卵巢癌uPA及HPA的表达与肿瘤转移的相关性研究

目的探讨尿素酶型纤溶酶原激活物(urokinase-type plasminigen activator,uPA)、乙酰肝素酶(heparanase,HPA)在卵巢上皮癌和淋巴结转移癌中表达及其与肿瘤侵袭的关系。方法应用免疫组化SABC法,对65例卵巢上皮肿瘤手术标本进行uPA和HPA蛋白表达的测定。结果uPA、HPA在卵巢上皮癌中阳性表达率分别为66.7%、51.1%,其明显高于良性肿瘤及正常组织,有淋巴结转移的肿瘤的阳性表达率分别为78.1%、62.5%,无淋巴结转移的肿瘤阳性表达率分别为38.1%、23.1%,uPA和HPA高表达与卵巢癌侵袭和淋巴结转移关系密切(P<0.05)。uPA和HPA在卵巢癌中的表达无显著性差异(P>0.05)表达成正相关(r=0.724)。结论uPA和HPA蛋白的表达与卵巢癌的侵袭和转移有显著的相关性。     

乙酰肝素酶基因转染SKOV3细胞对细胞增殖、黏附、侵袭能力的影响

背景与目的：乙酰肝素酶（heparanase，HPA）是能降解细胞外基质和基底膜的β-D-葡萄糖醛酸内切酶。HPA在人类正常组织局限于胎盘和免疫器官有表达，但在许多恶性肿瘤中有高水平的表达，促进了肿瘤的侵袭和转移。本文探讨乙酰肝素酶基因转染卵巢癌SKOV3细胞后对细胞生长、黏附、侵袭能力的影响。方法：以携带HPA基因的质粒（pCDNA3．0-HPA）经脂质体介导转染SKOV3细胞。RT—PCR法检测转染后HPAmRNA表达水平；MTT法检测SKOV3细胞生长曲线及细胞与细胞外基质的黏附；同质黏附试验和细胞分离试验检测细胞间的黏附和分离能力；利用transwell小室检测卵巢癌细胞SKOV3细胞的侵袭能力；流式细胞仪测细胞周期；免疫组化法检测卵巢癌细胞中HPA蛋白表达。结果：与对照组和空载组比较，转染组HPA mRNA水平上调，差异有显著性（t=-128．726，-96．959，P〈0．01）；细胞周期中S期指数明显增多；细胞生长曲线显示细胞生长速度增快；对细胞外基质的黏附率明显升高（t=11．824，11．234，P〈0．01）；同质黏附率降低（t=-14．455，-18．348，P〈0．01）；细胞分离率增强（x^2=869．847^b，796．068^b，P〈0．01）；穿透重组基底膜的细胞数目显著增高（t=11．964。12．263，P〈0．01）；细胞浆中的HPA蛋白表达显著上升。结论：转染HPA基因可以促进卵巢癌细胞的生长增值，增强卵巢癌细胞的侵袭转移能力。     

siRNA抑制卵巢癌细胞株SKOV3 HPA基因表达的研究

目的: 〖HT5"SS〗研究siRNA对卵巢癌细胞株SKOV3中乙酰肝素酶(heparanase,HPA)基因表达的抑制作用。〖HT5W〗方法: 〖HT5"SS〗设计合成两对HPA编码基因的反向重复序列,中间间隔9个核苷酸序列,通过定向克隆至载体PGenesil1,构建siRNA真核表达载体,经稳定转染SKOV3细胞后应用RTPCR、realtime PCR及免疫组化技术检测卵巢癌细胞中HPA基因mRNA及蛋白表达水平的抑制情况。〖HT5W〗结果: 〖HT5"SS〗测序证实成功地构建了编码2条shRNA的siRNA真核表达载体。通过RTPCR、realtime PCR及免疫组化技术检测转染siRNA的SKOV3细胞,与对照组相比,HPA mRNA表达水平和蛋白表达水平明显降低。〖HT5W〗结论:〖HT5"SS〗构建的PGenesil1(+)HPA重组质粒能有效的抑制HPA基因在卵巢癌细胞株SKOV3中的表达,为研究HPA基因在肿瘤细胞中的调节途径和肿瘤的基因治疗提供了新的方法。     

