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目的 构建小鼠H2B-绿色荧光蛋白（GFP）真核表达载体,为动态观察小鼠细胞中染色体的形态变化,进一步研究小鼠耐药细胞中双微体（DMs）的形成机制提供有效的分子工具。方法 利用RT-PCR的方法获得小鼠H2B cDNA,以羧基端插入pcDNA3.1/CT-GFP-TOPO载体上,构建H2B-GFP真核表达载体,经菌液PCR、酶切及DNA测序鉴定插入片段大小、方向及序列的正确性,提取质粒转染小鼠胚胎成纤维细胞系NIH3T3进行鉴定。结果 经菌液PCR、酶切和测序,证明小鼠H2B-GFP真核表达载体含有大小、方向及序列正确的H2B cDNA片段,转染NIH3T3后在细胞核中表达。结论 作者成功构建了同时携带有G418筛选位点及多酶切位点的小鼠H2B-GFP真核表达载体,为其在小鼠体外培养细胞中的表达奠定了基础。 相似文献
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冠状动脉疾病（CAD）和其最重要并发症——急性心肌梗塞（MI）是目前发达国家导致丧失劳动能力和死亡的主要原因。尽管CAD／MI的相关遗传基础还知之甚少，但其多发风险因素已确定，包括家族史、高血压、高胆固醇血症、肥胖、吸烟和糖尿病。虽然特异基因还未确定，但对患病同胞对进行基因组范围关联分析已确定CAD／MI4个易感座位。 相似文献
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冠状动脉疾病(CAD)和其最重要并发症———急性心肌梗塞(MI)是目前发达国家导致丧失劳动能力和死亡的主要原因。尽管CAD/MI的相关遗传基础还知之甚少,但其多发风险因素已确定,包括家族史、高血压、高胆固醇血症、肥胖、吸烟和糖尿病。虽然特异基因还未确定,但对患病同胞对进行基因组范围关联分析已确定CAD/MI 4个易感座位。作者研究了一个表现为常染色体显性遗传的CAD大家系,其中包括13名患者。用覆盖1~22号染色体的382个标记作整个基因组范围连锁分析,无重组,Lod值为4·19的标记D15S120为阳性连锁。确定CAD/MI常染色体显性基因… 相似文献
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目的鉴定1个黏多糖贮积症Ⅱ型(mucopolysaccharidosis type Ⅱ, MPS Ⅱ)家系的遗传变异, 并对变异位点艾杜糖醛酸-2-硫酸酯酶(IDS):c.323A>C进行功能学研究。方法收集中国北方地区1个五代83名个体的MPS Ⅱ家系, 其中包括4例患者。通过尿液黏多糖、Alder-Reilly小体检测对该病进行辅助诊断, 并对核心家系成员进行IDS酶活性检测;通过对MPS Ⅱ家系患者进行全外显子组测序及生物信息学分析, 筛选出该家系候选变异位点, 并通过PCR-Sanger测序进一步确定变异位点。最后, 针对致病基因变异位点, 将野生型IDS过表达质粒(pCMV-hIDS-WT)及携带突变位点的IDS过表达质粒(pCMV-hIDS-c.323A>C)分别转染COS-7细胞, 进行IDS酶活性检测。结果先证者(Ⅳ3)及Ⅳ4经尿液黏多糖、Alder-Reilly小体及IDS酶活性检测诊断为MPS Ⅱ, Ⅳ3、Ⅳ4、Ⅲ19和Ⅲ32基因检测均携带IDS:c.323A>C错义变异, 确诊为MPS Ⅱ患者;并有8名个体为IDS:c.323A>C错义变异... 相似文献
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