血小板衍生生长因子BB对牙周膜干细胞生物学特性的影响

目的：观察血小板衍生生长因子BB（platelet derived growth factor BB, PDGFBB）基因修饰人牙周膜干细胞（human periodontal stem cells, hPDLSCs）的生物学特性,探讨PDGFBB对hPDLSCs细胞增殖、迁移及诱导成骨的影响。方法：分离并扩增hPDLSCs,免疫荧光染色鉴定细胞表面标志和成骨诱导分化能力。通过慢病毒载体介导PDGFBB基因转染hPDLSCs,转染后,采用CCK-8及划痕实验检测其对细胞增殖、迁移的影响。利用实时荧光定量PCR分析PDGFBB基因转染后hPDLSCs细胞内成骨相关基因和成血管相关基因VEGF mRNA的表达水平。采用SPSS 22.0软件包对数据进行统计学分析。结果：采用组织块培养及有限稀释法成功获得hPDLSCs。PDGFBB转染hPDLSCs后,细胞形态良好,与空病毒组和未转染组相比,转染组细胞增殖及迁移能力显著上升,OPN、COL-1和VEGF mRNA表达水平显著上调（P<0.05)。结论：慢病毒载体能在体外将PDGFBB基因转入hPDLSCs,获得持续、稳定表达。PDGFBB可促进hPDLSCs细胞的增殖和迁移,上调成骨和成血管相关基因的表达。     

人牙髓干细胞条件培养基通过AMPK/PGC-1α途径改善氯化钴诱导的颏舌肌成肌细胞低氧损伤

目的： 研究氯化钴 (CoCl₂) 模拟的低氧对颏舌肌成肌细胞活性和氧化应激的影响,探讨人牙髓干细胞 （human dental pulp stem cells,hDPSCs）条件培养基 (conditioned medium,CM)保护作用的机制与AMPK/PGC-1α通路的关系。方法： 分离、培养及鉴定hDPSCs,通过超滤浓缩法提取条件培养基;分离、培养小鼠颏舌肌成肌细胞,分为对照组、CM组、CoCl₂组、CoCl₂+CM组。采用CCK-8法检测颏舌肌成肌细胞的活性,分别使用DCFH-DA和MitoSOX Red评估细胞内和线粒体活性氧 (reactive oxygen species,ROS) 水平,实时定量PCR分析NRF-1、NRF-2线粒体相关基因的表达,Western 印迹法检测PGC-1α、p-AMPK、总AMPK蛋白表达。采用SPSS 22.0软件包对数据进行统计学分析。结果： 颏舌肌成肌细胞经过200 μmol/L CoCl₂处理24 h后增殖显著下降（P<0.05）,细胞内和线粒体内ROS含量显著上升（P<0.05）;与CoCl₂组相比,加入hDPSCs-CM后,细胞活性显著增加（P<0.05）,胞内和线粒体内ROS含量显著降低 (P<0.05);hDPSCs-CM显著上调颏舌肌成肌细胞中pAMPK和PGC-1α蛋白的表达水平以及PGC-1α下游的线粒体效应物NRF-1、NRF-2的mRNA表达水平 (P<0.05)。结论： 人牙髓干细胞条件培养基能减轻CoCl₂诱导的颏舌肌成肌细胞低氧损伤,其机制可能与AMPK/PGC-1α通路的调节有关。