DOC2蛋白在宫颈癌组织中的表达及临床意义

目的研究DOC2蛋白在宫颈癌组织中的表达及临床意义。方法采用免疫组化SABC法检测18份正常宫颈、17份慢性宫颈炎、129份宫颈癌组织中DOC2的表达情况。结果宫颈癌组织中DOC2的蛋白表达率显著低于正常宫颈和慢性宫颈炎组织(P<0.01),并且DOC2蛋白表达与宫颈癌患者临床分期、组织类型、分化程度和淋巴结转移无显著相关性。结论DOC2的低表达与宫颈癌的发生、发展密切相关,但与肿瘤分级无明显相关性,它的表达低下或缺失可能是宫颈恶性变的早期事件。     

双基因shRNA干扰乙酰肝素酶在卵巢癌细胞中表达的实验研究

目的：采用编码2条短发卡式RNA(shRNA)的抗乙酰肝素酶(heparanase,Hpa)特异性载体干扰卵巢癌细胞中Hpa的表达,观察其对肿瘤生长转移的抑制作用。方法：以脂质体介导的方法将自行设计和构建的抗Hpa短发卡式RNA (Hpa-shRNA)基因真核表达载体稳定转染人卵巢癌细胞SKOV3；流武细胞仪鉴定转染效率,免疫组化和实时定量RT-PCR检测转染前后卵巢癌细胞中Hpa蛋白和mRNA表达,Boyden小室观测细胞增殖和侵袭能力的变化,透射电镜观察卵巢癌细胞超微结构改变。结果：Hpa mRNA表达在SKOV_3-Hpa(转染Hpa)明显升高(P＜0．01),SKOV3-Hpa-shRNA(转染Hpa- sh RNA)显著降低(P＜0．01),SKOV3-DZ-shRNA(转染非特异性sh RNA片段)和SKOV3无显著性差异(P＞0．05)。电镜下,SKOV3-Hpa组Hpa蛋白表达最为明显,SKOV3-Hpa-shRNA Hpa蛋白则最低,各组间比较差别有显著性意义(P＜0．01)。SKOV3-Hpa细胞器发达,细胞表面绒毛丰富,细胞间连接稀少。SKOV3-Hpa-shRNA以变形为主,细胞表面绒毛少,细胞器不发达,部分见线粒体皱缩,肿胀和空泡样改变。SKOV3-Hpa、SKOV3-DZ-shRNA和SKOV3-Hpa-shRNA 3种细胞穿过人工基底膜的细胞数分别为82．3±9．16,36．1±8．73和18．6±10．5,各组间比较有显著性差异(P＜0．01)。结论：双基因Hpa特异性shRNA可显著抑制卵巢癌细胞Hpa表达,降低细胞侵袭能力。     

DOC2抑制对宫颈癌SiHa细胞系的生长

目的:探讨卵巢癌缺失2(DOC2)基因对宫颈癌SiHa细胞系生长的抑制作用. 方法: 采用基因转染技术,将含有全长DOC2cDNA的真核重组表达质粒和空载体质粒(pcDNA3.1)转染到人宫颈癌SiHa细胞系(无DOC2基因的表达)中,了解其对细胞增殖能力及细胞周期的影响. 结果: 转染DOC2基因的宫颈癌细胞生长受到抑制(P《0.05),其在软琼脂克隆形成能力明显降低(P《0.05). DOC2有使G1期细胞比例增高、S期细胞比例下降的趋势,但SiHa细胞和SiHa-pcDNA3.1细胞之间无显著差异. 结论: DOC2基因能抑制宫颈癌细胞系的增殖.     

