p75NTR在大鼠外胚间充质干细胞不同融合状态中的表达差异与矿化相关性研究

目的 探讨不同融合状态对p75 neurotrophin receptor(p75 NTR) 在外胚间充质干细胞(ectomesenchymal stem cells,EMSCs) 中的表达影响.方法 用酶消化法获取SD大鼠胚胎12. 5 d(E12. 5d) EMSCs,以不同细胞密度铺板,贴壁后即获得4种融合状态: 半融合状态(1. 0 × 104 /cm2 ) 、融合前状态(1. 5 × 104 /cm2 ) 、融合状态(2. 5 × 104 /cm2 ) 、融合后状态(3. 5 × 104 /cm2 ) .检测4种融合状态细胞矿化诱导前后p75NTR、Runt相关转录因子2(Runx2) 和碱性磷酸酶(ALP) 、Ⅰ型胶原蛋白(Col1) 在mRNA水平和蛋白水平的表达,茜素红染色检测钙盐沉积情况.结果 矿化诱导0 d时, p75NTR mRNA和蛋白在融合状态组表达最高,Runx2、ALP、Col1在4种融合状态表达水平无明显差异.矿化诱导3、7 d时,融合状态组p75NTR、Runx2、ALP mRNA表达水平均显著高于其他3组(P＜0. 05);同时融合状态组p75NTR、Runx2、Col1蛋白表达水平最高,差异具有统计学意义(P＜0. 05) .矿化诱导21 d时,融合状态组钙盐沉积量高于其他3组(P＜0. 01) .结论 不同融合状态p75NTR表达差异显著,在融合状态组p75NTR表达最高,此时细胞矿化能力最强,表明p75NTR的表达与矿化呈正相关.