肿瘤相关巨噬细胞调控基质金属蛋白酶促口腔鳞癌细胞侵袭转移的实验研究

目的：探讨肿瘤相关巨噬细胞（tumor-associated macrophages,TAMs）对口腔鳞癌细胞基质金属蛋白酶（matrix metall-proteinases,MMPs）表达以及其对口腔鳞癌细胞侵袭转移的影响。方法：用佛波脂（phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA）和巨噬细胞集落刺激因子（macrophage colony-stimulating factor,M-CSF）刺激人单核／巨噬细胞株 THP-1促其形成 TAMs,收集其上清液作为 TAMs 条件培养基培养口腔鳞癌细胞,应用实时定量 RT-PCR、Western blot 方法检测 TAMs 条件培养基作用前后口腔鳞癌细胞 MMPs 表达的差异,应用 Transwell 侵袭实验检测口腔鳞癌细胞侵袭转移能力的差异。结果：THP-1细胞在 PMA 和 M-CSF 作用后贴壁生长,分化成 TAMs。口腔癌细胞在 TAMs 条件培养基作用48 h 后,MMP-2、MMP-9、MMP-13 mRNA 的表达水平显著增高,相同条件下蛋白质的表达水平也明显增高。TAMs 条件培养基作用24 h 后的口腔鳞癌细胞侵袭转移能力显著增强。结论：TAMs 可以上调口腔鳞癌中 MMPs 的表达并促进其侵袭转移。     

低浓度尼古丁对大鼠硬腭软组织缺损愈合的影响

背景：最新系列研究发现低浓度尼古丁具有促进血管生成,加速皮肤伤口愈合的作用,但低浓度尼古丁能否在颌面部软组织创伤修复中尤其是口腔黏膜创伤修复中发挥作用目前还不清楚。 目的：观察低浓度尼古丁对大鼠硬腭黏膜缺损修复的影响。 方法：Wistar大鼠65只,于硬腭第一磨牙近中至第三磨牙远中的黏膜作一直径为3 mm的圆形切创缺损。造模后局部给药,大鼠随机分成低浓度尼古丁＋凝胶组、凝胶组、空白对照组,每组动物分别在3,7,10,14 d处死,苏木精-伊红染色观察组织愈合过程,并通过大体标本结合图像测量分析比较各组间伤口愈合差异。 结果与结论：修复后3 d各组间愈合情况差异无显著性意义;修复后7,10 d组低浓度尼古丁＋凝胶组愈合快于凝胶组和空白对照组（P 〈0.05）;修复后14 d各组创面已基本愈合,各组间差异无显著性意义。提示低浓度尼古丁可能具有促进大鼠硬腭膜缺损修复的作用。     

网络互评系统在口腔医学实践教学中的应用初探

口腔医学实时训练及网络互评系统,特别适合于对临床实践训练的过程评价。本互评系统引进闭环式互评模式,即通过学生与学生、学生与教师之间的相互反馈结果来保证实践教学过程评价的可靠性,弥补了以往开环式互评系统的不足,评价结果较为客观。口腔医学实时训练及网络互评系统实现了实践教学的过程控制,细化了学生能力的评价体系,促进了学生自主学习,反馈了教师教学要点。通过此系统平台,学生之间以作业为纽带共同来发现知识、解决问题,引导学生自主学习和相互学习,将学生互评和教师评价紧密结合起来,全方位展现教学要点,成为探索实现口腔医学转化式教育的有效途径,以符合社会发展新需求。     

上皮间质转化与创伤愈合的研究进展

上皮间质转化是指上皮细胞在特定条件下转化成间充质细胞的过程。在创伤愈合的复杂过程中，表皮细胞经历上皮间质转化过程进行创口的再上皮化，其间涉及多种细胞因子、转录因子等，本文就上皮间质转化与创伤愈合的研究进展做一综述。     

pEGFP—N1-Snail真核表达质粒的构建与表达

目的：构建pEGFP—N1-Snail真核表达质粒,并进行鉴定,转染SCC25肿瘤上皮细胞,检测其表达。方法：利用RT—PCR方法从SCC9肿瘤上皮细胞中提取Snail基因片段,与pMD18-T载体连接,构建pMD18-T—Snail重组质粒,挑选阳性克隆,PCR鉴定后送测序。重组质粒双酶切后与pEGFP—N1真核表达载体连接,构建pEGFP—N1-Snail真核表达质粒,进行测序、酶切鉴定,表明质粒构建成功。分别抽提pEGFP—N1及pEGFP—N1-Snail质粒,用脂质体2000转染SCC25肿瘤上皮细胞,RT．PCR检测Snail在该细胞中表达。结果：本实验成功构建了pEGFP—N1—Snail真核表达质粒,并在SCC25肿瘤上皮细胞中表达。结论：本实验结果为进一步研究Snail作为转录抑制因子诱导上皮间质转化提供实验基础。     

pEGFP-N1-Snail真核表达质粒的构建与表达

目的:构建pEGFP-N 1 Snail真核表达质粒,并进行鉴定,转染SCC25肿瘤上皮细胞,检测其表达.方法:利用RT-PCR方法从SCC9肿瘤上皮细胞中提取Snail基因片段,与pMD18-T载体连接,构建pMD18-T-Snail重组质粒,挑选阳性克隆,PCR鉴定后送测序(重组质粒双酶切后与pEGFP-N 1真核表达载体连接,构建pE(;FP-N1-Snail真核表达质粒,进行测序、酶切鉴定,表明质粒构建成功.分别抽提pEGFP-N1及pEGFP-N 1-Snail质粒,用脂质体2000转染SCC25肿瘤上皮细胞,RT-PCR检测Snail在该细胞中表达.结果:本实验成功构建了pEGFP-Nl-Snail真核表达质粒,并在SCC25肿瘤上皮细胞中表达.结论:本实验结果为进一步研究Snail作为转录抑制因子诱导上皮间质转化提供实验基础.     

