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1.
目的 探索如何抑制嗜酸细胞的趋化作用,选择β-趋化因子巨噬细胞炎性蛋白4(MIP4)的突变性(Met-MIP4)作为趋化因子受体3的拮抗剂,将Met-MIP4基因在原核细胞中进行表达。方法 设计MIP4基因的PCR引物并进行氨基酸突变,将MIP4N末端的丙氨酸突变为蛋氨酸,以正常人肺酸突变,将MIP4N末端的丙氨酸突变为蛋氨酸。以正常人肺cDNA文库为模板,PCR方法获取Met-MIP4基因,克隆入载体pUC19,测序验证序列已得到突变,将正确的基因插入到GST融合表达载体pGEX-4T中,以IPTG诱导表达。结果 PCR产物为220bp左右的片段,连接入pUC19质粒后测序验证获得正确突变,构建的pGEX-4T融合表达载体在大肠杆菌中表达,经SDS-PAGE凝胶电泳显示有大小约34kU的新生融合蛋白表达。结论 成功突变并克隆了β-趋化因子MIP4基因,SDS-PAGE表明,与GST融合的Met-MIP4突变体已得到表达,为进一步研究其生物学活性奠定了基础。 相似文献
2.
抗前列腺特异抗原单链抗体/人羧肽酶A融合基因的构建及表达 总被引:4,自引:3,他引:1
目的 构建抗前列腺特异抗原(PSA)单链抗体(scFv)/人羧肽酶A(hCPA)融合基因,为前列腺癌的抗全导向酶-前体药物疗法奠定基础。方法 在已克隆抗PSAscFv和hCPA基因的基础上,用加端PCR分别在scFv基因的3′端和hCPA基因的5′端加上部分连接肽(linker)基因序列,回收后混合。应用重叠延伸拼接法,将抗PASscFv基因和hCPA基因通过linker序列串联为scFv/hCPA融合基因;并将构建的融合基因克隆到融合表达载体pGEX-4T-1中进行表达。结果 序列测定结果表明,构建的抗PSAscFv/hCPA融合基因中scFv和hCPA序列均正确,scFv和hCPA间有18bp的linker序列,推导的氨基酸序列为GSGGSG,与设计的序列相符,融合基因经IPTG诱导表达重组蛋白并以SDS-PAGE分析,在Mr为94000左右出现一条新生蛋白带,表达量约占菌体总蛋白的34%。结论 成功构建并原核表达了抗PSAscFv/hCPA融合基因。 相似文献
3.
体温过高大鼠肝细胞膜磷脂代谢和β-肾上腺素受体的改变 总被引:1,自引:0,他引:1
使用高效液相色谱法,酸滴定法,气相色谱法从膜磷脂含量、磷脂酶A2(PLA2)活性及花生四烯酸(AA)含量三个方面研究了体温过高大鼠肝细胞膜磷脂代谢的变化;用放射配基结合分析法测定了β肾上腺素受体的变化;同时观察了预先使用PLA2抑制剂米帕林对这些变化的调节作用。结果表明,体温过高大鼠肝细胞膜磷脂分解代谢加强;β肾上腺素受体的最大结合容量(Bmax)和解离常数(kd)值也都明显减少。而预先使用米帕林的大鼠,除β肾上腺素受体的Bmax进一步下降外,其余所测各项指标与对照值无明显差异。 相似文献
4.
季少平 《河南大学学报(医学版)》2013,(3):153-157
基因表达与调控方面的研究改变了我们对RNA的认识。近年的研发现,长非编码RNA(lncRNA通常大于200碱基而区别于microRNA)参与了一些重要的生命过程,包括染色质修饰、基因转录和转录后调节、蛋白质的活性调节和亚细胞定位以及细胞结构的维持等。新的发现引起越来越多的重视,但这些仍只是非编码RNA的一小部分,人们相信随着研究的深入,lncRNA的调控网络将渐渐浮出水面,不仅对我们认识生命过程的新调节层面有很大帮助,而且具有极大的应用潜力,例如用于基因治疗等方面。 相似文献
5.
目的 从人T细胞中克隆Akt的PH结构域及其调节区基因并进行6-his和GST融合表达,研究二者的体外结合情况,为进一步研究Akt的调节区在其分子激活中的作用打下基础。方法 以RT-PCR的方法从人T细胞中扩增目的基因片段,测序证明序列正确,再将正确的目的基因片段定向克隆到表达载体pRSET-A和pGEX-4T-1中,以IPTG诱导,获得Akt的PH结构域及其调节区与6-his和GST的融合表达。表达的PH结构域融合蛋白经谷胱甘肽耦联的琼脂糖珠纯化,以pull-down法检测该PH结构域与6-his调节区的结合。结果 Akt的PH结构域和调节区基因序列完全正确。得到与GST和6-his的融合表达,表达产物有较高可溶性。结论 SDS-PAGE检测到PH结构域可在体外与调节区特异地结合。 相似文献
6.