持续性牵张力在高糖状态下对子宫平滑肌细胞收缩蛋白表达的影响

目的：探讨持续性牵张力在高糖环境下对大鼠子宫平滑肌细胞催产素受体和前列腺素受体表达的影响。方法：体外培养大鼠子宫平滑肌细胞,高糖作用不同时间后,观察高糖状态下大鼠子宫平滑肌细胞催产素受体和前列腺素受体表达变化情况。对高糖状态下的肌细胞施加持续性牵张力,明确牵张力对肌细胞催产素受体和前列腺素受体表达的影响以及高糖和牵张力之间的协同作用,同时采用晚期糖基化终末产物（ＡＧＥｓ）抑制剂（ｓＲＡＧＥ）拮抗高糖作用作为对照,比较加入抑制剂后,催产素受体和前列腺素受体表达变化情况。结果：单独高糖培养或单独持续性牵张力都可导致大鼠子宫平滑肌细胞裂解液中催产素受体和前列腺素受体表达量上升,二者同时施加,可使催产素受体和前列腺素受体表达进一步上升,并有一定的协同效应。加入sRAGE后均可使催产素受体和前列腺素受体表达部分下降,但仍高于生理糖浓度组。结论：高糖状态及牵张力均可促进肌细胞催产素受体和前列腺素受体表达增加,并有一定协同作用,AGEs参与了这一过程,但并不是唯一途径。     

乙酰肝素酶shRNA双基因共表达真核载体的构建和筛选

目的：构建并筛选有效的、编码2条shRNA的乙酰肝素酶（Hpa）特异性基因真核表达载体．方法：分别设计、化学合成6对寡核苷酸单链,经退火、连接和磷酸化后得到Hpa shRNA双链,将两两随机问隔4～8个碱基后定向克隆入带有各自的U6启动子和终止码、共同的绿色荧光蛋白（green fluoreseent protein,EGFP）基因和Neo基因的pGenesil-1中,构建3条含两段Hpa基因shRNA的pGenesil-1-Hpa—shRNA真核表达载体,转染卵巢癌细胞株SKOV3,流式细胞仪和荧光显微镜下观察转染效率,免疫组化分析Hpa蛋白表达．结果：酶切与测序证实pGenesil-1-HPSE—shRNA构建成功,无任何碱基突变,3组质粒转染细胞均有Hpa表达的变化,3种不同shRNA质粒转染细胞后Hpa蛋白表达有明显差别．结论：构建并筛选了针对Hpa特异性的双基因shRNA真核表达载体pGenesil-1-Hpa-shRNA．     

IOM孕期体质量控制标准对上海地区孕妇的适用情况初探

目的:评估美国科学院医学院(IOM)孕期体质量控制标准是否适用于上海地区孕妇。方法:回顾性收集2014年1月至2015年3月于同济大学附属第一妇婴保健院分娩产妇的孕期体质量变化及妊娠结局资料,按WHO体质量分类标准将孕前体质量分为体质量过低组、正常组、超重组、肥胖组,按孕期体质量控制是否符合IOM标准进行分组(未达标、达标、超标),比较不同组别包括出生体质量在内的各种妊娠结局,分析IOM体质量控制标准在上海地区人群中的适用情况。结果:纳入研究资料齐全孕妇6915例,体质量过低、正常、超重、肥胖的孕妇分别占15.7%(1086例)、76.4%(5281例)、7.3%(502例)及0.7%(46例),仅43.3%(2991/6915)孕妇孕期体质量控制达到IOM体质量控制标准。未达标、达标及超标组间,除低体质量组的巨大儿发生率,正常组的子痫前期、妊娠期糖尿病、剖宫产率、巨大儿发生率、低出生体质量及巨大儿总发生率,超重组的妊娠期糖尿病、巨大儿发生率外,其余差异均无统计学意义(P0.05)。孕期体质量变化与低出生体质量儿及巨大儿联合风险曲线图显示,当孕期体质量控制低于IOM时,风险最低。结论:IOM推荐孕期体质量控制范围不适用于上海地区孕妇,上海地区孕妇可能需要更严格的孕期体质量控制以改善包括新生儿出生体质量在内的妊娠结局。     

不同方法治疗输卵管妊娠的疗效对比

目的 探讨腹腔镜保守手术治疗输卵管妊娠的临床疗效及预后.方法 275例输卵管妊娠患者分别采用腹腔镜保守手术、开腹保守手术及药物保守治疗,对比观察3组治疗的临床疗效、输卵管复通率、受孕率及 再次宫外孕几率.结果 腹腔镜保守治疗组与开腹手术组及药物保守治疗组比较效果最好,输卵管通畅率及宫内妊娠率最高,再次宫外妊娠发生率最低,差异有显著性(P＜0.05).结论 腹腔镜保守手术治疗输卵管妊娠不仅疗效肯定,而且提高了宫内妊娠率,降低了再次异位妊娠率,成为有生育要求的患者的首选治疗方法.