TNF-α调控基质金属蛋白酶促口腔癌细胞侵袭转移的实验研究

[摘要] 目的 探讨TNF-α对口腔癌细胞MMPs表达及其对口腔癌侵袭转移作用的影响。方法 用TNF-α刺激口腔癌细胞,通过实时荧光定量RT-PCR、Western blot,分别从mRNA和蛋白质的水平检测TNF-α作用前后MMPs表达的变化,应用Transwell侵袭实验检测作用前后口腔癌细胞侵袭转移能力的变化。结果 TNF-α分别作用24 h、48 h、72 h后,口腔癌细胞中MMP-2、MMP-9、MMP-14 mRNA的表达明显升高。作用48h后,口腔癌细胞中MMP-2、MMP-9、MMP-14蛋白质的表达同mRNA一致,也明显增高。TNF-α作用后的口腔癌细胞侵袭转移能力明显增强。结论 TNF-α可以通过上调MMPs的表达促进口腔癌的侵袭和转移能力。     

人口腔癌相关成纤维细胞的分离培养及鉴定

目的：分离培养及鉴定口腔癌相关成纤维细胞（ CAFs）,为探究CAFs可能在肿瘤微环境促进口腔癌细胞的侵袭转移中发挥重要作用奠定基础。方法：用组织块培养法和酶消化法分离培养、纯化原代口腔癌相关成纤维细胞CAFs和口腔黏膜正常成纤维细胞（ NFs）;细胞免疫荧光技术及免疫蛋白印迹法对口腔CAFs和NFs进行鉴定。结果：口腔CAFs和NFs分离培养成功,口腔CAFs呈长梭形,达到一定密度时呈多层生长,排列紊乱;NFs呈多胞质突的扁平星状,无重叠生长现象,排列有一定方向性。上皮标志物细胞角蛋白18（ CK18）免疫荧光染色在口腔CAFs和NFs均呈阴性,间质标志物波形蛋白（ Vimentin）染色均呈阳性。α?平滑肌动蛋白（α?SMA）、成纤维细胞特异性蛋白?1（FSP?1）,成纤维细胞激活蛋白（FAP）、血小板衍生生长因子受体α（ PDGFR?α）在CAFs染色呈阳性,而在NFs中染色呈阴性。结蛋白（ Desmin）在CAFs和NFs中染色均呈阳性。蛋白表达水平上,相对于NFs,CAFs中α?SMA、PDGFR?α蛋白表达呈升高趋势,FSP?1呈下降趋势,而FAP、Desmin在 NFs和CAFs中表达无明显差异。结论：CAFs与NFs相比,在形态结构、生长方式、蛋白表达等方面均有明显差异。     

一种釉质特异性生物矿化模板的构建

目的 构建一种自组装类釉原蛋白两亲性寡肽,作为釉质仿生矿化的有机模板。方法依据釉原蛋白分子在釉质形成中自组装成“纳米球”超分子结构的机制,参照目前“自组装多肽类生物材料”的设计特点,通过对釉原蛋白分子功能性残基进行改性,构建“类釉原蛋白两亲性寡肽”生物矿化模板,采用固相合成法合成并纯化,经质谱仪、高效液相色谱仪等鉴定。在寡肽溶液中加入1 mol/L的CaCl2溶液观察其能否自组装;将组装后的寡肽涂于透射电镜的铜网上,用2.5% 的戊二醛固定1 h后先置于常温或40 ℃下10 mmol/L 的CaCl2 溶液中1 h,去离子水漂洗后再置于5 mmol/L 的Na2HPO4 溶液中1 h,5个循环后取出自然干燥,通过扫描电镜（SEM）,透射电镜（TEM）及选区电子衍射（SAEDS）观察表征。结果 类釉原蛋白两亲性寡肽序列为C18H35O-Thr-Lys-Arg-Glu-Glu-Val-Asp,高效液相色谱仪（HPLC）示多肽纯度为98.29%,质谱仪（MS）示肽的分子质量为1 142.41 u。通过Ca2+可使其自组装为纳米纤维超微结构的凝胶态。通过交替矿化发现组装后的类釉原蛋白两亲性寡肽能摄取溶液中的钙磷离子,在寡肽纳米纤维表面成核矿化,形成磷灰石晶体。结论 成功构建了一种类釉原蛋白两亲性寡肽,可以作为釉质仿生的特异性生物矿化模板,用于诱导釉质再矿化研究。