低氧诱导因子-1α在生物性骨改建和骨病中的作用

在骨早期发育过程中,尤其在胚胎发育过程中,组织低氧微环境对维持细胞分化能力具有重要作用.在骨形成后,手术、创伤及炎症等造成的局部低氧微环境对骨改建具有重要影响.成骨细胞、成软骨细胞及破骨细胞等骨系细胞的前体细胞均属于氧感应细胞,参与骨形成及骨改建的关键环节.作为对局部氧环境进行感受和应答的核心分子,低氧诱导因子-1α(...     

伤痛宁片鉴别方法研究

目的研究伤痛宁片中延胡索、白芷、香附等药味的快速鉴别方法。方法采用薄层色谱法对伤痛宁片中延胡索、白芷、香附等进行定性鉴别。结果结果表明该方法稳定,重现性好,专属性强。结论此方法可用于伤痛宁片的质量控制。     

低氧状态下骨细胞参与破骨细胞形成的作用机制研究

目的 探究低氧状态下骨细胞对破骨细胞形成的作用及其机制。方法 用去铁胺甲磺酸（DFO）刺激骨细胞系MLO-Y4建立体外低氧骨细胞培养体系。CCK-8实验检测DFO对MLO-Y4细胞增殖活性的影响;采用DFO处理后的MLO-Y4细胞培养液制备条件培养基诱导RAW264.7细胞分化,行抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色检测;利用实时荧光定量聚合酶链反应、细胞免疫荧光和蛋白质印迹（Western blot）检测DFO作用下MLO-Y4表达低氧诱导因子（HIF）-1α与核因子κB受体活化因子配体（RANKL）的情况;检测HIF-1α siRNA转染对MLO-Y4表达HIF-1α和RANKL的影响。结果 100 μmol·L ^-1 DFO作用24 h时MLO-Y4增殖活性升高,之后随着时间延长细胞增殖活性下降（P<0.01）。加入可溶性RANKL后,低氧组可见破骨细胞形成明显增加（P<0.001）。100 μmol·L ^-1 DFO作用下,HIF-1α mRNA表达稳定,RANKL mRNA的表达随时间明显变化,24 h时最高（P<0.01）;HIF-1α、RANKL蛋白表达升高（P<0.01）。低氧状态下siHIF-1α转染可降低HIF-1α和RANKL的表达（P<0.01）,破骨细胞减少（P<0.01）。结论 低氧状态下MLO-Y4可通过上调HIF-1α的蛋白水平促进RANKL的生成,进而加速RAW264.7细胞向破骨细胞分化。     

游离空肠修复下咽及颈段食管癌术后吻合口瘘发生的相关因素分析

目的探讨游离空肠瓣修复下咽及颈段食管癌术后缺损,发生吻合口瘘的相关原因。方法回顾性分析31例因下咽癌、颈段食管癌行手术切除,同期行游离空肠瓣修复缺损的病例资料。结果术后患者发生吻合口瘘与患者年龄、性别、术前放疗史无显著关联;但吻合口瘘的发生与BMI≥25、术后三天内体温≥38.5℃的患者有显著关联。结论游离空肠瓣修复下咽及颈段食管癌术后缺损,是目前手术治疗的首选方案,但术后吻合口瘘发生率高,应及早控制一切可能发生的因素。     