增生性瘢痕和瘢痕疙瘩中PKC活性测定 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 测定增生性瘢痕和瘢痕疙瘩等瘢痕组织中PKC活性变化 ,探讨PKC在瘢痕形成中的作用。方法 利用PKC活化后催化底物多肽磷酸化 ,然后计数底物中掺入32 P的放射活性的原理 ,测定增生性瘢痕、瘢痕疙瘩、成熟瘢痕和正常皮肤组织中PKC活性。结果 增生性瘢痕和瘢痕疙瘩组织中PKC的活性显著高于成熟瘢痕和正常皮肤 (P <0 .0 0 1,分别高出正常皮肤 318.30 %和 5 19.0 7% ) ,瘢痕疙瘩高于增生性瘢痕 (P <0 .0 0 1,高出 48.6 0 % )而成熟瘢痕和正常皮肤间没有差异 (P >0 .0 5 )。结论 瘢痕组织中PKC活性升高且与增生程度相关 ,提示PKC可能参与了细胞增殖和合成物质的信号转导 相似文献
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增生性瘢痕和瘢痕疙瘩中PKC活性测定 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 测定增生性瘢痕和瘢痕疙瘩等瘢痕组织中PKC活性变化,探讨PKC在瘢痕形成中的作用。方法 利用PKC活化后催化底物多肽磷酸化,然后计数底物中掺入32P的放射活性的原理,测定增生性瘢痕、瘢痕疙瘩、成熟瘢痕和正常皮肤组织中PKC活性。结果 增生性瘢痕和瘢痕疙瘩组织中PKC的活性显著高于成熟瘢痕和正常皮肤(P<0.001,分别高出正常皮肤318.30%和519.07%),瘢痕疙瘩高于增生性瘢痕(P<0.001,高出48.60%)而成熟瘢痕和正常皮肤间没有差异(P>0.05)。结论 瘢痕组织中PKC活性升高且与增生程度相关,提示PKC可能参与了细胞增殖和合成物质的信号转导。 相似文献
8.
人IgG3上游铰链区/p53四价功能域融合基因的构建及空间构象分析 总被引:9,自引:1,他引:8
目的 构建人IgG3上游铰链区/p53四价功能域融合基因,并进行空间构象的分析,方法 利用递归PCR法,扩增人IgG3上游铰链区/p53四价功能域融合基因,并在融合基因5′端和3′端引入SalI与HindⅢ酶切位点,将融合基因克隆人puC19载体中,经酶切鉴定及序列测定证实后,利用计算机软件进行空间构象分析,结果 人IgG3上游铰链区/p53四价功能域融合基因,经酶切鉴定及测序证实,其大小及核苷酸序列正确,与设计完全一致。计算机软件分析显示,融合基因表达产物可自动装配成四聚体,并具有4条柔性好的长多肽,可确保与其融合的其他基因片段空间构象的独立性。结论 人IgG3上游铰链区/p53四价功能域融合基因的成功构建,为进一步研制多价抗体奠定了基础。 相似文献
9.
季少平 《河南大学学报(医学版)》2012,(1):1-4
少突胶质细胞(OL)为神经元的轴突提供髓鞘,起着支持、绝缘和营养作用,对维持电脉冲的快速和准确传递以及神经系统功能完整性十分重要。在不明原因作用下,髓鞘退化甚至消失,可引起一系列神经系统相关疾病。中枢神经系统内存在少突胶质前体细胞(OPC),具有分化成熟、再生髓鞘和修复缺损的潜力。最近的研究显示,OPC分化成熟的调控多采用逐渐解除抑制的方式使分化成熟相关基因表达而启动细胞分化与成熟。因此,了解OPC分化的分子机制,对于研究调控的关键环节或人工调控位点具有重要的理论和实际应用价值。 相似文献
10.
米帕林对β-肾上腺素能受体的作用邢成,季少平,王鲁明,吕宝璋(北京军事医学科学院基础医学研究所,北京100850)米帕林(mepacrine,Mep)是磷脂酶A,及磷脂酶C的抑制剂,也是一种膜稳定剂[1].我们曾证实它在磷脂代谢和对β-肾上腺素能受体... 相似文献