年满18周岁本国患者的下颌第二磨牙为研究对象,通过锥形束CT（cone beam CT,CBCT）扫描,然后在矢状面、冠状面、横断面等多层面重建三维数据图像。根据C形根管系统的解剖学特征判断其发生率。结果：纳入本研究的共有124名患者（156颗下颌第二磨牙）。其中,具有C形根管系统的有66颗,发生率为42.3%。结论：C形根管系统在下颌第二磨牙中具有较高的发生率;CBCT在下颌第二磨牙C形根管治疗过程中,能为临床医师提供更直观、更准确的影像学依据。     

生物膜细菌耐药性机制的研究近况

细菌形成生物膜,对抗生素产生较强耐药性,是许多慢性感染性疾病难以治愈的重要原因。生物膜细菌耐药性的产生,主要是由于形成抗生素渗透障碍;生物膜细菌生长速度减慢;及其独特的生物学特征所致,最终引起其对药物的敏感性降低,或产生抵抗性。     

牙髓干细胞分化过程中L型钙离子通道羧基末端的表达

目的:探讨牙髓干细胞(DPSCs)分化过程中L型钙离子通道羧基末端的表达。方法:利用酶消化法体外分离、培养大鼠牙髓干细胞;吉姆萨染色法检测大鼠牙髓干细胞的克隆形成能力;神经诱导体系下诱导牙髓干细胞向神经样细胞分化,免疫荧光染色检测细胞分化后胶质纤维酸蛋白(glial fibrillary acidic pro-tein,GFAP)的表达和细胞分化前后L型钙离子通道Cav 1.2及羧基末端的表达。结果:牙髓干细胞的克隆形成能力为每1 000个细胞形成2～17个克隆;免疫荧光染色检测诱导后细胞GFAP表达阳性;免疫荧光染色检测显示:牙髓干细胞分化前L型钙离子通道Cav 1.2羧基末端表达于细胞膜上,细胞分化后羧基末端同时表达于细胞膜上和细胞核中。结论:L型钙离子通道Cav 1.2羧基末端在牙髓干细胞分化过程中发生核转位,羧基末端可能在牙髓干细胞的分化过程中发挥着一定的作用。     

远缘链球菌黏附与游离状态下合成胞外多糖的比较

目的：比较远缘链球菌在游离和黏附状态下合成水溶性、水不溶性多糖的能力并探讨其原因。方法：在不同培养时间和多种蔗糖浓度条件下,对远缘链球菌进行摇动培养和静止培养,以模拟该菌在游离和黏附的状态下生长。采用蒽酮法测定细菌合成的水溶性和水不溶性多糖的含量,实验数据采用SPSS10.0软件包分析,选用单因素方差分析的Dunnett双侧检验比较组间的差异有无统计学意义。结果：生物膜形成发展期,游离菌合成的水溶性多糖随培养时间的延长而增多,黏附菌合成的水溶性多糖则随时间呈下降趋势;在生物膜成熟期,黏附菌合成的水不溶性多糖多于游离菌（P〈0．05）,而两者合成的水溶性多糖量的差异无显著性（P〉0．05）。细菌合成的水溶性、水不溶性多糖随蔗糖浓度的增加而增加;在各个蔗糖浓度条件下,黏附菌合成的水不溶性胞外多糖量显著多于游离菌（P〈0.05）,而水溶性胞外多糖的量差异不大（P〉0．05）。结论：培养时间和蔗糖浓度增加,导致远缘链球菌合成的水不溶性胞外多糖较游离状态明显增加;生物膜特殊的生长环境,是造成这种差异的可能原因。     

血小板衍生生长因子-BB对骨髓间充质干细胞多向分化及自噬相关蛋白表达的影响

目的观察血小板衍生生长因子-BB（platelet derived growth factor-BB, PDGF-BB）对骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells, BMSCs）多向诱导分化以及自噬相关蛋白表达的影响;建立异位牙髓再生模型,探讨PDGF-BB对再生牙髓样组织中自噬相关蛋白表达的影响。方法体外分离鉴定大鼠BMSCs,随机分为4组,每组培养基中分别加入0、10、50、100 ng/mL PDGF-BB,通过CCK-8、Transwell、qRT-PCR及细胞免疫荧光染色技术,检测不同浓度PDGF-BB对BMSCs增殖、迁移、多向诱导分化及自噬相关蛋白表达的影响,确定PDGF-BB趋化BMSCs细胞归巢的最佳工作浓度范围。依据是否放入PDGF-BB,将试验大鼠随机分为两组： 对照组（Collagen Type Ⅰ）,PDGF-BB诱导组（50 ng/mL PDGF-BB+Collagen Type Ⅰ）,将PDGF-BB联合Collagen Type Ⅰ支架移植入经过根管预备后的离体牙根管内,并移植于大鼠腹部皮下。分别于术后2、4个月,采用免疫组化染色技术观察异位再生牙髓样组织的再生效果及其自噬相关蛋白ATG5和LC3的表达。结果CCK-8结果显示,BMSCs增殖活性随PDGF-BB浓度升高递增（P<0.05）;Transwell结果显示,细胞迁移数随PDGF-BB浓度升高递增（P<0.05）;qRT-PCR结果显示,OPN、Runx2、MAP2、β-Ⅲ-tubulin mRNA表达量随PDGF-BB浓度升高递增（P<0.05）,当PDGF-BB浓度达到100 ng/mL时,mRNA表达量达到最大值;细胞免疫荧光染色结果显示,ATG5和LC3阳性细胞数量随PDGF-BB浓度升高递增,50 ng/mL PDGF-BB诱导后,ATG5和LC3阳性细胞数最大;术后4个月PDGF-BB诱导组得到的再生牙髓样组织形态与天然人牙髓组织相近,其ATG5、LC3蛋白表达高于对照组（P<0.05）。结论PDGF-BB能够促进大鼠BMSCs增殖,对BMSCs具有显著趋化作用。PDGF-BB能够促进大鼠BMSCs向成骨细胞及神经细胞分化,并促进自噬相关蛋白的表达。联合使用PDGF-BB可以有效获得内源性BMSCs迁移,促进大鼠体内牙髓样组织异位再生,及自噬相关蛋白表达。