miRNA-31-5p在过量维甲酸抑制C2C12细胞增殖中的调控机制研究

目的 探讨miRNA-31-5p在过量维甲酸(Retinoic acid,RA)抑制小鼠肌原细胞系C2C12增殖中的作用机制.方法 在10 μmol/L RA及无RA条件下,qPCR检测C2C12细胞增殖过程中miRNA-31-5p及抗肌营养不良蛋白(dystrophine,Dmd)表达的水平;分别转染miRNA-31-5p mimics(miRNA-31-5p mimics组)、miRNA-31-5p inhibitor(miRNA-31-5p inhibitor组)、Duplex N.C(Duplex N.C组)及N.C inhibitor(N.C inhibitor组).用细胞增殖/毒性检测实验(CCK-8)检测0h,24 h,36 h及48 h的OD值,5-溴脱氧尿嘧啶核苷掺入实验(BrdU)检测48 h细胞中BrdU阳性细胞比率.在10 μmol/L RA条件下,qPCR检测C2C12细胞在下调miRNA-31-5p后,Dmd表达水平变化.结果 在10 μmol/L RA条件下,细胞中miRNA-31-5p在36 h及48 h的表达水平均明显高于相同时间点正常条件下的表达水平,P＜0.01;Dmd在36 h及48 h的表达水平均明显低于相同时间点正常条件下的表达水平,P＜0.01.CCK-8结果显示在0 μmol/L RA条件下,miRNA-31-5p过表达抑制C2C12细胞增殖,10 μmol/L RA条件下,细胞的增殖活性进一步降低;0μmol/L RA条件下,miRNA-31-5p低表达促进C2C12细胞增殖,10 μmol/L RA作用下,miRNA-31-5p inhibitor组细胞增殖活性在第48 h显著高于N.C inhibitor组,P＜0.01.10 μmol/L RA的作用下,miRNA-31-5p mimics组细胞BrdU阳性率与Duplex N.C组比降低27.6％,P＜0.05;miRNA-31-5p inhibitor组细胞BrdU阳性率与N.C inhibitor组相比升高24.1％,P＜0.05.转染48 h后,miRNA-31-5p inhibitor组Dmd的相对表达量较N.C inhibitor组明显上调,P＜0.01;在10 μmol/L RA作用下,miRNA-31-5p inhibitor组细胞Dmd的表达升高,与MC inhibitor组相比差异具有显著性意义.结论 miRNA-31-5p可参与10 μmol/L RA导致的C2C12细胞增殖抑制,而其可能的分子机制是通过对Dmd靶向作用实现的.     

低氧状态下IL-6对骨细胞表达RANKL的影响

目的 探讨低氧状态下炎症因子白介素-6(IL-6)对骨细胞分泌核因子κB受体活化因子配体(RANKL)的影响及相关机制.方法 建立大鼠下颌截骨术模型,应用IL-6和氯化钴(CoCl2)建立体外低氧炎症微环境培养MLO-Y4小鼠长骨骨细胞系,采用苏木素-伊红(HE)染色、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色和免疫荧光染色观...     

败酱片质量标准研究

目的：对败酱片（黄花败酱）建立质量标准。方法：以齐墩果酸、熊果酸为对照品,对方中败酱建立TLC鉴别;用高效液相色谱法对方中齐墩果酸、熊果酸进行测定。色谱条件：迪马Kr C18;流动相：乙腈-甲醇-水-乙酸铵（70∶10∶20∶0.5）;流速：1.0 mL/min;柱温：30℃;检测波长：215 nm。供试品溶液的制备：取样品约4 g,加入乙醇30 mL,置85℃水浴中加热回流提取,分取乙醇提取液15 mL,蒸干,残渣加盐酸溶液（2→10）10 mL水解1 h,用三氯甲烷液萃取,将萃取液蒸干,残渣加甲醇使溶解并定容,即得。结果：齐墩果酸在0.476 8～9.536 0μg范围内呈线性关系,平均加样回收率为99.5%;熊果酸在0.651 0～13.020 0μg范围内呈线性关系,平均加样回收率为103.3%。结论：本法操作简便,结果准确,重现性好,可以控制败酱片的质量。     

低氧状态下骨细胞参与破骨细胞形成的作用机制研究

目的 探究低氧状态下骨细胞对破骨细胞形成的作用及其机制。方法 用去铁胺甲磺酸（DFO）刺激骨细胞系MLO-Y4建立体外低氧骨细胞培养体系。CCK-8实验检测DFO对MLO-Y4细胞增殖活性的影响;采用DFO处理后的MLO-Y4细胞培养液制备条件培养基诱导RAW264.7细胞分化,行抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色检测;利用实时荧光定量聚合酶链反应、细胞免疫荧光和蛋白质印迹（Western blot）检测DFO作用下MLO-Y4表达低氧诱导因子（HIF）-1α与核因子κB受体活化因子配体（RANKL）的情况;检测HIF-1α siRNA转染对MLO-Y4表达HIF-1α和RANKL的影响。结果 100 μmol·L ^-1 DFO作用24 h时MLO-Y4增殖活性升高,之后随着时间延长细胞增殖活性下降（P<0.01）。加入可溶性RANKL后,低氧组可见破骨细胞形成明显增加（P<0.001）。100 μmol·L ^-1 DFO作用下,HIF-1α mRNA表达稳定,RANKL mRNA的表达随时间明显变化,24 h时最高（P<0.01）;HIF-1α、RANKL蛋白表达升高（P<0.01）。低氧状态下siHIF-1α转染可降低HIF-1α和RANKL的表达（P<0.01）,破骨细胞减少（P<0.01）。结论 低氧状态下MLO-Y4可通过上调HIF-1α的蛋白水平促进RANKL的生成,进而加速RAW264.7细胞向破骨细胞分化。